表达额外外源基因的传染性呼吸道合胞病毒的恢复。

以前的一份报告描述了从感染性重组呼吸道合胞病毒（RSV）A2株cDNA中恢复的情况（P.L.Collins、M.G.Hill、E.Camargo、H.Grosfeld、R.M.Chanock和B.R.Murphy，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，92:11563-115671995）。在这里，该系统用于构建含有编码氯霉素乙酰转移酶（CAT）的额外基因的重组RSV。CAT编码序列的两侧是RSV特异性基因片段和基因编码基序，这是病毒RNA依赖性RNA聚合酶的转录信号。将RSV-CAT嵌合转录盒插入完全cDNA编码的阳性RSV抗原组的G和F基因之间的区域，回收感染性CAT表达重组RSV。通过Northern（RNA）杂交分析证明插入基因转录到预测的亚基因多聚腺苷mRNA中，并通过酶分析和放射免疫沉淀检测编码蛋白。细胞内CAT、SH、G和F mRNA的定量显示CAT mRNA得到有效表达，G和F m RNA（代表插入CAT基因两侧的基因）的水平与野生型重组RSV表达的水平相当，就主要病毒蛋白的合成水平而言，含CAT病毒和野生型病毒非常相似。通过八个连续传代后的菌斑纯化获得的25株RSV分离株中，每株都表达CAT，表明外源基因以功能形式被忠实地保持。通过反转录和PCR分析没有发现外源序列缺失的证据。这一发现表明，RSV基因组可以接受并保持762个外源序列核苷酸的长度增加，并且可以通过工程编码额外的第11个mRNA。额外基因的存在导致斑块直径减少10%，并与病毒生长延迟和体外病毒产量减少20倍有关。因此，将一个额外的基因引入RSV基因组可能代表一种衰减方法。重组RSV表达外源基因的能力对基础研究和活重组疫苗的开发具有重要意义。