美国国家科学院院刊。1998年3月31日；95(7): 3638–3643.
克隆哺乳动物中性鞘磷脂酶：鞘磷脂信号的功能？
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斯特凡·托米克
*科隆大学医学院生物化学研究所分子神经科学实验室，德国科隆D-50931 Joseph-Stelzmann-Strasse 52；和‡瑞士实验癌症研究所生物信息学小组，瑞士洛桑
凯·霍夫曼
*科隆大学医学院生物化学研究所分子神经科学实验室，德国科隆D-50931 Joseph-Stelzmann-Strasse 52；和‡瑞士实验癌症研究所生物信息学小组，瑞士洛桑
迈克尔·尼克斯
*科隆大学医学院生物化学研究所分子神经科学实验室，德国科隆D-50931 Joseph-Stelzmann-Strasse 52；和‡瑞士实验癌症研究所生物信息学小组，瑞士洛桑
马库斯·津巴森
*科隆大学医学院生物化学研究所分子神经科学实验室，德国科隆D-50931 Joseph-Stelzmann-Strasse 52；和‡瑞士洛桑瑞士实验癌症研究所生物信息学小组
威廉·斯托菲尔
*科隆大学医学院生物化学研究所分子神经科学实验室，德国科隆D-50931 Joseph-Stelzmann-Strasse 52；和‡瑞士实验癌症研究所生物信息学小组，瑞士洛桑
*科隆大学医学院生物化学研究所分子神经科学实验室，德国科隆D-50931 Joseph-Stelzmann-Strasse 52；和‡瑞士实验癌症研究所生物信息学小组，瑞士洛桑
†S.T.和K.H.为这项工作做出了同等贡献。
由马里兰州贝塞斯达国立卫生研究院Richard M.Krause传达
1997年12月15日收到；1997年12月30日接受。
摘要
鞘氨醇是哺乳动物细胞质膜的丰富成分。神经酰胺是其主要分解代谢中间体，由酸性鞘磷脂酶或中性鞘磷脂酶（nSMase）释放，已成为一种潜在的脂质信号分子。nSMase被认为是“鞘磷脂循环”和细胞信号调节激活的关键酶。我们在这里报道了小鼠和人类nSMase的克隆、鉴定和功能特性，nSmases是一种广泛表达的完整膜蛋白，它显示了Mg的所有既定特性2+-质膜的依赖性nSMase。为了研究nSMase在信号转导途径中的作用，已经产生了稳定的nSMase-过表达U937和人类胚胎肾细胞系。肿瘤坏死因子α对它们的刺激只会导致神经酰胺浓度的适度升高。Jun激酶和NFκB的激活以及聚ADP-核糖聚合酶的裂解在模拟和nSMase转染细胞中是相同的。肿瘤坏死因子α在所有细胞系中均未触发ERK1通路。克隆的nSMase将有助于进一步进行控制实验，以确定神经酰胺作为信号转导分子的可能作用。
鞘氨醇是所有哺乳动物细胞质膜脂双层外叶中的丰富成分(1). 此外，鞘磷脂的分解代谢产生几种具有潜在第二信使功能的脂质中间体，例如神经酰胺(2)，鞘氨醇（4反式-鞘氨醇）(三)，1-磷酸鞘氨醇(4). 只有具有去饱和鞘氨醇长链碱的中间体（其双键在生物合成过程中引入神经酰胺水平）才是潜在的脂质信号分子。两种鞘磷脂酶（SMase；鞘磷脂磷酸二酯酶，EC3.1.4.12)溶酶体酸鞘磷脂酶（aSMase）(5,6)和质膜结合中性鞘磷脂酶（nSMase）(7)，确定磷脂酶C类水解反应中鞘磷脂降解的主要途径，生成神经酰胺和磷酸胆碱。酸性和/或中性SMase在几种正常和髓系细胞系中激活“鞘磷脂途径”，以增加神经酰胺的生成，从而触发导致细胞增殖和分化或凋亡的信号通路(2,8). 尽管aSMase是一种特性良好的酶，但尽管进行了多次纯化尝试，nSMase仍然难以捉摸(9–11). 这种酶的分子特性是理解神经酰胺在细胞信号转导过程中的作用的先决条件，神经酰胺介导对肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β、干扰素-γ和1α，25-二羟维生素D等激动剂的反应三以前针对这个问题的研究要么依赖于具有潜在膜毒性副作用的膜透性神经酰胺类似物的体外给药，要么必须使用缺乏哺乳动物对应物调节特征的细菌SMase。此外，细菌SMase是可溶酶，可能在其他亚细胞隔室中生成神经酰胺，而不是通过质膜结合哺乳动物nSMase获得的。
