美国国家科学院院刊。2000年12月19日；97(26): 14145–14150.
雄激素受体的小分子共价修饰泛素样修饰物1（SUMO-1）
,* ,* ,*†和*‡
赫蒂·波卡
*生物医学研究所生理学系†赫尔辛基大学临床化学系，FIN-00014，芬兰赫尔辛基
乌拉·卡沃宁
*生物医学研究所生理学系，以及†赫尔辛基大学临床化学系，FIN-00014，芬兰赫尔辛基
奥利·A·Jänne
*生物医学研究所生理学系†赫尔辛基大学临床化学系，FIN-00014，芬兰赫尔辛基
乔尔马·J·帕尔维莫
*生物医学研究所生理学系†赫尔辛基大学临床化学系，FIN-00014，芬兰赫尔辛基
*生物医学研究所生理学系†赫尔辛基大学临床化学系，FIN-00014，芬兰赫尔辛基
编辑：Elwood V.Jensen，Karolinska Institute，Huddinge，瑞典，2000年10月30日批准
摘要
SUMO-1的修饰被提议在蛋白质中发挥作用目标和/或稳定性。SUMO-1-结合酶Ubc9与配体激活的转录雄激素受体（AR）相互作用属于类固醇受体超家族的因子。我们在这里展示AR在雄激素增强方式及其主要受体位点的鉴定AR的N末端结构域。磺酰化赖氨酸残基的取代增强AR的转录活性而不影响其反抑制活性。有趣的是，相同的Lys残基形成最近描述的转录协同控制基序的核心在AR中[Iñiguez-Lluhi，J.A.&Pearce，D.（2000）摩尔。细胞。生物. 20, 6040–6050]. 这些图案与与sumoyalization共有序列完全一致，也存在于糖皮质激素、盐皮质激素和孕酮受体。综合起来，我们的数据表明sumoylation是一种调节类固醇受体功能的机制。
类固醇受体雄激素受体（AR）是配体调节的转录因子属于核受体超家族。它们传达了效果类固醇激素对细胞生长、分化、，和体内平衡(1). 为了调节转录，受体与靶基因和/或展示物的特定激素反应元件通过蛋白质与其他转录因子的串扰互动。过多的协同调节蛋白被受体的不同功能域[N末端反式激活区、中心DNA结合域（DBD）和C末端配体结合域]介导反式激活和核受体的反抑制功能(1——三). 机制类固醇受体在细胞核中分隔并发现它们特定的结合基序，激素反应元件染色体DNA碱基对的数量仍然难以捉摸。偶数虽然受体的转录活性主要是由配体结合、共价修饰如磷酸化在调节中也起着重要作用(4,5).翻译后修饰通常会引起多蛋白复合物和亚细胞中的蛋白质相互作用结构。一些核受体也被认为是泛素化，以降解为目标(5——7). Ubc9SUMO-1的结合酶最近被证明与至少两种类固醇受体，AR和糖皮质激素受体（GR）(8,9). 然而，共表达的Ubc9增强了AR依赖性转录以一种似乎独立于其催化能力的方式SUMO-1共轭(9).
SUMO-1修饰（sumoyalization）途径类似于泛素结合，但参与这两个过程的酶是不同的(10). SUMO-1（也称为sentrin、GMP1、PIC1和Ubl1，或在酵母中作为Smt3）被E1酶和随后转移到E2-结合酶Ubc9(11——15).氨酰化是可逆的(16——18). 编码所有关键蛋白质的基因酵母中的修饰过程至关重要机器保存得很好(13,16,19). sumoylation似乎扮演多种角色，包括(我)蛋白质靶向，(ii（ii）)蛋白质稳定，以及(三)转录激活。SUMO-1与RanGAP1靶点的结合核孔复合体的其他细胞溶质蛋白(20——22)，SUMO-1修饰早幼粒细胞白血病蛋白据报道将其定向到称为早幼粒细胞的亚核结构域白血病蛋白核体(23,24). 后一个修改可以也需要用于早幼粒细胞白血病蛋白介导的招募其他蛋白质对这些结构的影响(25). Sumoylation可以防止靶蛋白降解，以IκBα为例(26). 这个sumoylation在转录调控中的潜在重要性是最近的报告强调，SUMO-1对p53的修饰可以增强其转录活性(27,28). 本研究表明核受体AR被SUMO-1共价修饰。我们有确定了AR和表明SUMO-1在某些情况下的修改确实会抑制有趣的是，sumoylation位点是相同的AR和GR中的负基序，最近被证明限制这些受体对启动子的转录协同作用包含复合响应元素(29).
