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图2。

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Rheb刺激S6K和4EBP1的磷酸化。(A类)Rheb公司刺激S6K和4EBP1的磷酸化。HA-S6K和标志4EBP1在有或无Myc-Rheb(100 ng)的情况下转染到HEK293细胞。S6K的磷酸化通过磷酸特异性抗体pS6K(T389)、,而4EBP1的磷酸化是由迁移率变化决定的(上面的面板)。还测定了内源性S6K的磷酸化(降低面板)。(B类)Rheb刺激S6K磷酸化以剂量依赖的方式。HA-S6K(15 ng)与0,2,5,20,50和100 ng Myc-Rheb。(C类)Rheb的效应域是需要刺激S6K磷酸化。HA-S6K与野生型Rheb(100 ng)、RhebL64(40 ng)、Reheb-5A(200 ng)和RhebN20(300ng)。还显示了Rheb突变体的相对表达。(D类)不同GTPases刺激S6K磷酸化。构成活跃Cdc42、Rap1、Rab5、RhoA和野生型Rheb的突变体(每个100 ng)(40ng)用于刺激S6K的磷酸化。(E类)TSC2,但不是TSC1,抑制S6K磷酸化。HA-S6K与Myc-TSC1或HA-TSC2。测定了S6K的磷酸化。

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