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内脏。1999年7月;45(1): 134–142.
数字对象标识:10.1136个/口45.1134
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PMID:10369717

全部-反式和9-顺式视黄酸不同程度地改变大鼠肝星状细胞表型

摘要

背景-肝星状细胞在肝脏中发挥特殊功能:储存大量视黄酯,合成和分解肝细胞外基质,分泌多种细胞因子,控制窦的直径。
目的-检查所有因素的影响-反式维甲酸(ATRA)和9-顺式维甲酸(9RA)对活化肝星状细胞的细胞外基质生成和增殖的影响。
方法-使用胶原酶/蛋白酶分离细胞,在nycodenz中离心纯化,并培养两周。此时,细胞表现出激活的表型。细胞暴露于不同浓度的ATRA和9RA。通过免疫沉淀和北方杂交分析纤维连接蛋白和层粘连蛋白的前胶原I、III和IV的表达。
结果-ATRA对I型、III型和IV型前胶原、纤维连接蛋白和层粘连蛋白的合成有显著抑制作用,但不影响星状细胞增殖,而9RA对增殖有明显但较晚的影响。9RA使I型前胶原mRNA增加1.9倍,但不影响其他基质蛋白的表达。
结论-结果表明,ATRA和9RA对活化的星状细胞有不同的作用,通常是相反的。这些观察结果可以解释之前对培养的星状细胞或受到纤维生成刺激的动物施用维甲酸后获得的不同结果。


关键词:肝星状细胞;维甲酸;细胞外基质蛋白;增殖

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选定的引用

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图和表

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培养中星状细胞的免疫细胞化学。通过对结蛋白(A)、αSMA(B)和GFAP(C)的免疫细胞化学分析,确定培养细胞的星状细胞来源。插入的(A)显示了使用非免疫IgG检测结蛋白的阴性对照,使用苏木精进行复染以显示细胞核。培养的星状细胞仍然含有小的脂滴,当细胞暴露在320 nm的激发光下时会出现。在这些条件下,自荧光变得明显(D)。原始放大倍数×110

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来自培养基和细胞裂解物的结缔组织蛋白的代表性免疫沉淀。培养的星状细胞暴露于ATRA或9RA 48小时,并在过去24小时内用反式35S标签(50µCi/ml)。箭头显示205 kDa分子量标记(肌球蛋白)的位置。前胶原α1(I)、α1(III)和α1(IV)以及纤维连接蛋白(FN)和层粘连蛋白可以特异性免疫沉淀。

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荧光成像定量评估免疫沉淀带。计算1µM ATRA(A)和9RA(B)的处理样品与对照样品的比率。数据表示为平均值(SD)。ATRA的观察次数为4次,9RA为3次。服用ATRA或9RA对转标签(C)的细胞池没有显著影响*p<0.05。

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北方杂交实验的代表性放射自显影图。将培养的星状细胞暴露于1µM ATRA或9RA中48小时。用前胶原α1(I)、α1(IIII)和α1(IV)、纤维连接蛋白、层粘连蛋白B1和18S核糖体RNA探针进行杂交,62所有杂交都提供了特定的信号。

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结缔组织蛋白转录物的北方杂交分析。将18S核糖体RNA的信号正常化后,计算治疗组与对照组的比率,并表示为平均值(SD)。

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培养48至120小时后,1µM 9RA对星状细胞掺入BrdU的影响;具有代表性的时程实验。治疗72小时后,发现细胞增殖显著减少。数值表示为平均值(SD)。在所有情况下,观察次数为四次。

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不同浓度的ATRA或9RA对BrdU掺入的影响。用1、0.1和0.01µM ATRA或9RA处理培养的星状细胞72小时。在ATRA或9RA存在的情况下,用10µM BrdU溶液标记细胞过去24小时。数值表示为平均值(SD)。在所有情况下,观察次数为四次*p<0.025。


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