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图4。

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CAF-1缺失细胞中的检查点激活。(A类)对CAF-1 RNAi后的总细胞裂解物进行Western分析,以通过使用针对p53 S15、Chk1 S317和Chk2 T68的磷酸特异性抗体来监测检查点激活。整体Chk2水平不变(数据未显示)。将用羟基脲(20 mM)处理24小时的细胞提取液作为阳性对照,这将导致所有三种蛋白质磷酸化。(B类)对照细胞和CAF-1缺失细胞中检查点激活和BrdUrd掺入的时间进程。每孔接种三个盖玻片,并根据标准方案进行转染。在转染后24、36、48和60 h收集细胞,用BrdUrd脉冲处理10 min,并用p53的S15、Chk1的S317或BrdUrd的磷酸特异性抗体染色。24小时内的细胞只转染过一次。与对照组相比,36小时后BrdUrd掺入量出现了一些损失,转染后48小时,BrdUrd掺入量显著下降。(C)对单个CAF-1敲除细胞中的检查点激活和BrdUrd掺入进行比较的绘图,将其归一化以控制转染细胞。对照组和靶向寡核苷酸1的CAF-1抗体在每个时间点计数300个细胞,结果显示为两个实验的平均值。所有在背景上显示检查点激活的细胞,只有明亮的BrdUrd标记细胞被评为阳性。直到转染后48小时才发现显著的检查点激活。

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