图9。

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CD2AP表达的下调抑制了VacA从GEEC向LEs的转移以及VacA诱导的空泡化。(A) 用对照siRNA(左)或CD2AP siRNA(右)转染后36 h,HeLa细胞在4°C下与VacA孵育1 h,清洗,并在37°C下孵育120 min。细胞固定、渗透并处理以检测VacA和LAMP1。然后用共焦显微镜分析细胞。图片和插图代表了VacA标签(红色)和LAMP1标签(蓝色)从单个共焦截面的合并。方框区域描绘了相应插图中放大的区域。箭头显示,CD2AP耗尽后,VacA仍留在GEEC中。(B) 用对照siRNA或CD2AP siRNA转染细胞。36 h后,用VacA在4℃孵育1 h,洗涤,并用含有5 mM NH的DME在37℃孵养4 h4Cl.细胞通过视频显微镜进行分析。(C) 真空细胞在胶片开始时(0)和4小时后进行评分。结果表示为整个细胞群中空泡细胞的百分比,并表示三个独立视频的平均值±SEM(误差条)。(D) 在表达或不表达CD2AP的细胞中,细胞内(蛋白酶K抗性)VacA的量是相同的。用材料和方法中描述的对照siRNA或CD2AP siRNA转染HeLa细胞。3d后,在4°C下用VacA处理细胞1h(t=0),并在37°C下内化VacA 2h(t=2h)。然后用蛋白酶K处理细胞,如材料和方法中所述,以降解细胞外VacA。在表达或不表达CD2AP的细胞中,细胞内VacA(即蛋白酶K抗性)的量是相同的,表明VacA内化独立于CD2AP发生。针对微管蛋白的Western blotting用作2小时时间点的负荷控制。(E) 作为对照,如前所述,用CD预处理细胞以阻断VacA胞饮作用(Gauthier等人,2005年). HeLa细胞在VacA结合前用CD预处理或不预处理20分钟,并在10μm的D.Bars中进行处理。