材料和方法
材料。
描述了兔抗AR多克隆抗体K183(30).小鼠单克隆抗Flag抗体M2，兔多克隆抗green荧光蛋白（抗-GFP）和小鼠单克隆抗-GMP-1分别为分别来自Sigma、Santa Cruz Biotechnology和Zymed。辣根过氧化物酶偶联抗兔IgG和抗鼠IgG来自Zymed。Lissamine-rodamine结合山羊抗鼠IgG为来自Jackson ImmunoResearch。
质粒构建。
通过插入双链构建pcDNA-Flag载体将Flag表位编码到千磅我/巴姆哺乳动物表达的HI位点载体pcDNA3.1（+）（Invitrogen）。要创建pcDNA-Flag-hAR，区域编码hAR的N末端区域的基因被克隆到框架内Bgl公司二/生态RI进入巴姆HI（高）/生态pcDNA-Flag的RI站点。随后，这个生态RI公司/Xba公司编码C末端的I片段插入部分hAR以产生全长受体表达矢量。hAR中的点突变K386R和K520R由重叠PCR，将突变片段导入使用pcDNA-Flag-hAR生态91I型/生态47III和千磅我/Hin公司hAR cDNA中的dIII位点，分别产生pcDNA-Flag-K386R、pcDNA-Flag-K520R和pcDNA-Flag-K386R/K520R表达结构。pcDNA-标记-hARΔDBD，缺乏576–657氨基酸，是通过结扎Bgl公司二/巴姆HI片段从pEGFP-hARΔDBD到这个巴姆pcDNA-Flag的HI站点。谷胱甘肽S公司-转移酶（GST）-Ubc9通过插入PCR-扩增片段编码Ubc9氨基酸2-158进入巴姆HI（高）/生态pGEX-5X-1的RI位点（Amersham法玛西亚）。pFlag-SUMO-1是通过插入PCR扩增的编码SUMO-1氨基酸2-101至Hin公司dIII型/萨尔pFlag-CMV-2的I站点。对于pEGFP-SUMO-1GA突变，PCR引物携带的点突变转换G97A。表达GST-SUMO-1和增强的GFP（EGFP）-SUMO-1，将SUMO-1 cDNA片段插入巴姆HI（高）/萨尔pGEX-5X-1或Bgl公司二/萨尔pEGFP-C2（克隆技术）的I位点。全部PCR-扩增片段通过测序进行验证。pARE公司2-已描述TATA-LUC和pFLAG-Ubc9(9,31). pCMV-RelA和pκB6tk-LUC来自Patrick Baeuerle（德国弗莱堡阿尔伯特·路德维希大学）(32). pGEM3Z-hGR由Eckardt Treuter（卡罗林斯卡研究所，瑞典哈丁奇）。pSG5-TRα1、pCMV5-hERα和pCMV5-1ERβ载体是Paul M.Yen（贝塞斯达国立卫生研究院，医学博士）、Benita Katzenellenbogen（伊利诺伊大学，乌尔班纳分校）和Jan-Åke Gustafsson（瑞典哈丁格卡罗林斯卡研究所），分别是。对于pSG5-hERα和pSG5-h ERβ，相应的cDNA将pCMV5中的构造插入到pSG5中。
细胞培养和转染。
COS-1和HeLa细胞来自美国型培养收集并在提供10%FBS/25单位/ml的DMEM中培养青霉素和链霉素。对于HeLa细胞，非必需氨基酸也添加了。对于免疫沉淀实验，3.5×105COS-1细胞接种在6厘米培养皿上转染前24小时。转染前两小时，细胞接收到含有10%煤焦状FBS的新鲜培养基。通过使用FuGene 6试剂（罗氏分子生物化学），0.5μgFlag-AR表达质粒和1.5μg GFP-SUMO-1或EGFP-C2转染。转染后8小时，提供细胞含100 nM睾酮。用于交易激活和转抑制化验，5×104COS-1细胞接种于12孔板转染前24小时和转染前4小时转染后，细胞接受含有10%的新鲜培养基炭化裂解FBS.报告质粒（150 ng），50 ng pCMVβ（CLONTECH），AR表达结构的指示量为转染。转染18小时后，细胞接受新鲜培养基，含2%炭屑FBS和100 nM睾酮或载体。培养30小时后，细胞收获，荧光素酶（LUC）和β-半乳糖苷酶活性按说明进行化验(33,34). pCMV病毒感染2-LUC，即包含CMV-ARE2-TATA序列(30)英寸千磅我/Hin公司pGL3-Basic（Promega）的dIII位点为用于启动子干扰分析。
SUMO-1共轭体外.
