美国国家科学院院刊。1997年2月18日；94(4): 1441–1446.
肿瘤坏死因子启动肝脏生长：缺乏缺乏I型肿瘤坏死小鼠的肝再生因子受体
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山田康弘
*华盛顿州西雅图华盛顿大学病理学系98195; 和†Immunex研发公司，西雅图，WA 98101
伊琳娜·基里洛娃
*华盛顿州西雅图华盛顿大学病理学系98195；和†Immunex研发公司，西雅图，WA 98101
雅克·佩肖恩
*华盛顿州西雅图华盛顿大学病理学系98195; 和†Immunse研发公司，西雅图，WA 98101
纳尔逊·福斯托
*华盛顿州西雅图华盛顿大学病理学系98195; 和†Immunex研发公司，西雅图，WA 98101
*华盛顿州西雅图华盛顿大学病理学系98195; 和†Immunex研发公司，西雅图，WA 98101
‡重印请求应发送给谁。
理查德·帕米特（Richard D.Palmiter），华盛顿大学，华盛顿州西雅图
1996年10月17日收到；1996年12月23日接受。
摘要
肝切除后启动肝再生的机制肝脏组织尚不清楚。确定细胞因子是否参与在肝脏生长的起始阶段，我们研究了缺乏I型肿瘤小鼠肝部分切除术后的肝脏坏死因子受体（TNFR-I）。PH后DNA合成严重这些动物的损伤，以及PH后不久NF-κB和STAT3转录因子发生。TNFR-I基因敲除小鼠PH值降低后AP-1的结合与受体完整而C/EBP结合的动物相比未修改。白细胞介素6在TNFR-I缺乏症中的注射动物在PH前30分钟纠正DNA合成缺陷STAT3和AP-1结合恢复到正常水平，但对再生肝脏中的NF-κB结合。结果表明：TNF通过TNFR-I发出信号，可以启动肝脏再生和通过激活白细胞介素6依赖途径发挥作用，该途径涉及STAT3转录因子。
肝脏具有独特的再生能力它的一部分质量被移除。这种生长反应尤其值得注意的是，肝细胞约占哺乳动物的肝脏具有低增殖活性和长寿命跨度。然而，肝细胞在部分切除后容易增殖肝切除术（PH）并进行一轮或多轮半同步手术恢复静止前的复制(1，2). 在幼鼠和小鼠，>95%的肝细胞在PH后复制，肝质量为在7-10天内恢复。生长过程受到严格控制当达到设定点时终止，该设定点定义为最佳比率肝功能质量和体重之间的差异。相同的原理是调节大鼠和小鼠PH后肝脏再生应用于生长人类肝脏移植到新宿主的反应。在这种情况下，小移植体生长，但大移植肝减少大小，因此在每种情况下获得单个主机(1).
在过去的几年里，许多新的信息可用于可能引发肝脏再生的事件(三——6).许多生长因子可以刺激肝细胞的DNA复制初级培养和其中至少两个因素改变了生长因子α和肝细胞生长因子/分散因子，参与PH后的生长反应体内然而这些因素可能起作用的确切点尚未确定。此外，尽管转化生长因子α和肝细胞生长因子/分散因子极大地刺激了培养的肝细胞，将这些因子直接注入肝脏体内在24小时内肝细胞DNA合成(7). 然而，完整肝脏中的肝细胞如果他们接受刺激静止的肝细胞进行复制(8——10). 这些和其他实验表明肝脏再生需要一个静止的初始阶段肝细胞获得增殖能力(1，三，7). 在此期间阶段，大致相当于PH后的前4小时，转录因子NF-κB、AP-1和STAT3的结合增加。NF-κB在PH后几分钟激活瞬态(11，12). AP-1和STAT3结合在操作，STAT3绑定保持高达6小时或更长时间(13——16). 肿瘤坏死因子（TNF）激活许多细胞中的NF-κB并在30分钟内在大鼠肝脏中引起强烈的NF-κB结合静脉注射后(11). TNF在肝脏中的潜在作用阿克曼的工作表明了再生等。