非洲爪蟾卵无细胞系统中复制活性核的组装步骤

我们通过从爪蟾卵中分离无细胞系统，研究了去膜精子染色质的核组装途径（Lohka，M.J.和Y.Masui，1983。科学（华盛顿特区）。220:719-721). 可溶性部分和水泡洗过的部分都是在体外形成启动复制的正常细胞核所必需的。仅可溶部分可解聚染色质，而仅囊泡部分用膜包裹染色质。这两种组分都是形成核孔复合物所必需的。重组这两个组分可以恢复大约100%的核组装和DNA复制活性。限制囊泡部分的比例会减缓核膜的获取，并允许观察未成熟的核孔（“前孔”）。在形成膜之前，这些细胞在染色质团周围和内部形成阵列。随后，膜泡与这些前孔结合，通过一个单一的膜将它们连接到染色质团中。在外围，这个单一的膜被一个外膜包围。在成熟细胞核中，所有的膜都位于外围，两个膜由孔连接，没有看到前孔。染色质与囊泡部分预孵育可抑制核组装和复制。然而，通过将浓缩的染色质与可溶部分预孵育，可以加速核组装。这也减少了DNA复制之前的延迟。只有在正常细胞核完全重组后才能观察到DNA复制的启动，这增加了复制依赖于核结构的证据。讨论了核组装的途径及其与DNA复制的关系。