按照所述纯化GST-Ubc9和GST-SUMO-1(35)，洗脱TBS中[137 mM NaCl/20 mM Tris●HCl（pH 7.6）]/10 mM减少谷胱甘肽，并针对TBS透析过夜。SUMO-1激活酶组分基本上是从HeLa细胞中提纯的(15)，除了使用Q Sepharose Fast Flow（Amersham Pharmacia）而不是Mono Q。对于结合分析，受体结构是翻译在体外使用TNT兔网织红细胞系统（Promega）[35S] 会议。一微升在体外翻译产品是与5μl GST-SUMO-1、4μl GST-Ubc9和2μl在1 mM存在下，30°C下1 h的HeLa细胞分数DTT/4 mM氯化镁2/2mM ATP。反应是通过添加15μl 2×SDS样品缓冲液终止。这个样品在95°C下加热5分钟，通过电泳分离变性条件下7.5%聚丙烯酰胺凝胶（SDS/PAGE），以及通过荧光照相术显示。
免疫沉淀和免疫印迹。
在含有20 mM的PBS中收集COS-1细胞N个-乙基马来酰亚胺和细胞提取物在改良RIPA缓冲液[50 mM Tris●HCl（pH 7.8）/150 mM NaCl/5mM乙二胺四乙酸钠/15 mM氯化镁2/1%NP-40/0.75%钠脱氧胆酸盐/1 mM DTT]，1:100稀释蛋白酶抑制剂混合物（西格玛）和20 mMN个-乙基马来酰亚胺。免疫沉淀用小鼠单克隆抗Flag抗体进行如下试验(31). 结合蛋白在2×SDS样品缓冲液中释放，在7.5%SDS/PAGE上溶解，转移到Hybond增强化学发光硝化纤维素膜，并使用增强化学发光检测试剂（Amersham Pharmacia）根据制造商的说明。
结果
AR由SUMO-1修改。
尽管我们之前的结果表明Ubc9能够激活AR的方式与它的sumoylation无关活动(9)，仍然有必要检查AR的可能性由SUMO-1共价修饰。国旗标记的人类AR和SUMO-1融合GFP在COS-1细胞和细胞提取物中瞬时表达在以下人员在场的情况下准备N个-乙基马来酰亚胺，它是已知可抑制SUMO-1去共轭在体外(16,17).用多克隆抗AR抗体对细胞提取物进行免疫印迹显示三条免疫反应带，一条主要≈115-kDa带对应于未修改的AR和两个强度较低的AR，速度较慢迁移带（≥220kDa）（图。A类). 要了解缓慢迁移的带代表GFP标记的SUMO-1修饰的AR，用Flag抗体进行免疫沉淀。两种抗GFP和抗SUMO-1抗体检测到免疫沉淀中的分子量较高，而115-kDa未检测到未经修改的AR波段（图。 B和C). 当GFP标记SUMO-1G97A突变时与靶蛋白结合，用于替代野生型（wt）SUMO-1型(36)，未发现聚合AR形式（图。，车道4和5）。这些结果表明，缓慢迁移的谱带代表SUMO-1修改了AR的形式，并建议至少有两种受体中的sumoylation位点。
AR由SUMO-1修改。生长在6厘米培养皿上的COS-1细胞用编码标记的wt-AR（wt）或缺乏AR的载体转染大多数DBD和铰链区域（ΔDBD）以及GFP标记的SUMO-1（SUMO）或SUMO-1GA（SUMOGA）表达载体。细胞收到100nM睾酮（T）或载具在收获前12小时表明。5%的细胞提取物用AR进行免疫印迹抗体(A类)剩下的人用抗Flag抗体进行免疫沉淀。免疫沉淀物用抗GFP抗体免疫印迹(B)或抗SUMO-1抗体(C). 箭头描绘了缓慢的迁移的sumoylated形式的AR。