(17)他表明TNF抗体可以延迟和减少DNA大鼠肝脏再生中的合成及抑制PH后白细胞介素6（IL-6）的循环水平。我们建议肝脏再生可能由一种或多种细胞因子和生长因子稍后作用于具有活性的肝细胞增殖(1，三). 直接测试TNF在PH后启动肝脏再生，我们分析了肝脏生长缺乏TNF受体1（TNFR-I）的小鼠PH后的反应。这些动物生长发育正常，但对TNF介导的毒性和极易受感染李斯特菌属单核细胞增生和结核分枝杆菌(18——20).我们报告称，肝再生严重受损TNFR-I缺陷小鼠和DNA合成缺陷可能是通过注射IL-6进行纠正。
材料和方法
动物。
TNFR-I基因敲除小鼠（p55−/−）这些实验中使用了C57BL/6菌株(21，22). 野生型最初从杰克逊实验室购买的C57BL/6小鼠作为控件。所有实验均用雄性小鼠称重25–30 g置于温控室中，交替放置12小时暗/光循环。PH包括前部和左肝外侧叶采用Higgins手术和安德森(23)如前所述(24). 实验是在根据英国大学的机构指南华盛顿医学院。
核提取物。
老鼠在不同时间被杀每项实验的PH值后。用于含蛋白酶抑制剂as的核提取物的制备描述(11). 组织均质，核提取物制备为描述(11). 将核提取物冷冻并储存在−80°C下直到使用。蛋白质浓度用Bradford法测量。
电泳迁移率测定（EMSA）。探头。
使用了以下双绞线探针：1类主要组织相容性的NF-κB结合序列所述增强元件（H2K）(11); AP-1，共识寡核苷酸探针（Santa Cruz Biotechnology）；STAT3、，与Sis诱导物结合位点相对应的寡核苷酸因子（圣克鲁斯生物技术）；和C/EBP，寡核苷酸对应于大鼠白蛋白基因的核苷酸−112到−86发起人(25). NF-κB和C/EBP探针由50℃热循环中互补寡核苷酸的退火mM Tris（pH 8.0）和1 mM EDTA。纯化退火的寡核苷酸第PAGE页。制备NF-κB、AP-1和STAT3寡核苷酸探针用γ进行末端标记32P-腺苷5′-三磷酸使用T4多核苷酸激酶。C/EBP的最终标签为α32使用Klenow DNA的对脱氧胞苷5′-三磷酸聚合酶。
化验。
每次分析中使用核蛋白（10μg）用0.2克32P端标记，描述的双链寡核苷酸探针(11). 混合物在室温下孵育30分钟并电泳通过5%聚丙烯酰胺Tris–甘氨酸–EDTA凝胶。对于抗体超位移分析，1μl抗体（1μg/μl；全部来自Santa Cruz Biotechnology）用标记探针孵育30分钟后。样品为在室温下再培养30分钟电泳。使用了以下抗体：抗p50-和NF-κB成分的抗p65特异性多克隆抗体；c-Jun/AP-1多克隆抗体；c-Jun/AP-1型与c-Jun、Jun B和Jun D反应的多克隆抗体；六月B特异性多克隆抗体；c-Fos特异性多克隆抗体；STAT3特异性多克隆抗体；C/EBP多克隆抗体C/EBPα和C/EBPβ特异性多克隆抗体。将凝胶干燥并暴露于柯达X-AR胶片中2小时至2天。
RNA制备和Northern Blot杂交。