在这里，我们描述了小鼠和人类nSMase的克隆、鉴定和功能特性。用nSMases转染髓系白血病细胞系U937。为了研究激酶JNK2和ERK1以及转录因子NF-κB的激活和凋亡，用TNF-α触发稳定的过表达克隆。模拟和nSMase转染细胞的反应没有显著差异。
材料和方法
聚（A）的制备+RNA。
从8只3周龄CD1小鼠的不同器官和poly（A）中分离出总RNA+根据制造商的方案（Boehringer Mannheim），在寡聚（dT）纤维素上通过亲和纯化分离RNA。
细胞培养和稳定转染。
在添加10%FCS、100μg/ml青霉素/链霉素和1mM丙酮酸钠的DMEM培养基中培养人胚胎肾293（HEK293）细胞。U937细胞在添加10%FCS、100μg/ml青霉素/链霉素和0.03%谷氨酰胺的RPMI 1640培养基中生长，培养温度为37°C，CO浓度为5%2. 5 × 106在基因脉冲发生器（Bio-Rad）中通过电穿孔将1μg线性化质粒DNA转染细胞。在1 mg/ml Geneticin（G418，Life Technologies，Gaithersburg，MD）下选择稳定克隆。
nSmse活性的测量。
测定细胞和小鼠组织中的酶活性。用冰镇PBS清洗细胞两次，并在1000×克将细胞沉积物重悬于裂解缓冲液（50mM Tris·HCl，pH 7.4/5mM DTT/1×完全不含EDTA（蛋白酶抑制剂组，Boehringer Mannheim）/5mM EGTA/2mM EDTA）中，并通过反复冷冻和解冻破坏。以2500×克.用裂解缓冲液（0.2%Triton X-100）提取沉积物，并在100000×克将可变量的蛋白质或匀浆组织与10nM（80000dpm）[N一起孵育-14赫三]鞘磷脂在37°C下放置30分钟，总体积为200μl。然后100μl二次蒸馏H2添加O，用CHCl萃取去除未反应底物三/赫三OH（2:1；体积/体积）。在液体闪烁计数器中测量含有酶释放磷胆碱的水上相的放射性。
将3周龄小鼠的组织在冷裂解缓冲液（0.32 M蔗糖/5 mM DTT/50 mM Tris-HCl，pH 7.4/1×Complete/5 mM-EDTA）中均质，并直接进行nSMase活性测量。
多克隆抗体的产生。
合成肽NH的兔抗nSMase抗体2-通过陶瓷羟基磷灰石（Bio-Rad）层析和共价连接到合成肽抗原的乙基氨基己基-Sepharose（Pharmacia）亲和层析纯化了与锁孔帽贝血蓝蛋白偶联的鼠nSMase的CDPHSDPFSDHE-COOH类似残基261–273。蛋白质浓度由Bradford程序以BSA为标准测定。
代谢标记。
模拟转染和nSMase过度表达的U937细胞（5×106)代谢标记为2μCi/ml 1-[14C] 在含有10%胎牛血清的培养基中，乙酸盐（比活性，54 mCi/mmol，Amersham-Buchler，Braunschweig，Germany）作用48小时。用TNF-α细胞刺激后，通过离心沉淀并用PBS洗涤一次，然后按照既定方法提取总脂质(12). 含有等量放射性的样品被发现在两个不同的20厘米硅胶薄层色谱板上。其中一个平板用氯仿/甲醇（15:1；vol/vol）制成，用于分离神经酰胺，另一个用氯仿-甲醇/水（65:25:4；vol/vol/vol，用于分离总脂提取物。用荧光成像仪445 SI（分子动力学）同时对平板进行成像和定量法师问阿特以磷脂酰胆碱为内标的软件。
JNK2和ERK1的检测。
2 × 107用TNF-α（6.6×10）刺激细胞6单位/mg，由德国BASF-Knoll提供），按照制造商的说明进行ERK1（ERK1-CT，Upstate Biotechnology）和JNK2（JNK2-FL，Santa Cruz）分析。
聚ADP-核糖聚合酶（PARP）裂解。
107细胞暴露于TNF-α/环己酰亚胺（CHX），并按照制造商的说明进行PARP蛋白水解（Boehringer Mannheim）的分析。山羊抗兔IgG辣根过氧化物酶结合物（Sigma）用于显示具有SuperSignal底物（Pierce）的蛋白带。
结果
小鼠和人类nSMase cDNA的克隆。