COS-1细胞的配体处理增强了AR的SUMO-1修饰（图。，车道2与3）。这并不是因为细胞中AR蛋白的数量（图。A类). 相反，配体的作用可能与全息-AR到核心，Ubc9主要位于这里（英国。，未发表的作品）。只有相对较小比例的apo-AR存在在COS-1细胞核中，配体处理诱导完全转移全息-AR到原子核(37——39). AR突变体ΔDBD，缺乏大多数DBD和侧翼铰链区域（氨基酸残基576–657），包含二分核定位信号(37,38)，是配体暴露时向细胞核转移不良无法识别DNA(39). ΔDBD突变体的酰化较少虽然修改模式保持不变，但效率高于wt-AR不变（图。A类，第6和第7车道）。因为已知缺失的AR区域有助于AR–Ubc9相互作用(9)SUMO-1与ΔDBD突变体的连接效率较低也源于它与Ubc9的低效交互。
K386是SUMO-1修改的主要AR站点。
蛋白质的Sumoylation已被证明发生在特定的Lys残基，在大多数情况下嵌入到一致序列中（I/L/V）KXE，其中X代表任何氨基酸(40,41). 表达式COS-1细胞中的一系列AR缺失突变体表明AR的两种主要缓慢迁移形式取决于包含N端氨基酸337–553的区域（数据未显示）。该区域包含三个Lys残基，即K347、K386和K520。在这三个残基中K386（序列IK（K）LE）和K520（序列VK（K）SE）与提议的SUMO-1附件共识序列相匹配。要测试这些残基是否确实被酰化，点突变K386R和K520R被引入标记人类AR。表达COS-1细胞提取物AR的免疫沉淀这些结构揭示了AR的K386R突变体只是弱的磺酰化（图。A类，车道4）。尽管K520R突变对作为K386R突变的修饰，AR的K520R突变是尽管如此，与wt AR相比，sumoyalized的效率较低（图。A类，车道5）。当点突变结合在一起时，没有SUMO-1附着在双突变体上（图。A类，车道6）。同样，在没有外胚层的情况下表达SUMO-1，免疫印迹显示在表达wt-AR但不表达化合物的细胞突变体（图。B上部). 免疫印迹法带有抗SUMO-1抗体的免疫沉淀AR证实迁移较慢的AR形式确实代表了sumoylated AR（图。B下部).
K386是AR.COS-1细胞的主要sumoylation位点pGFP-SUMO-1或空表达载体，如wt所示hAR、K386R、K520R或K386R/K520R标志。细胞收获前12小时接受100 nM睾酮。免疫印迹免疫沉淀如图所示。.(A类 上部)细胞免疫印迹（WB）抗AR抗体提取物（α-AR）；(A下部)抗Flag抗体免疫沉淀及后续用抗GFP抗体（α-GFP）进行免疫印迹。(B
上部)用表达载体转染COS-1细胞编码wt-AR或K386R/K520R突变体的载体，以及细胞用抗AR抗体免疫印迹法分析提取物（α-AR）；(B下部)抗Flag免疫沉淀抗体和随后的抗SUMO-1抗体免疫印迹（α-SUMO）。箭头表示缓慢迁移的SUMO-1-共轭AR。
Ubc9催化AR的氨酰化体外.