RNA是用4M硫氰酸胍匀浆法分离肝脏然后如所述通过氯化铯进行超速离心(7). 样品（20μg/lane）通过电泳分离1.1%甲醛-琼脂糖凝胶并转移到尼龙膜上（MagnaGraph，Micron Separations，马萨诸塞州韦斯特波罗）。2-4小时后在42°C下预混合，过滤器与以下探针标有α32对脱氧胞苷随机引发的5′-三磷酸：TNFR-I，240-bpSpe公司I–Bgl公司小鼠TNFR-I的II片段cDNA；TNFR-II，450-bpXba公司I–萨尔I碎片来自小鼠TNFR-II cDNA；c（c）-福斯，915个基点生态RI–速度人类c的I片段-福斯cDNA；c（c）-六月，1800-bp生态小鼠RI片段c（c）-六月cDNA；六月B、 1700亿桶生态RI公司碎片来自六月B cDNA；和β2-微球蛋白（负载控制），350-bpPst（磅/平方英尺）小鼠cDNA的I片段。在42°C下杂交12-24小时后，清洗过滤器并在−80°C下暴露于带有增感屏的柯达XAR胶片。之后每次杂交时，用50%的水清洗探针甲酰胺/6×SSC在65°C下保持30分钟。
逆转录酶-PCR法测定IL-6 mRNA化验。
肝脏IL-6 mRNA通过偶联、反向转录-PCR。cDNA由1μg来自使用基因Amp RNA PCR试剂盒（Perkin–Elmer）在含有2.5单位小鼠白血病病毒逆转物的缓冲液转录酶和2.5μM寡核苷酸（dT）引物。培养样本在42°C下保持15分钟，99°C下维持5分钟，5°C下持续5分钟用相同的方法扩增了代表50 ng输入RNA的cDNA配套元件。PCR包含与逆转录酶相同的缓冲液反应、0.4μM IL-6引物（CLONTECH）和2.5单位AmpliTaqDNA聚合酶（Perkin–Elmer）。反应在94°C下进行1分钟，60°C 1分钟，74°C 1.5分钟，30个循环。这个获得可检测产品所需的最佳循环数（638-bp产品尺寸）在非饱和条件下由进行10–40个周期的PCR。之后未检测到任何产品10或20个循环；反应在40个循环时达到饱和。30个周期获得的扩增产物以2%电泳琼脂糖凝胶并用溴化乙锭染色。IL-6的定量利用PCR模拟方案通过竞争PCR进行mRNA检测（克隆技术）。IL-6竞争性引物（2μl），产品尺寸为每次反应使用435 bp，浓度为10–10−6阿托莫尔斯。
组织学。
BrdUrd注射小鼠的肝脏（30μg/g；压井前2小时）固定在甲基卡诺液中持续4-6小时，准备进行组织学分析，并使用Amersham细胞增殖试剂盒。
结果
转录因子结合。
C57BL/6型对野生型和TNFR-I基因敲除小鼠进行部分肝切除肝核提取物是从杀死30分钟到手术后5小时。我们确定了转录因子NF-κB、AP-1、STAT3和C/EBP（图。)EMSA。野生型核提取物小鼠，NF-κB（p50/p65异二聚体）显著增加PH后30分钟至4小时p50同二聚体的结合，如前所述(11，12). 与此形成鲜明对比的是在提取物中检测到NF-κB和p50同源二聚体的结合击倒老鼠。p50以下出现的快速迁移带图中的同二聚体。对应于一个称为“PH”的系数因子”，最初被认为取代NF-κB和防止PH后粘连(26)，观察结果不受支持后续工作(11，12). PH因子结合在一些TNFR-I基因敲除小鼠的核提取物（图。，泳道3和4）。AP-1转录因子由c-Fos的异二聚体和Jun家族蛋白或Jun同源二聚体(27). AP-1结合为野生型再生肝细胞核提取物增加小鼠在PH后2-4小时（在2小时时，只有一种提取物显示增加结合力），如报告所示(13，14). 然而，这个归纳法是在敲除小鼠中减少（图。). STAT3是家族成员被称为信号转导和转录蛋白的激活(28). STAT3在中的绑定肝脏再生过程中肝脏增加(15，16)，在急性期相反应，以及注射表皮生长因子和白介素-6(29，30). 我们证实了已发表的观察结果，即STAT3增加野生型小鼠PH后(31)但在之后未检测到STAT3绑定缺乏TNFR-I小鼠的PH值（图。). 