因为哺乳动物nSMase的生化纯化被证明是困难的(9–11)，我们使用了不同的方法来鉴定这种神秘的酶。其中有几种细菌蜡样芽孢杆菌,产气荚膜梭菌、和问号钩端螺旋体，已知含有与质膜相关的Mg类似的pH最优和离子需求的SMases2+-依赖性哺乳动物nSMase（参考文献综述。13). 我们构建了广义轮廓(14)基于这些细菌SMase的多重序列比对，要么使用完整序列，要么将剖面限制在最保守的区域。在这两种情况下，在蛋白质序列数据库中的图谱搜索都确定了酵母ORF Yer019w中的单一显著匹配酿酒酵母通过搜索表达序列标签的dbEST数据库，我们鉴定了几个与酵母序列高度同源的哺乳动物序列。我们通过克隆和测序分别从重叠的小鼠和人类EST序列中组装的全长cDNA来确认这种同源性。随后将酵母、人类和小鼠序列纳入到剖面构建和数据库搜索的迭代循环中，结果与镁的一个大家族显著匹配2+-细菌的依赖性磷酸二酯酶，包括外切酶III和脱氧核糖核酸酶I大肠杆菌这两种核酸酶的晶体结构允许描绘对镁重要的残基2+结合与催化(15). 如图所示。，这些残基在细菌SMase、酵母ORF和哺乳动物nSMase候选基因中完全保守，为这个新建立的超家族提供了进一步的可信度。综合系统发育距离分析表明，细菌SMases、酵母ORF Yer019w和哺乳动物序列在超家族中形成一个簇，因此表明哺乳动物克隆是Mg的良好候选基因2+-依赖nMases。
两种细菌SMases cerus芽孢杆菌和问号钩端螺旋体与ORF Yer019w的比对酿酒酵母第一个区块包含原核和真核nSMases中存在的催化结构域，第二个区块包含真核酶的C末端延伸，两个跨膜区域被装箱。50%以上序列中相同或相似的残基分别显示在黑色或灰色背景上。编号是指分泌的细菌酶的成熟序列，以及缺乏信号序列的真核生物酶的完整ORF。镁合金2+-络合谷氨酸（三角形）、参与底物结合的天冬酰胺（箭头）和一般碱性组氨酸（实心圈）显示在序列上方。
小鼠和人类nSMase候选基因显示出高度的序列相关性（图。). 它们的ORF分别编码419个残基（小鼠，47.5 kDa）和423个残基的蛋白质（人类，47.6 kDa。与细菌SMases相反，哺乳动物cDNA衍生的氨基酸序列在其N末端不包含信号序列。亲水性图显示，C末端有两个相邻的疏水性跨膜结构域，由八个氨基酸残基分开。因此，nSMase候选者似乎是完整的膜蛋白，其催化结构域面向胞质溶胶，并且仅蛋白质的一小部分面向细胞外环境。这也与细菌分泌可溶性蛋白的SMase形成了对比，但与哺乳动物Mg的报告特性一致2+-依赖nSMase。Northern杂交分析显示，小鼠nSMase候选基因的1.7 kb mRNA普遍表达(16). 肠、肾、脑、肝、心和肺的RNA显示出强烈的信号，而脾脏的RNA表达似乎较低（图。). 多问题Northern杂交中nSMase mRNA的信号强度与相应组织中观察到的酶活性不平行（表). 这表明nSMase的转录后调控是一种迄今为止未知的机制。aSMase缺陷小鼠的RNA和酶活性的表达水平没有变化(17).
nSMase在小鼠组织中的表达。poly（A）的Northern印迹分析+来自不同小鼠组织的mRNA。用小鼠cDNA 5′端的770-bp序列作为杂交探针。用β-肌动蛋白探针对膜进行再杂交以进行标准化。
表1
aSMase缺陷小鼠不同组织中nSMase的比活性 (aMase公司−/−)
| 组织 | 比活性，nmol鞘磷脂/mg蛋白质/h |
|---|
| 肠 | 113 ± 27 |
| 肾脏 | 1.6 ± 0.1 |
| 脾脏 | 1.5 ± 0.2 |
| 心脏 | 4.8 ± 0.1 |
| 肺 | 1.2 ± 0.1 |
| 大脑 | 582 ± 98 |
| 肝脏 | 2 ± 0.5 |
克隆的磷酸二酯酶显示哺乳动物nSMase的所有特征。
为了全面表征nSMase候选蛋白的功能，我们构建了稳定表达小鼠nSMase-候选蛋白的HEK293细胞系。膜提取物的酶分析显示，与模拟转染细胞相比，nSMase活性显著增加。不同的细胞株表现出0.3至10μmol/mg蛋白质/h的特异性nSMase活性。如反转录-PCR（RT-PCR）所示，构建物的表达水平与测定的特异性n Smase活动密切相关（图。 A类和B类和表). 用肽源抗鼠nSMase抗体进行的Western blot分析显示，与免疫反应物质的数量有类似的相关性（图。C).
