临床投资杂志。2002年3月1日；109（5）：595-601。
肌抑制素缺乏小鼠体内脂肪蓄积的抑制
美国马里兰州巴尔的摩约翰霍普金斯大学医学院分子生物学和遗传学系
通信地址：Se-Jin Lee，Johns Hopkins大学医学院分子生物学和遗传学系，725 N.Wolfe Street，Baltimore，Maryland 21205，USA电话：（410）614-0198；传真：（410）955-0831；电子邮件：ude.imhj@eeljs. 收稿日期：2001年6月19日；2002年1月30日接受。
摘要
肌生长抑制素是TGF-β家族成员，对肌肉生长起负调节作用。缺乏肌肉生长抑制素基因的小鼠(Mstn公司)骨骼肌质量普遍增加，是由肌纤维肥大和增生共同引起的。在这里，我们表明，与野生型同窝小鼠相比，即使在正常食物摄入量（相对于体重）、正常体温和静息代谢率略有下降的情况下，随着年龄的增长，Mstn-null小鼠的脂肪积累也显著减少。为了研究肌肉生长抑制素是否可能是在脂肪异常堆积的情况下抑制肥胖发展的有效靶点，我们分析了肌肉生长抑素的作用Mstn公司两种肥胖基因模型agouti致死黄的突变(A类年)和肥胖(勒普对象/对象). 在每种情况下Mstn公司导致脂肪堆积和糖代谢异常的部分抑制。我们的研究结果增加了以下可能性：阻断肌肉生长抑制素功能的药物不仅可以促进肌肉生长，还可以减缓或预防肥胖和2型糖尿病的发展。
介绍
TGF-β超家族是一个分泌生长和分化因子的大家族，在调节组织发育和体内平衡中发挥重要作用(1). 一些家族成员的信号通路突变会导致癌症、遗传性出血性毛细血管扩张症和原发性肺动脉高压等疾病，这表明家族成员对人类健康的重要性(2). 在寻找新的TGF-β相关因子的过程中，我们发现了一个家族成员，肌肉抑制素(Mstn），在脊椎动物骨骼肌中特异表达(三).Mstn公司在胚胎发生过程中，从发育体节的肌节室开始，在骨骼肌谱系的细胞中表达。在成人组织中，Mstn公司主要在骨骼肌中表达，在脂肪组织中表达水平明显较低。小鼠携带靶向性破坏Mstn公司基因使全身骨骼肌质量急剧增加，单个肌肉的重量大约是野生型肌肉的两倍。肌肉质量的增加是由于肌肉纤维肥大和增生的综合作用所致。
肌肉生长抑制素序列在进化过程中高度保守(4); 事实上，分子活性部分中预测的肌肉生长抑制素蛋白序列在已检测的大多数哺乳动物和鸟类中是相同的。在这个区域，人类肌肉生长抑制素与小鼠肌肉生长抑素的氨基酸序列相同(4). 肌肉生长抑制素的功能似乎也是保守的，因为Mstn公司牛的双肌肉表型与基因有关(4——7). 这增加了肌抑制素可能成为增加肌肉铸型疾病患者骨骼肌质量的潜在治疗靶点的可能性，例如癌症和艾滋病引起的恶病质以及肌肉营养不良。
适当的骨骼肌功能对维持正常的葡萄糖代谢也很重要(8——10). 骨骼肌对胰岛素刺激葡萄糖摄取的抵抗是已知的非胰岛素依赖型（2型）糖尿病的最早表现(11——13). 在这篇论文中，我们发现肌肉生长抑制素的丢失可以阻止与年龄相关的脂肪组织质量增加，并部分减弱肥胖和糖尿病小鼠模型的肥胖和糖尿病表型，即阿古提致死黄(A类年)和肥胖(勒普对象/对象). 这些结果表明，抑制肌抑制素信号可能有助于预防或治疗肥胖和糖尿病。
方法
动物。
这个Mstn公司所用的野生型和空白小鼠是从129/SvJ创建者的后代中获得的，这些后代被四到五次回交到C57BL/6J菌株中。A类年和勒普对象/+C57BL/6J背景的小鼠购自美国缅因州巴尔港的杰克逊实验室。
肌肉重量。
解剖身体一侧的单个肌肉（胸肌、三头肌、股四头肌、腓肠肌/跖骨和胫骨前肌）并称重。
脂肪分析。
按照Johnson和Hirsch的方法解剖脂肪垫(14). 细胞数量通过荧光测定法测定，使用6个月大的小鼠性腺脂肪垫的左侧或右侧。另一个用福尔马林固定，石蜡包埋，10μm切片，苏木精和伊红染色。8个月大雄性大鼠放血后全身脂肪总量的测定如前所述(15).