我们还研究了野生型和基因敲除小鼠的C/EBP。这个转录因子是肝细胞中含量丰富，是许多肝脏特异性基因(5，32——34). 流动性变化分析如所示图。显示TNFR-I中PH后C/EBP结合没有受损敲除小鼠，甚至可能高于野生型老鼠。我们使用特异性抗体对抗分析结合性质的转录因子复合物（图。). 流动性转移分析在p65和p50抗体存在的情况下进行的NF-κB证实肝细胞核提取物中的条带野生型小鼠确实与NF-κB（p50/p65异二聚体）相对应和p50同源二聚体。提取物中未检测到这两条带从TNFR-I基因敲除的肝脏中获得。同样，STAT3频带野生型小鼠的核提取物被STAT3完全转移抗体，但在击倒老鼠。AP-1复合物分析显示c-Fos、c-Jun、JunB、 和其他Jun家族蛋白是野生型小鼠再生肝脏的核提取物。乐队对应于c-Jun和其他Jun家族蛋白也存在在基因敲除小鼠的提取物中，但c-Fos没有改变条带抗体（图。). 使用C/EBPα和野生型和TNFR-I提取物中的C/EBPβ抗体敲除小鼠的C/EBP结合总量也增加每种亚型在PH后1至3小时内（数据未显示）。在总之，NF-κB和STAT3的激活被显著抑制，如果没有被消除，AP-1的整体结合减少，AP-1的c-FosTNFR-I的肝细胞核提取物中未检测到该成分PH后敲除小鼠。
PH后转录因子结合野生型（WT）和TNFR-I基因敲除小鼠（TNFR-I-KO）。老鼠是部分肝切除，于术后0.5和5小时处死操作，如图顶部所示（每次两只老鼠点）。制备核提取物，并使用每条通道中含有10μg核蛋白。使用网织红细胞裂解物作为确定p50/p65 NF-κB位置的标记物异二聚体(11). p50同二聚体位置表示为（第50页）2。野生型AP-1结合存在变异性PH后2小时处死小鼠。PHF，PH因子
转录因子活性转移分析使用特定抗体（Ab）结合。野生型（WT）和TNFR-I敲除小鼠（TNFR-I KO）部分肝切除并处死手术后4小时进行NF-κB、STAT3和AP-1分析。核提取物与32P标记探针，然后添加1μl抗体（1μg/μl）至10μg提取物。孵育30天后用EMSA分析核提取物（每车道10μg）。这个每个分析中使用的抗体显示在图的顶部每个转录因子，第一条通道显示核的EMSA提取液无需抗体预培养。
mRNA表达。
TNF的细胞效应可能是由两个主要受体的配体依赖性激活启动，不形成异二聚体的TNFR-I和TNFR-II。被淘汰的老鼠在我们的实验中使用的只有TNFR-I，并且应该完好无损TNFR-II公司。在野生型小鼠的肝脏中，TNFR-II mRNA增加了10倍以上PH后4小时，检测到相对较小的变化TNFR-I（图。). 因此，TNFR-I mRNA是在小鼠肝脏中组成性高表达，但TNFR-II mRNAPH后可诱导(35). 正如预期的那样，在PH前后敲除小鼠的肝脏。另一方面，这些动物在PH后TNFR-II mRNA明显增加速度比野生型小鼠快，表明TNFR-II mRNATNFR-I基因敲除小鼠的合成没有受损。符合本实验室和其他实验室以前的结果(1，4，5，36),c（c）-福斯野生型肝脏mRNA增加≈10倍PH后的小鼠在0.5–1小时时达到最大表达。这种早期升高第页，共页-福斯基因敲除的肝脏中无mRNA表达老鼠。c的表达式-六月和六月之后的B mRNA在野生型和基因敲除小鼠中，PH的诱导程度相同。
