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图7。

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ZM447439抑制BubR1的动粒定位和磷酸化。(A) 去卷积图像堆栈的投影显示用所指示的药物处理1小时,然后染色以检测动粒/着丝粒(ACA)、BubR1和DNA的有丝分裂DLD-1细胞。(B) 绘制了各种条件下BubR1与ACA信号的荧光比率的条形图,表明ZM447439将BubR1信号降低了约10倍。数值表示至少在三个不同细胞中分析的至少26个不同的着丝粒/着丝粒对的平均值和SEM。(C) 未经处理的细胞(绿色圆圈)或暴露于ZM447439(红色钻石)或紫杉醇(蓝色方块)40分钟的细胞中期动粒的BubR1信号强度与动粒间距离的曲线图。使用ACA病灶确定动粒位置。椭圆包含至少75%的数据点。(D) 有丝分裂HeLa细胞从G1/S释放到指定药物后通过选择性分离收集,通过免疫印迹分析。在ZM447439存在下,BubR1的磷酸化形式无法检测到。(E) BubR1从诺卡唑阻滞的有丝分裂HeLa细胞中亲和纯化,并在ZM447439存在下检测激酶活性。每个值代表三个独立实验得出的平均值和SEM。

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