血清测量。
使用Accu-Check葡萄糖监测仪（美国印第安纳州印第安纳波利斯市罗氏诊断公司），使用两台（两台）的尾血，测定早晨的血糖水平。对于葡萄糖耐量试验，6个月大的雄性动物禁食过夜。在腹腔注射1克葡萄糖/千克体重后2至4小时测量血糖。8个月大男性的血清瘦素由RIA（美国密苏里州圣查尔斯市Linco Research Inc.）测定。Antech Diagnostics（美国纽约州纽约市）对6至7个月大的男性进行了抽血后采集的血样中的所有其他血清值进行了分析。数值表示为平均值±SE。
食物摄入。
5.5个月大的雄性小鼠被单独饲养并随意喂食。连续10天每天称量食物。
体温。
分别饲养5.5个月大的雄性小鼠，用直肠温度计在1.5厘米深处测量其体温（美国俄亥俄州黄泉市YSI公司）。为了进行耐寒性试验，将小鼠置于5°C的预冷笼中，60分钟后测量体温。
北方分析。
按照说明进行Northern分析(16)使用来自从4个月大的C57BL/6J雄性小鼠分离的组织的总RNA。
间接量热法。
O的测量2消耗（vO2)使用单室Oxymax系统（Columbus Instruments International Corporation，Columbus，Ohio，USA）从3个月大的雄性动物身上采集2流速为0.75 l/min。每隔7分钟测量一分钟。总vO2对应于让动物安静140分钟后进行的30次测量。休息vO2通过对相同间隔内最低五个读数进行平均计算得出。
结果
减少Mstn的脂肪积累–/–老鼠。
我们之前报道过Mstn公司基因敲除小鼠骨骼肌质量普遍增加，导致3-6个月大时体重增加25-30%(三). 比较Mstn公司+/+和Mstn公司–/–然而，年龄较大的雄性小鼠发现Mstn公司+/+老鼠，Mstn公司–/–超过6个月大的小鼠体重没有继续增加，因此到9到10个月大时Mstn公司+/+小鼠与Mstn公司–/–小鼠（数据未显示）。为了确定两种基因型之间体重的正常化是否是肌肉重量正常化的结果，我们比较了Mstn公司+/+和Mstn公司–/–不同年龄的C57BL/6J背景小鼠。如图所示a对于三头肌（胸肌、股四头肌、腓肠肌/跖肌和胫骨前肌也获得了类似的结果），即使在最小年龄段（2个月），肌肉重量也存在明显差异，并且在老年动物中保持这种差异。此外，在所有年龄段的受试小鼠中Mstn公司突变后的肌肉重量介于Mstn公司+/+和Mstn公司–/–这表明肌肉抑制素对肌肉质量的影响是剂量依赖性的。
Mstn公司缺失抑制脂肪堆积。(一)三头肌质量增加Mstn公司–/–不同年龄的小鼠(n个= 4–13). 黑色，Mstn公司+/+; 蓝色，Mstn公司+/–; 粉红色，Mstn公司–/–数据表示为平均值±SEM(b条——（f）)男性附睾质量(b条)，腹膜后(c（c）)和腹股沟(d日)和女性子宫旁(e（电子）)和腹膜后(（f）)不同年龄段的脂肪垫(n个=4–13）。橙色条表示平均值，符号表示单个动物的颜色，如一男性佩戴钻石，女性佩戴圆圈。#P（P）= 0.05, *P（P）< 0.05, **P（P）< 0.01, ***P（P）<0.001，学生t吨测试。(克)单个8月龄雄性小鼠的瘦素血清浓度与全身脂肪质量之比。(小时)附睾脂肪垫中的脂肪细胞组织学。比例尺=50μm。