通过Northern和Western杂交分析不同稳定转染人类细胞系中nSMase的表达。(A类)用引物对从总细胞RNA到人和鼠nSMase cDNA杂交的RT-PCR。(B类)利用与人β-肌动蛋白cDNA相匹配的引物对，从总细胞RNA进行RT-PCR。(C)用肽衍生多克隆抗nSMase抗体对不同HEK293细胞系的质膜蛋白提取物进行Western blot分析，该提取物通过1%SDS-聚丙烯酰胺电泳分离。灵敏度不足以检测U937细胞和小鼠组织提取物中的nSMase蛋白。
表2
| 细胞系 | 比活性，nmol鞘磷脂/mg蛋白质/h |
|---|
| HEK模拟转染 | 10 ± 0.5 |
| HEK弱表达nSMase | 685 ± 33 |
| HEK高表达nSMase | 9,960 ± 308 |
| U937模拟转染 | 28.2 ± 0.8 |
| U937表达nSMase | 93.1 ± 7.7 |
细胞分馏实验表明，SMase活性存在于血浆膜富集部分（2500×克沉积物）。该组分的提取物用于酶的进一步表征。最佳pH值为6.5至7.5；这个K（K）米长链（C18）鞘磷脂的值为1.0–1.5×10−5M.镁2+需要离子。EDTA的添加导致SMase活性的完全抑制，而Mn的添加可以逆转这种抑制2+和镁2+离子。最佳酶活性所需的Triton X-100浓度介于0.03%和0.05%之间。尽管nSMase活性不受DTT或2-巯基乙醇处理的影响，但添加20 mM谷胱甘肽可导致完全抑制（图。A类). 在用0.5mM花生四烯酸处理膜提取物时，观察到HEK细胞过表达系统中nSMase活性的3倍活化（图。B类). 镁的类似活化2+-之前在HL60细胞和脑匀浆中分别观察到依赖性nSMase活性(18,19). 克隆的nSMase的水解能力并不严格限于鞘磷脂；结构相关的磷脂酰胆碱被发现以大约30%的效率被切割。鞘磷脂的酶降解遵循磷酸二酯酶反应。克隆的酶不催化从鞘磷脂到二酰甘油或磷脂酸的磷酸胆碱或胆碱转移，反之亦然，从磷脂酰胆碱到神经酰胺（数据未显示）。哺乳动物nSmase包含相对于其细菌同源物的C末端延伸，包括两个跨膜区域。酶活性需要这种延伸，或者至少是其中的一部分。在HEK293细胞中表达时，两个假定跨膜结构域被删除的截短小鼠nSMase（残基1–282）没有显示SMase活性增加。
小鼠nSMase的酶学特性。(A类)还原剂对小鼠nSMase活性、离子需要量、对非离子洗涤剂Triton X-100的依赖性、热失活和胰蛋白酶敏感性的影响。标准分析混合物含有5 mM MgCl2、0.05%Triton X-100、5 mM DTT、50 mM Tris●Cl、pH 7.4和1×完整，不含EDTA。通过添加含有10%FCS的培养基使蛋白酶失活后，在37°C下对nSMase过度表达细胞进行胰蛋白酶处理5分钟。(B类)花生四烯酸刺激nSMase活性的基本方法如下所述(18,19). 简单地说，将不同数量的花生四烯酸直接添加到含有模拟转染和过度表达HEK293细胞的nSMases膜提取物的检测混合物中。结果表示三个独立测量得出的平均值（±SD）。
nSMase在质膜中的定位以及上述所有酶学性质与组织中中性SMase的报道一致，尤其是在大脑中。因此，我们得出结论，克隆的磷酸二酯酶是长期寻找的镁2+-依赖中性SMase。
nSMase在信号转导中的作用。
在一些细胞系统中，神经酰胺由SMase产生，以应对细胞因子的挑战，例如TNF-α(20,21)，白细胞介素1β(22,23)，和CD95/Fas(24–26). 为了通过TNF-α激活质膜nSMase，已经提出了蛋白FAN（与nSmse相关的因子），以连接p55 TNF受体的nSmse激活域和nSmse，并促进促炎细胞反应(27,28). 我们研究了nSMase过度表达对HEK293和U937细胞对TNF-α攻击反应的影响。如以下段落所述，对假设的nSMase介导的信号通路的四个基本参数进行了分析：(我)神经酰胺生成动力学；(ii（ii）)NF-κB活化；(三)丝裂原活化蛋白激酶的激活；和(iv（四）)PARP蛋白水解，细胞凋亡的标志。