TNFR-I、TNFR-II的表达，c（c）-六月，c-福斯和Jun B mRNA野生型（WT）和TNFR-I基因敲除小鼠（TNFR-I-KO）。动物是术后0.5～5h行部分肝切除并处死。样品（20μg/lane）通过电泳分离并与α32对脱氧胞苷5′-三磷酸探针。β2-微球蛋白（β2M）mRNA（最下面一行）被用作装载控制。
PH后的DNA合成和肝质量。
小鼠PH后，DNA合成保持极低水平，并在约30–32小时后保持不变操作(24)，当它开始增加，并且达到最大值≈40 h。为了确定TNFR-I的缺乏是否会改变再生肝脏中的DNA合成、TNFR-I敲除和野生型小鼠部分肝切除，并在24–68小时后处死操作（图。). 所有小鼠均注射杀人前2小时。在野生型小鼠中，BrdUrd掺入肝细胞在PH后40小时达到峰值，下降了在接下来的10小时内几乎达到75%，但仍高于68小时时的对照水平。相比之下，BrdUrd掺入PH后TNFR-I基因敲除小鼠的肝细胞严重受损。与野生型动物相比，敲除中的肝细胞复制动物在40小时时减少了>60%PH后44和68小时肝再生期间DNA合成的主要峰值，肝细胞经常在细胞质中积聚少量脂滴。这些液滴在用于这些实验在手术后30h进行。然而，TNFR-I基因敲除动物的肝细胞有大量脂肪浸润（PH后第二天非常突出），包括扭曲细胞的超大细胞质脂质空泡架构（数据未显示）。
野生型PH后肝细胞DNA合成和TNFR-I基因敲除小鼠。野生型和TNFR-I基因敲除小鼠部分肝切除，术后24–68小时死亡（3例每个时间点的动物）。所有动物都接受了腹腔注射。压井前2h注射30μg/g BrdUrd（BrdU）。这个纵坐标显示BrdUrd标记的肝细胞在各种时间点。条形图表示平均值的SD。▪, 野生型C57BL/6小鼠；○, TNFR-I淘汰赛老鼠。
因为肝细胞增殖在40–68小时内受到严重抑制敲除动物PH值后，确定是否部分肝切除TNFR-I基因敲除小鼠将存活最终使他们的肝脏再生。TNFR-I基因敲除后的死亡率PH值在PH值后的前2天可忽略不计，但为50%或以上在第3天和第5天之间。与野生动物相比，存活下来敲除小鼠在第7天和第14天出现再生缺陷手术，通过测定肝-体重量估算比率。在野生型小鼠中，肝脏重量与体重之比为7和在PH后14天分别对应于78%和95%的非手术、完整动物的比率。TNFR-I淘汰赛比率在PH后7天和14天，分别为55%和78%非手术敲除小鼠的肝体重比（统计重要时间P（P）< 0.005). 肝脏重量增加PH后1周淘汰的动物至少在一定程度上是一种后果因为BrdUrd标记肝细胞此时，基因敲除小鼠的死亡率高于野生型小鼠（数据没有显示）。总之，TNFR-I的DNA复制严重受损PH后敲除小鼠至少4天，约50%动物死亡。存活下来的敲除小鼠可以再生肝脏尽管再生速度比正常情况慢肿块恢复至少持续2周。
PH.术后肝脏中IL-6 mRNA的检测。
IL-6是一种肝脏急性期反应的主要调节因子体内和STAT3诱导剂(31，37——39). 它的转录受到通过NF-κB激活的TNF(40，41). 我们最初试图非手术组和部分手术组肝组织IL-6 mRNA的检测通过Northern印迹分析进行肝切除小鼠，但未成功，正如已经报道的那样(42). 然后我们开发了一种逆转录酶PCR比较野生型和野生型PH后IL-6 mRNA表达的试验TNFR-I基因敲除小鼠（图。). 放大反应在非饱和条件下进行，使用30放大周期（参见材料和方法). IL-6 mRNAPH后野生型和敲除型小鼠的肝脏中增加，术后4h达到峰值。定量信使核糖核酸在这些提取物中，用1μg野生型和敲除小鼠肝脏RNA 4PH后h。野生型小鼠的RNA与10−1–10−2阿托莫/微升竞争引物。敲除小鼠IL-6 mRNA的竞争是以10倍竞争对手浓度获得−3attomoles/μl，表明IL-6 mRNA减少了>PH后TNFR-I基因敲除小鼠的肝脏中有10倍。