为了研究Ubc9在SUMO-1修饰AR中的催化作用，35S-Met标记的AR在不存在和GST-Ubc9与GST-SUMO-1和HeLa细胞组分的存在含有SUMO-1-活化酶(15). Ubc9被要求生产AR的两种缓慢迁移形式，对应于AR SUMO-1共轭（图。A类，车道1和2）。此模式与检测到的汇总AR形式一致通过抗AR抗体免疫印迹法与GFP-SUMO-1结合（图。A类上部)，因为GST-SUMO-1的大小与GFP-SUMO-1。如果HeLa细胞分数或GST-SUMO-1从反应中，缓慢迁移的AR带无法检测到（数据未显示）。AR的K386R突变体只有一个非常弱的在Ubc9存在的情况下获得了额外的谱带（图。A类，车道3）。K520R突变体与Ubc9的孵育只产生了另外一个更强烈的主频带与K386R相比（图。A类，车道4）。重要的是，没有检测到双链淀粉酰化AR突变体。总之，这些结果证实AR被SUMO-1修改氨基酸K386和K520，前者是主要受体位点。
Ubc9催化SUMO-1与AR和GR的连接在里面体外. (A类)体外-翻译35培养S-Met标记的wt和突变的AR结构GST-SUMO-1和含有SUMO-1活化的HeLa细胞组分GST-Ubc9存在（+）或不存在（−）时的酶。样品在7.5%SDS/PAGE上进行解析并进行荧光照相。箭头描绘了缓慢迁移的苏门答腊形式；星星，未修改的AR(B)体外相扑1与GR、ERα、ERβ和TRα的偶联反应。反应在有（+）或无（−）GST-Ubc9的情况下进行中描述的A类.
研究其他一些核受体是否可以作为Ubc9的底物，我们在类固醇受体和甲状腺激素受体α的序列（TRα）。AR、GR、盐皮质激素和孕酮受体和GR的配体结合域，盐皮质激素受体和TRα含有推测的SUMO-1附着位点，而雌激素受体α（ERα）和β（ERβ）不具有与一致序列匹配的序列（表). 孵化后在里面体外-相同条件下的转化GR、ERα、ERβ和TRα与AR的条件一样，GR在Ubc9存在但不存在（图。B左侧). 相反，ERα没有Ubc9-依赖性衍生物，检测到ERβ或TRα（图。B右侧)，这表明后一种受体不是sumoylated。这个ERα和ERβ的高分子量条带不太可能代表SUMO-1共轭物，因为它们的外观并不取决于Ubc9，这是迄今为止已知的唯一的SUMO-1偶联酶。
SUMO-1受体位点的破坏增强转录AR的活动。
使用最小ARE的反激活分析2TATA-LUC公司含有两种激素反应元件的报告员被用来检测SUMO-1附着位点中的取代是否影响AR受体的转录活性。K520R突变体被SUMO-1修饰的几乎和wt-AR一样具有转录活性在COS-1细胞中，与wt-AR细胞无明显区别（图。A类). 相比之下，K386R和作为SUMO-1缀合的不良靶标的K386R/K520R突变体，其活性是wt AR的1.9倍和2.4倍，分别是。更重要的是，复合突变体始终为2.4-在广泛的范围内，活性是wt受体的3.3倍表达质粒数量（1–100纳克/孔）和睾酮浓度（0.1–100 nM）（图。B和数据未显示）。K386R/K520R突变体的较高转录活性不能用受体蛋白水平解释是因为，如果有的话双突变体的表达水平低于wt-AR as通过免疫印迹法进行评估（图。B嵌入). 在除COS-1细胞外，K386R和K386R/K520R突变体为2-和HeLa细胞中活性是wt-AR的2.4倍（数据未显示）。
取代sumoylation位点激活AR(A类)10 ng wt-Flag-AR和突变体K386R、K520R的反式激活，在最小pARE上研究K386R/K520R2-TATA-LUC公司COS-1细胞中的报告细胞（150 ng）。细胞接受100 nM转染后18小时，睾酮（+T）或载体（−T）。LUC公司细胞提取物的活性根据转染情况进行调整利用β-半乳糖苷酶活性提高效率。AR在睾酮的含量设为100，平均值±SD至少显示了六个独立的实验。(B)如中所示A类，除了用1-100转染细胞外显示AR表达质粒的ng。转染量通过添加空表达载体来平衡DNA。(插入)wt-AR和K386R/K520R的表达水平与中所示数据对应的实验中的突变B用来自同一样本的AR抗体免疫印迹AR用于报告基因的裂解物（来自三个重复的微孔）分析。(C)共表达Ubc9对AR和K386R/K520R的交易激活。条件如下A类，除了pFLAG-Ubc9的指示量（单位：μg）共转染，DNA总量通过添加清空pFLAG-CMV2。黑色条表示wt AR，灰色条表示K386R/K520R突变体。