(我)HEK293细胞中预先标记有1-[14C] 棕榈酸酯，在TNF-α刺激下神经酰胺的形成量与nSMase的表达程度无关，与模拟转染细胞中观察到的水平相同。此外，未观察到NF-κB活化增加和凋亡特征（PARP裂解、核染色质断裂）（数据未显示）。相反，在适度过度表达nSMase结构的U937细胞中，TNF-α触发的神经酰胺形成在最初10分钟内增加了25%，并且在零时间或模拟转染细胞中保持高于水平15-20%（图。A类) (12). 在这些实验中，细胞神经酰胺的浓度不是通过常用的二酰基甘油激酶测定法测定的(29)因为根据最近的一项研究，它的可靠性似乎值得怀疑(30). 相反，我们使用了如前所述的放射性标记技术(31). 由于质膜中鞘磷脂的高浓度，鞘磷脂浓度的微小变化可能会逃脱测定的灵敏度。
过度表达nSMase的U937细胞对TNF-α的细胞反应。(A类)模拟转染和nSMase过度表达的U937细胞TNF-α刺激后神经酰胺释放动力学。用100 ng/ml人TNF-α刺激细胞，刺激时间如图所示，并按所述提取脂质(12). 神经酰胺(▪), 鞘磷脂（•）和磷脂酰乙醇胺(▴) 被归一化为磷脂酰胆碱。(B类)模拟转染JNK2活化动力学(▪) 用100 ng/ml人TNF-α治疗后，nSMase过度表达U937细胞（•）。
(ii（ii）)遵循我们之前关于TNF-α对aSMase缺陷小鼠成纤维细胞作用的研究方案(31)我们研究了在nSMase转染的U937细胞中TNF-α诱导NF-κB活化的动力学。电泳迁移率变化分析显示动力学与模拟转染细胞的动力学相同（数据未显示），这使得nSMase在该细胞类型的NF-κB活化中的作用不太可能。
(三)由nSMase产生的神经酰胺被认为可以通过神经酰胺激活的蛋白激酶触发抗凋亡途径，以响应TNF-α(32). 这最终导致细胞外信号相关激酶的激活。用TNF-α刺激后，在模拟转染或过度表达nSMase的U937细胞中无法检测到明显的ERK1激活（未显示）。此外，在模拟转染和nSMase转染的U937细胞中未观察到Jun激酶激活的差异（图。B类).
(iv（四）)通过测定PARP的断裂来证明转染nSMase的U937细胞的凋亡(33). 该方法清楚地表明，在TNF-α/CHX刺激后，过度表达nSMase的U937细胞和模拟转染U937的细胞在发生PARP裂解的动力学方面没有差异，这在120分钟内完成（图。). 单用TNF-α处理细胞仅导致部分PARP裂解，至少18小时内PARP裂解不完全。单用CHX没有影响（数据未显示）。此外，即使在高效的HEK293细胞系统中，nSMase的过度表达对细胞生长和形态也没有明显影响。
用200 ng/ml人TNF-α和10μg/ml CHX处理转染的U937细胞后PARP裂解动力学。
讨论
我们在这里报道了小鼠和人类中性SMase的克隆和分子特征，SMase是一种属于Mg大家族的磷酸二酯酶2+-中性pH最佳的依赖性磷酸二酯酶。小鼠和人类nSMases分别有419和423个氨基酸残基。在亲水性图中，一级结构显示了C末端的两个假定的疏水性跨膜结构域，酶通过这两个结构域作为位图蛋白与质膜结合。转染HEK293细胞中过度表达的膜结合型nSMase对蛋白水解酶不敏感。这表明连接两个跨膜螺旋的6–10个氨基酸残基的短环（图中的装箱序列）。)在细胞外表面对蛋白水解有抵抗力，而催化的位于细胞内。
尽管nSMase在除脾脏外的所有器官中均有表达，但mRNA水平上的表达强度相当，但高酶活性仅出现在大脑中。这表明其他器官中存在转录后调控，其机制尚待阐明。
溶酶体酸（aSMase）和质膜整合镁2+-依赖性nSMase被认为是几种激动剂（如TNF-α、白细胞介素1β、NGF、1α、25-二羟基维生素D三干扰素γ）导致复杂的细胞反应，如生长停滞、细胞分化和凋亡。这意味着SMase反应的反应产物神经酰胺是一种重要的第二信使(33).
