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大黄疾病年鉴。2001年7月;60(7): 678–684.
数字对象标识:10.1136/度60.7.678
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PMID:11406522

NF-κB在类风湿关节炎滑膜组织中的重要性:原位表达和使用培养滑膜细胞的体外研究

摘要

目标-检测抑制NF-κB是否诱导肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素1β(IL1β)和抗Fas单克隆抗体(mAb)刺激的人滑膜细胞凋亡。
方法-测定滑膜组织中增殖细胞核抗原(PCNA)、NF-κB的表达以及滑膜细胞凋亡情况。Z-Leu-Leu-Lea-aled(LLL-CHO)抑制NF-κB核转位可诱导培养滑膜细胞凋亡。在LLL-CHO诱导的细胞凋亡中,还检测了滑膜细胞中caspase-3的激活以及XIAP和cIAP2的表达。
结果-类风湿关节炎(RA)滑膜组织中有丰富的PCNA+滑膜细胞,但RA滑膜组织也有少量凋亡的滑膜细胞。核NF-κB在RA滑膜细胞中表达。电泳迁移率变化分析表明,TNFα或IL1β处理细胞可显著刺激核NF-κB活性。用LLL-CHO处理细胞后,发现少量表达细胞内活性caspase-3的凋亡滑膜细胞。虽然单独用TNFα或IL1β治疗RA滑膜细胞并没有诱导凋亡,但与未刺激滑膜细胞相比,由LLL-CHO和caspase-3激活诱导的凋亡在TNFα和IL1β刺激的滑膜细胞中明显增强。此外,LLL-CHO明显增加了抗Fas单克隆抗体通过caspase-3激活诱导滑膜细胞凋亡。滑膜细胞中cIAP2和XIAP的表达可能不会直接影响滑膜细胞对LLL-CHO诱导的凋亡的敏感性。
结论-结果表明,NF-κB抑制可能通过纠正RA滑膜组织中滑膜细胞凋亡和增殖之间的失衡,成为RA潜在的重要治疗途径。

全文

本文全文可作为PDF格式(207K)。

选定的引用

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图和表

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类风湿关节炎(RA)和骨关节炎(OA)患者滑膜组织中增殖细胞核抗原(PCNA)(A,B)、末端脱氧(d)-UTP缺口末端标记(TUNEL)分析(C,d)和NF-κB(E,F)的表达。RA(A)和OA(B)滑膜组织中的(A,B)PCNA染色。注意,在RA滑膜组织的滑膜细胞中可以清楚地检测到PCNA的表达,但在OA滑膜组织中表达较弱。箭头表示具有代表性的PCNA+细胞。RA(C)和OA(D)滑膜组织的(C,D)TUNEL染色。RA滑膜组织中存在少量TUNEL染色阳性的滑膜细胞,但OA滑膜组织很少检测到这些细胞。RA(E)和OA(F)滑膜组织中(E,F)NF-κB的表达。注意RA患者滑膜细胞中核NF-κB的强表达。OA患者滑膜细胞核NF-κB表达不明确。结果显示10例RA和10例OA患者的代表性结果。请注意,使用对照免疫球蛋白(PCNA和NF-κB)或在缺乏生物素化16-dUTP(TUNEL)的情况下未观察到显著染色(数据未显示)。放大倍数×400。

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EMSA测定培养滑膜细胞中NF-κB核移位。(A) 注意,在未刺激的滑膜细胞中存在微弱的基础NF-κB核活性,在肿瘤坏死因子α(TNFα)或白细胞介素1β(IL1β)刺激的细胞中活性显著增加。对来自类风湿关节炎(RA)患者的滑膜细胞进行有或无TNFα(200 IU/ml)或IL1β(20 IU/ml)的培养。培养后用EMSA检测NF-κB核转位。A=未刺激滑膜细胞;B=用TNFα处理滑膜细胞1小时;C=用TNFα处理滑膜细胞3小时;D=用IL1β处理滑膜细胞1小时;E=用IL1β处理滑膜细胞三小时。(B) Z亮氨酸-亮氨酸-乙醛(LLL-CHO)抑制滑膜细胞NF-κB核转位。滑膜细胞最初用10µM LLL-CHO培养6小时,然后用TNFα或IL1β培养1小时。孵育后,用EMSA检测NF-κB核活性。注意,LLL-CHO几乎抑制了未刺激、TNFα刺激或IL1β刺激滑膜细胞的核NF-κB活性。A=未刺激滑膜细胞;B=用TNFα刺激的滑膜细胞;C=IL1β刺激的滑膜细胞;D=用LLL-CHO处理的未刺激滑膜细胞;E=在LLL-CHO存在下TNFα刺激滑膜细胞;F=IL1β在LLL-CHO存在下刺激滑膜细胞。结果显示为五个实验的代表性数据;其他四个实验也得到了类似的结果。

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Z-Leu-Leu-醛(LLL-CHO)诱导滑膜细胞凋亡和caspase-3活化。最初将来自类风湿关节炎(RA)患者的滑膜细胞与LLL-CHO(10µM)混合培养6小时,然后在有无肿瘤坏死因子α(TNFα;200 IU/ml)或白细胞介素1β(IL1β;20 IU/ml)的情况下再培养18小时。孵育后,如文中所述,检测凋亡细胞死亡(A)和caspase-3(B)的激活。值得注意的是,在未刺激、TNFα刺激或IL1β刺激的滑膜细胞中,凋亡和胱天蛋白酶-3激活均不明显。用LLL-CHO处理滑膜细胞可诱导细胞凋亡,细胞内caspase-3活性增加,TNFα或IL1β刺激的滑膜细胞内caspase-3活性升高。结果是六个实验的代表性数据;其他五个实验也得到了类似的结果。

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用Z-Leu-Leu-Lue-醛(LLL-CHO)处理滑膜细胞可增加Fas介导的滑膜细胞凋亡。最初将来自类风湿关节炎(RA)患者的滑膜细胞与LLL-CHO(10µM)混合培养6小时,然后在有无抗Fas单克隆抗体(mAb;1µg/ml)的情况下再培养18小时。孵育后,如文中所述,检测凋亡细胞死亡和caspase-3激活。LLL-CHO增强了抗Fas mAb诱导的细胞凋亡,并增加了胱天蛋白酶-3的活性。结果是六个实验的代表性数据;其他五个实验也得到了类似的结果。

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通过western blot分析测定滑膜细胞中cIAP2和XIAP的表达。来自类风湿关节炎(RA)患者的滑膜细胞最初在含有或不含Z-Leu-Leu-醛(LLL-CHO;10µM)的情况下培养6小时,然后在有或无肿瘤坏死因子α(TNFα;200 IU/ml)、白细胞介素1β(IL1β;20 IU/ml)或抗Fas单克隆抗体(1µg/ml)的条件下进一步培养再延长18小时。孵育后,如文中所述,通过western blot分析检测细胞中cIAP2和XIAP的表达。cIAP2和XIAP均在未刺激的滑膜细胞中表达,其表达受TNFα而非IL1β的下调。LLL-CHO治疗不会影响cIAP2和XIAP在非刺激性滑膜细胞或TNFα刺激性滑液细胞中的表达。LLL-CHO抑制IL1β刺激的滑膜细胞中cIAP2和XIAP的表达。用抗Fas单克隆抗体处理滑膜细胞可抑制cIAP2和XIAP的表达,LLL-CHO可显著抑制这两种表达。结果是六个实验的代表性数据;其他五个实验也得到了类似的结果。


文章来自风湿病学年鉴由提供英国医学杂志出版集团