PH后IL-6 mRNA表达(A类)野生型（WT）和TNFR-I敲除（TNFR-I-KO）小鼠部分手术后0.5–5小时切除肝脏并处死，如的顶部A类.M，分子量标记车道；销售时点情报系统，IL-6 mRNA阳性对照（CLONTECH）；阴性，未添加mRNA逆转录步骤。(B类)IL-6 mRNA的定量4小时后野生型和敲除型小鼠肝脏的竞争性PCRPH.竞争对手浓度显示在B类IL-6 mRNA的产物大小为638 bp，435 bp竞争性片段。
TNFR-I中肝细胞复制和STAT3结合缺陷敲除小鼠被IL-6纠正。
根据测量上述IL-6 mRNA，我们试图确定注射IL-6是否会逆转DNA合成和TNFR-I基因敲除中存在转录因子结合缺陷老鼠。我们在PH前30分钟给小鼠注射IL-6，并杀死动物在手术后40小时，接受BrdUrd后2小时。图。表明IL-6注入TNFR-I基因敲除小鼠完全纠正了DNA复制缺陷存在于这些动物中。注射IL-6的敲除小鼠也有类似的反应死亡率与野生型小鼠相同，并且没有显示出肝脏中形成的大脂肪空泡堆积PH.BrdUrd掺入肝细胞后TNFR-I基因敲除动物在PH后40小时注射IL-6的TNFR-I敲除物的数量没有差异比野生型小鼠高出3倍TNFR-I基因敲除小鼠。相比之下，注射相同剂量的在PH引起DNA抑制前不久，IL-6进入野生型小鼠合成。NF-κB、AP-1和STAT3的凝胶迁移率分析IL-6注射TNFR-I基因敲除小鼠PH后3小时结合发现注射细胞因子后完全纠正STAT3结合的缺陷。然而，IL-6并没有引起NF-κB结合增加（图。). 尽管TNFR-I基因敲除小鼠注射IL-6增强AP-1结合这些动物肝脏中形成的复合物仍然缺乏c-Fos分量（数据未显示）。
IL-6对大鼠肝细胞DNA合成的影响TNFR-I基因敲除小鼠（TNFR-I-KO）。野生型（WT）和TNFR-I小鼠术后40h行部分肝切除并处死。三只TNFR-I基因敲除动物和三只野生型小鼠接受皮下注射。PH前30分钟注射重组人IL-6（1 mg/kg）。所有小鼠在处死前2小时注射BrdUrd（BrdU）（见图。). 纵坐标显示标记为BrdUrd公司。
IL-6对转录因子结合的影响TNFR-I基因敲除小鼠。野生型和TNFR-I小鼠部分PH后3h肝切除并处死一组基因敲除小鼠接受了IL-6的皮下注射（见图。). 核提取物（由每组两只动物制备）通过EMSA分析如图所示。（10μg/车道）。车道：1、野生型小鼠；2,TNFR-I基因敲除小鼠；TNFR-I基因敲除小鼠注射IL-6。右侧箭头指示STAT3频带的位置。
讨论
这项工作确立了TNF信号通过TNFR-I可以在PH后启动肝再生，IL-6是关键再生肝脏中TNF基因激活的靶点。击倒小鼠缺乏TNFR-I的肝细胞复制严重缺陷PH后的前4天，存活动物（<50%total）最终使他们的肝脏再生，但正常的肝脏重量与体重之比仍未完成2PH后数周，此时再生过程已经开始终止于野生型小鼠。IL-6逆转了TNFR-I缺乏导致肝细胞复制，纠正了STAT3和AP-1结合存在缺陷，但几乎没有逆转PH后NF-κB结合的完全抑制。这些实验解决肝脏再生认识中的一个长期谜团将TNF确定为该过程的发起人，并表明通过其受体之一发出信号可以启动导致数小时后DNA合成的事件。然而，这些实验并没有解决TNF是否是肝脏再生的唯一发起人，或者更可能是在众多因素中，这些因素本身并不足以引发全面的再生反应。我们也没有检查注射IL-6可使其他肝脏生长指标正常化除了DNA复制。本论文提交给出版，克雷斯曼等。(31)证明肝脏IL-6缺乏小鼠的再生严重受损。PH后，无在IL-6基因敲除的肝脏中可以检测到STAT3结合，并且AP-1的表达，myc公司细胞周期蛋白D1被抑制。白介素-6注射预防了肝脏损伤，恢复了STAT3结合，并纠正了这些动物肝细胞DNA合成受损(31). 这些这些结果补充了我们自己的观察结果，综合起来与以下事件顺序一致肝脏再生：
