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图6

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凋亡的高速细胞液在体外支持BAX靶向线粒体的能力依赖于细胞色素c,并被zVAD-fmk抑制。(A类)35BAX cDNA的S标记转录翻译产物在0(lanes)存在的情况下进行体外线粒体导入26),13(车道7),65(车道48)或260(车道59)μg凋亡高速cytrosolic蛋白(提取)带(车道6–9)或不带(车道2–5)添加细胞色素c(细胞色素C; 75μg/ml),并在SDS-PAGE和荧光成像后观察耐碱产品。车道1,输入翻译产品的10%。(B类;左边)通过免疫吸附从凋亡细胞提取物中去除细胞色素c(Cyt C减去提取物)使用小鼠单克隆2G8.B6抗体(米勒和杰默森,1996年)如前所述(Liu等人,1996年). 车道前提取物的等效等分1)和之后(车道2)用小鼠抗细胞色素c单克隆抗体7H8.2C12进行免疫印迹分析(Liu等人,1996年),并通过增强化学发光进行可视化。(中部)BAX翻译产物的膜插入是通过在pH 11.5下的抗萃取性来测定的,按照A类如图所示,在存在或不存在凋亡细胞液的情况下,细胞液在添加dATP和37°c孵育之前,已经或没有用抗细胞色素c进行免疫吸附或补充细胞色素c。(赖特)如图所示,在所示的条件下,测定相同凋亡细胞液生成PARP 24-kD凋亡裂解产物的能力。图4。4. (C类)凋亡的高速胞浆支持BAX膜插入的能力2–4;左边)和PARP裂解(正确的)按中的方法进行分析A类存在或不存在50μM四肽zVAD-fmk,在添加dATP并在37°C下孵育之前,从溶于二甲基亚砜的100倍浓缩储备液中输送。该溶剂的当量体积对BAX进口没有影响(左边,车道).

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