我们之前已经表明，Ubc9的过度表达可能导致增强AR介导的转录。如图所示。C，wt-AR的配体依赖性活性明显增强（3.2倍）当100 ng/孔Ubc9同时表达时，而复合突变体对Ubc9几乎没有反应（1.2倍）。然而，K386R/K520R突变体受到更高Ubc9剂量（300尽管诱导（1.9倍）明显低于wt受体（5.1倍）。因此，Ubc9过度表达的影响依赖AR的转录是复杂的，而不仅仅是直接的增强AR的sumoylation的后果。这与发现sumoylation阴性Ubc9突变体也能刺激依赖于AR的事务激活(9). 事实上，Ubc9的过度表达可能，暂停sumoylation机器，因为共轭体系有可能成为极限。这将导致增强而不是抑制AR依赖性转录。
与转录激活相反，反转录功能AR的表达不受SUMO-1受体位点取代的影响，因为wt-AR和K386R/K520R突变体都抑制了NF-κB/RelA激活的启动子达到相同程度（图。A类). 此外，影响AR对配体结合和DNA结合的点突变为在完整细胞中进行研究。与下面的表达式一致复合突变体水平，转染突变体的细胞构建物显示雄激素结合位点比细胞少约30%通过全细胞结合分析评估转染的wt AR（数据不显示）。化合物突变体的DNA结合能力，通过使用相同的双激素反应进行启动子干扰分析ARE中的元件2TATA-LUC略低（10–20%）比wt-AR(30)（图。B)，它位于符合雄激素结合数据。
K386R/K520R突变对AR和完整细胞中的DNA结合。(A类)压制wt-AR和K386R/K520R突变体的依赖于RelA的反式激活。COS-1系统用pκB转染细胞6tk-LUC（150 ng），pCMV-RelA（30 ng）和AR表达载体（150 ng）。相对LUC无共转染AR的活性设为100。值为指六个独立实验的±SD。(B)wt和突变AR与雄激素反应元件的结合启动子干扰试验测定的细胞(30). COS-1细胞用pCMV-ARE转染2-LUC报告员（100 ng）和wt Flag-AR和K386R/K520R的增加量（10、50和100 ng）突变表达载体。DNA总量通过必要时添加空pcDNA3.1（+）。报告基因活性无AR表达载体设为100，平均值±SD从三个独立的实验中得出。黑色和灰色条分别描述wt AR和K386R/K520R突变体。
讨论
在本研究中，我们发现配体激活转录因子AR被SUMO-1完整地共价修饰细胞和在无细胞条件下。雄激素促进了细胞，可能是通过促进细胞质AR的核转移。人AR的sumoyalization位点是K386和K520。前者出现了作为sumoylation的主开关，因为K386突变体虽然K520突变破坏了SUMO-1共轭更少。The overall cellular distribution of theK386R/K520R突变体及其激素诱导的核移位与wt AR的非常相似（未显示数据）。两者均为磺酰化这些位点在哺乳动物AR序列中是完全保守的对应于人类K386也存在于爪蟾应收账。
除了AR之外类固醇受体家族内含电位（I/L/V）K（K）XE公司SUMO-1的附着点（表). 在本研究中，我们表明GR由SUMO-1修改在体外在同一Ubc9-dependent下与AR所用条件相同。有趣的是AR和N末端结构域中的两个潜在修饰位点GR与最近发现的蛋白质基序相同证明限制了两者的转录协同作用受体(29). 根据我们关于AR的数据，这些站点的中断通过用精氨酸取代中心SUMO-1受体Lys，导致在含有超过一种激素反应元件(29). 协同控制主题是与苏美化共识序列相同，它们可以是发现于许多其他无关的负调控区域，转录因子(29)这表明，苏美化可以起到控制其活动的一般机制。
与AR相反，p53的sumoylation最近被牵涉到p53依赖性转录的激活(27,28). 然而，与AR类似sumoylation缺陷型p53突变等于或高于wt p53的表达，这取决于所研究的启动子。在AR的情况下，SUMO-1受体位点突变的程度与转录活性增加，表明sumoylation可以事实上，衰减AR函数。这与最近的一份报告相一致表明c-Jun受sumoylation负调控(42). 这个结果K386R/K520R突变体通过GR相互作用被激活蛋白质1（GRIP1）以类似于wt-AR（数据未显示）的方式存在事实上，sumoylation网站与AR的核心事务激活域(43). 苏美化遗址定位到参与与激素结合配体结合域的相互作用，以及因此，将笨重的“侧链”连接到该区域是可能会干扰AR的分子内合成能力联系人(33). AR的NF-κB转抑制活性(44)不是受取代sumoylation位点的点突变的影响。这个表明sumoylation调节了特定于交易激励流程。这些结果与通过使用协同控制基序分解GR获得(29).
