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图7。

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CD2AP前两个SH3结构域的表达阻断了VacA从GEEC向LEs的转移。(A) 转染CD2AP、CD2AP-1-175和CD2AP-194-639的HeLa细胞在4°C下与VacA孵育1 h,并在37°C下清洗和孵育30 min。细胞被固定、渗透并处理以检测肌动蛋白、VacA和不同结构。通过共焦显微镜分析细胞。每个单独标签对应的一个共焦部分以黑白显示。在未转染(1)或CD2AP-1-175转染细胞(2)中,插入物表示VacA标记(蓝色)和肌动蛋白标记(红色)之间的融合。箭头指向与F-actin结构相关的含VacA的囊泡。(B) 与A中的条件相同,但用CD2AP-1–175或Inter-SH3转染HeLa细胞,并用EEA1抗体检测EEs。插入物表示VacA标记(红色)和EEA1标记(蓝色)在非转染细胞(3)、CD2AP-1-175转染细胞中的融合,其中VacA存在于GEEC(2)中且在EEs(1)中无法检测到,以及在Inter-SH3转染细胞内的融合。(A和B)方框中的区域描绘了放大的区域。(C) 与A或B中的条件相同,但HeLa细胞在37°C下培养120分钟,用LAMP1抗体检测LEs。在合并图像中,VacA显示为红色,LAMP1显示为蓝色。在CD2AP-1–175转染细胞中,VacA在GEEC中富集(箭头所示),与相邻的非转染细胞或转染其他结构的细胞相比,在LEs中未发现VacA。棒材,10μm。

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