尽管骨骼肌重量的差异在动物的整个生命周期中都保持不变，但体重仍然正常，因此我们研究了老年人体重增加的可能性Mstn公司+/+小鼠的脂肪积累率较高。如图所示，b–f，对单个脂肪垫重量的分析显示Mstn公司+/+和Mstn公司–/–2个月大的小鼠。然而，在5-6个月时，男性的脂肪垫有显著差异，个体脂肪垫为Mstn公司+/+小鼠的平均体重是Mstn公司–/–老鼠。9-10个月时，男性和女性的脂肪垫重量Mstn公司+/+小鼠的分布范围很广，一些动物的脂肪垫重量比2个月大时增加了9倍。相反，每个Mstn公司–/–在9至10个月时接受检查的小鼠保持瘦，在7至8个月的时间间隔内，脂肪垫的增重相对较少。为了排除脂肪储存被重新分配的可能性Mstn公司–/–小鼠，我们测量了全身脂肪。如图所示g、 年平均体脂肪总量减少了70%Mstn公司–/–小鼠与Mstn公司+/+老鼠。血清瘦素水平与个体动物体内总脂肪量相关，因此在Mstn公司–/–小鼠（13.0±1.6 ng/ml，Mstn公司+/+; 2.6±0.2纳克/毫升，Mstn公司–/–;P（P）<0.001）（图g） ●●●●。因此，随着时间的推移，总体重增加的差异似乎是由脂肪积累的差异造成的。
为了确定脂肪垫重量的差异是否反映了脂肪细胞数量或细胞大小的差异，我们对性腺脂肪垫进行了更详细的分析。Mstn公司–/–小鼠的性腺脂肪垫细胞比Mstn公司+/+老鼠（表). 然而，细胞大小也受到影响，生殖器脂肪垫中细胞的平均重量为Mstn公司–/–小鼠约为Mstn公司+/+小鼠（表; 图h） ●●●●。除了较低的脂肪垫重量外，成年男性Mstn公司–/–小鼠的血清甘油三酯和胆固醇水平也显著低于Mstn公司+/+老鼠（表). 然而，血糖控制似乎没有受到影响，因为Mstn公司+/+和Mstn公司–/–小鼠的胰岛素、血糖和空腹血糖水平相似（表). 他们在葡萄糖耐量试验中也表现出类似的反应，每种试验在15分钟后达到约220 mg/dl的最大血糖值，并在给糖2小时后恢复到基线（数据未显示）。
表1
的影响Mstn公司脂肪细胞突变和血清甘油三酯、胆固醇、葡萄糖和胰岛素水平
Mstn公司–/–尽管小鼠的食物消耗率没有下降，但它们没有积累脂肪。550万月龄的食物消费Mstn公司–/–实际上，老鼠比年龄匹配的老鼠多16%Mstn公司+/+虽然，当以体重百分比表示时，小鼠的食物消耗量在Mstn公司–/–和Mstn公司+/+老鼠（表). 的体温Mstn公司–/–和Mstn公司+/+在正常条件下或对60分钟耐冷试验的反应中，小鼠也相似，尽管棕色脂肪重量在Mstn公司–/–老鼠（表). 我们还检测了编码解偶联蛋白的mRNA的表达水平，Ucp1单位,Ucp2型、和Ucp3单位UCP蛋白是线粒体内膜蛋白，可将质子梯度从ATP合成中解偶联，并与产热有关(17). 如图所示，这些mRNA的表达水平在Mstn公司–/–小鼠与Mstn公司+/+老鼠。的表达式级别Ucp2型和Ucp3单位骨骼肌中的Mstn公司–/–老鼠。最后，我们研究了敲除小鼠代谢率增加可能导致脂肪垫重量减少的可能性。如表所示，在代谢室中对6个月大的动物进行的分析表明Mstn公司–/–小鼠的总O和静息O比率较高2消耗量与Mstn公司+/+小鼠（分别高出14%和8%），这是因为Mstn公司–/–老鼠。然而，如果数据表示为体重的函数，Mstn公司–/–小鼠的总氧和静息氧的比率实际上更低2与相比的消耗Mstn公司+/+小鼠（分别降低10%和15%）（表). 呼吸交换比，CO的比率2生成为O2消耗，英寸Mstn公司–/–小鼠与Mstn公司+/+小鼠（数据未显示）。