已知肝细胞增殖需要TNF由直接的肝脏有丝分裂原如硝酸铅诱导(43). 我们的工作和使用TNF抗血清获得的数据(17)确定TNF还可以启动肝细胞增殖以应对组织丢失。尽管TNF是PH后NF-κB的主要诱导因子，高水平的肝细胞再生肝脏中的复制可以在缺乏只要IL-6适当存在，NF-κB结合浓度。这一结论是基于以下观察结果注射IL-6的TNFR-I基因敲除小鼠肝细胞水平正常PH后复制，但NF-κB结合很少。
在TNFR-I和IL-6基因敲除小鼠中，纠正缺陷IL-6注射在DNA复制中与STAT3相关激活。这种转录因子也能激活基因参与TNF、IL-6、，和其他细胞因子(15，16，28，30). 尽管进一步的研究结果表明，STAT3和细胞因子能够导致STAT3激活在增殖和肝脏的炎症反应。相似的启动机制可以导致不同的生物反应是一个尚未解决的问题。IL-6抑制培养细胞中生长因子诱导的DNA复制肝细胞(44)但可能增加肝细胞DNA合成在里面活泼地在完整的非部分肝切除动物中(45). 在我们的实验表明，野生型小鼠注射IL-6具有抑制作用对PH后DNA合成的影响，而它在TNFR-I基因敲除小鼠肝脏IL-6 mRNA缺陷。因此IL-6对肝细胞DNA复制的刺激作用可能只发生肝内IL-6浓度范围相对较窄。
注射抗肿瘤坏死因子血清可以抑制C/EBPβPH后的结合和c-Jun合成(13). 这些改动都没有在TNFR-I基因敲除小鼠中存在。可能的解释差异在于这些途径的激活可能涉及TNFR-II，在TNFR-I基因敲除小鼠中是完整的。另一方面，敲除小鼠缺乏AP-1的c-Fos成分抗体阻断实验中未观察到的变化(13). 在小鼠成纤维细胞中，NF-κB活化和增殖对TNF的反应完全由TNFR-I介导，而AP-1和蛋白激酶途径可以通过TNFR-I和TNFR-II公司(46). 初步实验表明NF-κB肝细胞中的激活也仅由TNFR-I介导，但用缺乏TNFR-II和双受体的小鼠进行的实验淘汰赛对于准确确立每个人的角色是必要的与肝细胞增殖相关的TNF信号中的受体。
有人认为脂多糖从PH后肠道进入门脉循环诱导肝脏TNF生成(47)，但尚未确定其浓度是否在PH后门静脉血增加。肝静脉中未检测到TNF正常情况下的血液（即通过肝脏的血液）大鼠，但PH值在1.5到4小时后升高(16). 这个增加可能是LPS处理和TNF改变的结果非实质细胞合成(48). 因此，非实质细胞可能在开始时处理肝细胞有丝分裂信号肝脏再生。我们提出肝细胞在PH需要细胞因子和生长因子的顺序作用(13).我们认为TNFR-I通路的激活涉及IL-6和STAT3是肝细胞获得增殖的机制再生肝脏的能力。
致谢
我们感谢J.Bruix和R.Pierce的评论以及T.Carlson用于准备手稿。这项工作得到了授予CA 23226和35249。
脚注
缩写：PH，肝部分切除术；肿瘤坏死因子因子；白细胞介素；TNFR-I，TNF受体1；EMSA，电泳流动性变化分析。
工具书类
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