只有相对较小比例的总AR可以检测为在转染细胞中与SUMO-1结合。这还不完全在与反式激活实验的数据一致，其中置换负责sumoylation的AR残基明显增强了AR的转录活性。这些结果表明修改是暂时的，并且存在动态平衡SUMO-1结合受体和非结合受体之间。因此，sumoylation可能代表一种快速和AR功能在不同启动子环境中的可逆衰减。
总之，SUMO-1修改在转录调控正在出现。当前结果表明限制类固醇受体的新调节系统的存在活动。AR的sumoylation的进一步表征在各种生理过程和病理学中的意义包括前列腺癌。
致谢
我们感谢卡蒂·萨斯塔莫宁、列娜·皮提拉和塞亚马基为其提供了出色的技术援助；和Jan-Åke Gustafsson，Benita Katzenellenbogen、Eckardt Treuter、Paul M.Yen和PatrickBaeuerle代表质粒。这项工作得到了来自芬兰基金会医学研究理事会（芬兰科学院）癌症研究，Sigrid Jusélius基金会，Biocentrum赫尔辛基，赫尔辛基大学中心医院，CaP CURE芬兰医学会Duodemic、芬兰文化基金会和法莫斯研究与科学基金会。
缩写
| 应收账 | 雄激素受体 |
| 希腊 | 糖皮质激素受体 |
| LUC公司 | 荧光素酶 |
| SUMO-1型 | 小泛素样修饰物1 |
| GFP公司 | 绿色荧光蛋白 |
| 消费税 | 谷胱甘肽S公司-转移酶 |
| CMV公司 | 巨细胞病毒 |
| EGFP公司 | 增强型GFP |
| TRα | 甲状腺激素受体α |
| 公共关系 | 孕酮受体 |
| ERα | 雌激素受体α |
| ERβ | 雌激素受体β |
| 数据库数据库 | DNA-结合域 |
| 重量 | 野生型 |
工具书类
1Beato M、Herrlich P、Schütz G。单元格。1995年；83:851–857.[公共医学][谷歌学者] 2McKenna N J、Lanz R B、O’Malley B W。Endocr版本。1999;20:321–344.[公共医学][谷歌学者] 4Weigel N L，Zhang Y。分子医学杂志。1997;76:469–479.[公共医学][谷歌学者] 5Lange C A、Shen T、Horwitz K B。美国国家科学院程序。2000;97：1032–1037。 [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 6Li X-Y、Boudjelal M、Xiao J-H、Peng Z-H、Asuru A、Kang S、Fisher G J、Voorhees J J。摩尔内分泌。1999;13:1686–1699.[公共医学][谷歌学者] 7Nawaz Z、Lonard D M、Dennis A P、Smith C L、O’Malley B W。美国国家科学院程序。1999;96:1858–1862. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 8Göttlicher M、Heck S、Doucas V、Wade E、Kullmann M、Cato A C B、Evans R M、Herrlich P。类固醇。1996;61:257–262.[公共医学][谷歌学者] 9Poukka H、Aarnisalo P、Karvonen U、Palvimo J J、Jänne O A。生物化学杂志。1999;274:19441–19446.[公共医学][谷歌学者] 10梅尔基奥尔·F。年收入发展生物。2000;16:591–626.[公共医学][谷歌学者] 11Desterro J M P、Rodriguez M S、Kemp G D、Hay R T。生物化学杂志。1999;274:10618–10624.[公共医学][谷歌学者] 12Okuma T、Honda R、Ichikawa G、Tsumagari N、Yasuda H。生物化学与生物物理研究委员会。1999;254:693–698.[公共医学][谷歌学者] 13Johnson E S、Schwienhorst I、Dohmen R J、Blobel G。EMBO J。1997;16:5509–5519. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 14Johnson E S、Blobel G。生物化学杂志。1997;272:26799–26802.[公共医学][谷歌学者] 15Schwarz S E、Matuschewski K、Liakopoulos D、Scheffner M、Jentsch S。美国国家科学院程序。1998;95:560–564. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 16Li S-J，Hochstrasser M。自然（伦敦）1999;398:246–251.[公共医学][谷歌学者] 17铃木T、一山A、斋藤H、川崎T、大田M、钟C H、木村M、Shimbara N、田中K。生物化学杂志。1999;274：31131–31134。[公共医学][谷歌学者] 18Gong L、Millas S、Maul G G、Yeh E T H。生物化学杂志。2000;275:3355–3359.[公共医学][谷歌学者] 19Seufert W、Futcher B、Jentsch S。自然（伦敦）1995年；373:78–81.