解偶联蛋白的表达。从不同组织中分离出的15微克总RNAMstn公司+/+和Mstn公司–/–对小鼠进行电泳、印迹，并用Ucp1单位,Ucp2型、和Ucp3单位每个印迹也与S26型核糖体蛋白探针作为负荷控制。
表2
食物摄入量、棕色脂肪组织、体温和代谢率Mstn公司+/+和Mstn公司–/–雄性小鼠
A组肥胖和糖代谢的抑制年，Mstn女士–/–老鼠。
脂肪积累不足Mstn公司–/–小鼠提出了抑制肌肉生长抑制素可能是抑制脂肪异常堆积环境下肥胖发展的有效方法的可能性。因此，我们分析了Mstn公司肥胖小鼠遗传模型的突变。A类年是一种显性突变，通过增加食物摄入量和燃油效率导致肥胖(18,19). 这个A类年突变导致agouti蛋白异常表达，该蛋白拮抗下丘脑中的黑素皮质激素受体(18,19). 如中所示账户动物，个体肌肉重量A类年/一个,Mstn公司–/–老鼠的身高大约是A类年/一个,Mstn公司+/+小鼠（数据未显示）。尽管肌肉质量增加A类年/一个,Mstn公司–/–7个月大的小鼠要么与（雄性）年龄相仿，要么实际上低于（雌性）年龄相配的小鼠A类年/一个,Mstn公司+/+小鼠（数据未显示）。如图所示a、 成年女性的外貌A类年/一个,Mstn公司–/–小鼠与不适用,Mstn公司–/–老鼠比A类年/一个,Mstn公司+/+老鼠。体重减轻A类年/一个,Mstn公司–/–小鼠脂肪积累减少。虽然个人脂肪垫重量在A类年/一个,Mstn公司–/–老鼠比在账户,Mstn公司–/–老鼠，脂肪垫重量不到A类年/一个,Mstn公司–/–老鼠比在A类年/一个,Mstn公司+/+鼠标（图、b和c）。因此Mstn公司基因突变部分抑制了肥胖症的发展A类年/一个老鼠。
Mstn公司缺失部分抑制脂肪堆积和葡萄糖不耐受A类年老鼠。(一)的影响Mstn公司出现时删除账户和A类年/一个雌性小鼠。(b条和c（c）)的影响Mstn公司7个月龄婴儿脂肪垫重量的缺失A类年男性(b条) (n个=6–9）和女性(c（c）) (n个=8–20）只小鼠。橙色条表示平均值，符号表示单个动物。黑色，A类年/一个,Mstn公司+/+; 粉红色，A类年/一个,Mstn公司–/–钻石，男性；圆形，女性。(d日和e（电子）)男性糖耐量试验异常的抑制(d日) (n个=4）和女性(e（电子）) (n个=5–13）Mstn–/–老鼠。符号如所示b条和c（c）一些测量值超过了葡萄糖测试的检测上限（600mg/dl）。*P（P）< 0.05, ***P（P）<0.001，学生t吨测试。
肌肉抑制素的丢失也影响A类年/一个老鼠。A类年/一个小鼠已被证明存在胰岛素抵抗，因此被用作2型糖尿病的模型(18,19). 如前所述(18,20,21)，男A类年/一个,Mstn公司+/+小鼠喂食葡萄糖和胰岛素水平升高（表)与正常小鼠相比（表)在葡萄糖耐量试验中，血糖水平严重异常（图d） ●●●●。相反，几乎所有A类年/一个雄性小鼠Mstn公司–/–喂食时血糖和胰岛素水平正常（表)在外源性葡萄糖负荷后，血糖水平显著低于A类年/一个,Mstn公司+/+鼠标（图d） ●●●●。在雌性小鼠中也观察到类似的效果（表; 图e） 尽管已知女性的糖代谢异常不太严重A类年/一个小鼠比雄性A类年/一个老鼠(20). 虽然Mstn公司突变并没有完全消除A类年/一个葡萄糖代谢突变（糖耐量试验A类年/一个,Mstn公司–/–相对于不适用,Mstn公司+/+和账户,Mstn公司–/–小鼠），这些结果表明Mstn公司突变可能对2型糖尿病的发展产生有益影响A类年/一个老鼠。
