蛋白质科学。2000年10月；9(10): 2009–2017.
设计大肠杆菌天冬酰胺酶的底物特异性。二、。248位氨基酸替代物选择性降低谷氨酰胺酶活性。
摘要
大肠杆菌天冬酰胺酶II作为治疗急性淋巴母细胞白血病的药物，由于该酶具有显著的谷氨酰胺酶副活性，因此使用起来很复杂。为了开发谷氨酰胺酶活性降低的酶形式，构建了许多在底物结合位点附近具有氨基酸替换的变体，并测定了它们的动力学和稳定性。我们发现，替代Asp248对谷氨酰胺周转的影响比天门冬酰胺水解的影响更大。在野生型酶中，N248通过氢键与直接与底物相互作用的侧链来调节底物与相邻亚单位的结合。在变异体N248A中，L-谷氨酰胺因突变而导致的过渡态稳定性损失为15 kJ mol（-1），而L-天冬氨酸β-羟肟酸盐为4 kJ mol/1，L-天冬酰胺为7 kJ mol-1。其他N248变体的差异较小。模拟研究表明，谷氨酰胺酶活性的选择性降低是影响活性位点残基和催化相关水分子的微小构象变化的结果。
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选定的引用
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文章来自蛋白质科学：蛋白质学会的出版物由以下人员提供蛋白质学会