TNF受体1或Fas激活aSMase，释放神经酰胺作为第二信使，随后激活NF-κB或诱导细胞凋亡，这一假设受到质疑(30,31). 血浆膜结合镁诱导释放神经酰胺2+-依赖性nSMase被认为是细胞内凋亡信号。nSMase的激活也与细胞外信号调节的ERK1级联和促炎反应有关(32). 与这些报告相反，我们的nSMase过度表达的U937细胞在TNF-α刺激下仅释放适度升高浓度的神经酰胺。我们没有观察到ERK1的激活。
总之，与使用细菌nSMase或膜透性神经酰胺的研究预期的效果相比，我们无法检测到nSmases过度表达所影响的任何生物效应。不能排除的是，前几份报告中一些更具戏剧性的影响是因为实验的非生理设置。另一方面，不能排除哺乳动物nSMase在非常特殊的细胞类型中产生更显著的作用和/或需要特殊的激活因子体内在这里描述的实验中，这些物质的含量不足。这一假设得到了如下观察结果的支持：与模拟转染细胞相比，即使是高度过表达nSMase的HEK细胞，其鞘磷脂水解率也没有明显改变，这可能是因为有效抑制（调节）了质膜中的酶活性。到目前为止，所有组织中nSMase的酶活性最高的是中枢神经系统。这种选择性并没有反映在nSMase信息的普遍分布中，这暗示着nSMase的脑特异性激活过程。神经生长因子受体（p75NTR公司)属于TNF受体家族，在早期发育中调节视网膜神经元的细胞死亡(34). 在开发后期，其配体NGF与p75的结合NTR公司选择性激活NF-κB(35)以及ERK1和-2(36). NF-κB活性组成性地存在于神经元的细胞核中，并可在细胞质和突触中诱导（综述见参考文献。37). NGF缺乏导致神经元死亡。NGF与p75的结合NTR公司通过释放神经酰胺激活SMase(38,39). 外源性添加细菌SMase产生的神经酰胺被描述为可以克服NGF缺乏(40). 因此，神经元组织中nSMase的高比活性可能对神经元的存活至关重要。
确定和揭示参与激动剂诱导的鞘磷脂降解的SMase激活机制的主要问题仍有待回答。然而，这里描述的nSMase分子特性的表征将有助于解决这些问题的研究。
nSMase的调节活性也可能在维持质膜中鞘磷脂和胆固醇之间的平衡方面发挥重要作用。用细菌SMase处理CHO-7（中国仓鼠卵巢）细胞导致胆固醇动员和细胞内积聚，随后抑制固醇调节元件结合蛋白水解和固醇调节因子相关基因的转录(41). 这里描述的nSMase分子特性的表征也将有助于研究质膜流动性在信号转导中的作用，这可能由鞘磷脂和胆固醇的化学计量比调节。
此外，nSMase的分子特性将有助于我们理解鞘磷脂代谢物介导的信号通路。“结构丧失和功能丧失”小鼠模型将揭示nSMase在质膜中酶活性的复杂调节及其在细胞信号通路中的功能。
致谢
这项工作得到了德国Forschungsgemeinschaft Sto32/36-1项目（致西澳州）和科隆分子医学跨学科中心（ZMMK）联邦教育、科学、研究与技术部（BMBF）01 KS 9502项目24的支持。cDNA克隆来自德国柏林德国人类基因组项目资源中心/初级数据库。S.T.是Graduiertenkolleg“Molekularbiologische Grundlagen病理生理学家Vorgänge”的研究员
缩写
| S底座 | 鞘磷脂酶 |
| aMase公司 | 酸性鞘磷脂酶 |
| nSMase公司 | 中性鞘磷脂酶 |
| TNF公司 | 肿瘤坏死因子 |
| PARP项目 | 聚ADP-核糖聚合酶 |
| 瑞士法郎 | 环己酰亚胺 |
| 逆转录聚合酶链反应 | 逆转录-PCR |
| NGF公司 | 神经生长因子 |
工具书类
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