[公共医学][谷歌学者] 20Mahajan R、Delphin C、Guan T、Gerace L、Melchior F。单元格。1997;88:97–107.[公共医学][谷歌学者] 21Mahajan R、Gerace L、Melchior F。细胞生物学杂志。1998;140:259–270. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 22Matunis M J、Wu J、Blobel G。细胞生物学杂志。1998;140:499–509. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 24Duprez E、Saurin A J、Desterro J M、Lallemand Breitenbach V、Howe K、Boddy M N、Solomon E、de ThéH、Hay R T、Freemont P S。细胞科学杂志。1999;112:381–393.[公共医学][谷歌学者] 25Ishov A M、Sotnikov A G、Vladimirova O V、Neff N、Kamitani T、Yeh E T H、Strauss J F、III、Maul G G。细胞生物学杂志。1999;147:221–233. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 26Desterro J M P、Rodriguez M S、Hay R T。分子细胞。1998;2:233–239.[公共医学][谷歌学者] 27Gostissa M、Hengstermann A、Fogalm V、Sandy P、Schwarz S E、Scheffner M、Del Sal G。EMBO J。1999;18:6462–6471. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 28Rodriguez M S、Desterro J M P、Lain S、Midgley C A、Lane D P、Hay R T。EMBO J。1999;18:6455–6461. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 29Iñiguez-Lluhi J A，Pearce D。分子细胞生物学。2000;20:6040–6050. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 30Karvonen U、Kallio P J、Jänne O A、Palvimo J J。生物化学杂志。1997;272:15973–15979.[公共医学][谷歌学者] 31Moilanen A-M、Poukka H、Karvonen U、Häkli M、Jänne O A、Palvimo J J。分子细胞生物学。1998;18:5128–5139. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 32Schmitz M L，Baeuerle P A。EMBO J。1991年；10:3805–3815. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 33Ikonen T、Palvimo J J、Jänne O A。生物化学杂志。1997;272:29821–29828.[公共医学][谷歌学者] 34罗森塔尔N。方法酶制剂。1987;152:704–720.[公共医学][谷歌学者] 35Poukka H、Aarnisalo P、Santti H、Jänne O A、Palvimo J J。生物化学杂志。2000;275:571–579.[公共医学][谷歌学者] 36Kamitani T M、Nguyen H P、Yeh E T H。生物化学杂志。1997;272:14001–14004.[公共医学][谷歌学者] 37Jenster G、Trapman J、Brinkmann A O。生物化学J。1993;293:761–768. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 38Zhou Z、Sar M、Simental J A、Lane M V、Wilson E M。生物化学杂志。1994;269:13115–13123.[公共医学][谷歌学者] 39Poukka H、Karvonen U、Yoshikawa N、Tanaka H、Palvimo J J、Jänne O A。细胞科学杂志。2000;113:2991–3001.[公共医学][谷歌学者] 40Sternsdorf T、Jensen K、Reich B、Will H。生物化学杂志。1999;274:12555–12566.[公共医学][谷歌学者] 42缪勒·S、伯杰·M、勒亨布雷·F、西勒·J-S、哈普特·Y、德让·A。生物化学杂志。2000;275：13321–13329。[公共医学][谷歌学者] 43Jenster G、van der Korput H A、Trapman J、Brinkmann A O。生物化学杂志。1995年；270:7341–7346.[公共医学][谷歌学者] 44Palvimo J J、Reinikainen P、Ikonen T、Kallio P J、Moilanen A、Jänne O A。生物化学杂志。1996;271:24151–24156.[公共医学][谷歌学者] 