表3
影响Mstn公司7月龄儿童血糖和血清胰岛素水平的突变A类年动物
Lep患者肥胖和糖代谢的抑制对象/对象，Mstn女士–/–老鼠。
我们还研究了Mstn公司中的突变勒普对象/对象老鼠。瘦素信号缺失勒普对象/对象由于食物摄入和能量消耗调节不当，小鼠会导致严重肥胖(22,23). 尽管已知瘦素的一些作用是通过黑素皮质素受体途径介导的，但已知瘦素也具有不依赖于黑素皮质素的作用(24——26). 肌肉生长抑制素丢失导致的肌肉质量增加延迟勒普对象/对象小鼠与勒普+/+老鼠。单个肌肉在勒普对象/对象,Mstn公司–/–老鼠比在勒普对象/对象,Mstn公司+/+8周龄的小鼠，尽管在3个月龄时体重增加了100%（数据未显示）。然而，正如A类年/一个老鼠Mstn公司突变还抑制了勒普对象/对象小鼠，这是明显的个人脂肪垫重量检查。8周龄时，勒普对象/对象,Mstn公司–/–与对照组相比，小鼠的腹膜后脂肪垫和子宫旁脂肪垫重量显著减少，具有统计学意义勒普对象/对象,Mstn公司+/+鼠标（图、a和b）。这个勒普对象/对象众所周知，突变也会导致葡萄糖代谢异常，这在年轻小鼠中最为突出(22). 这个Mstn公司缺失延缓了高血糖的发生勒普对象/对象两性小鼠（图、c和d）。女性勒普对象/对象老鼠Mstn公司突变在6周龄和8周龄时完全抑制了动物的高血糖发展，而在雄性小鼠中，这种作用在最小年龄（6周龄）时最为显著。
Mstn公司缺失部分抑制脂肪堆积并延缓高血糖勒普对象/对象老鼠。(一和b条)男性脂肪垫重量减少(一) (n个=5-8）和女性(b条) (n个= 5–6)Lep公司对象/对象,Mstn公司–/–8周龄小鼠。橙色条表示平均值，符号表示单个动物。黑色，勒普对象/对象,Mstn公司+/+; 粉红色，勒普对象/对象,Mstn公司–/–钻石，男性；圆形，女性。(c（c）和d日)抑制勒普对象/对象,Mstn公司–/–男性(c（c）) (n个=6–22）和女性(d日) (n个=8–26）只小鼠。符号如所示一和b条.*P（P）< 0.05, **P（P）< 0.01, ***P（P）<0.001，学生t吨测试。
讨论
肌生长抑制素是TGF-β家族成员，对肌肉生长起负调节作用。我们之前的研究表明，缺乏肌抑制素的小鼠骨骼肌生长显著且广泛增加(三). 这里我们已经显示了删除Mstn公司除骨骼肌质量外，还影响脂肪组织质量。具体而言，肌抑制素缺乏小鼠的脂肪积累随着年龄的增长而显著减少，尽管它们的食物摄入量正常，体温正常，代谢率略有降低。
还需要进行其他实验来阐明肌肉抑制素调节脂肪代谢的确切机制。一种可能性是肌肉生长抑制素直接作用于脂肪组织。最近的一份报告支持了肌抑制素作用的直接机制，即肌抑制酶可以抑制体外脂肪细胞的分化(27). 如果肌肉生长抑制素直接作用于体内脂肪细胞，则肌肉生长抑制素可能全身或局部作用。已知肌肉生长抑制素mRNA在脂肪中表达，尽管脂肪组织中的表达水平明显低于骨骼肌(三).
第二种可能性是，脂肪组织中的肌生成抑制素突变效应是骨骼肌中肌生成抑素信号缺失的间接效应。例如，有可能Mstn公司骨骼肌组织本身的突变可能会转移能量代谢物，从而防止脂肪在身体其他部位积聚。另一种可能性是肌肉中肌抑制素信号的缺乏会影响假想的第二信使的活动(28)由作用于脂肪组织的肌肉释放。此外，我们不能排除肌肉抑制素直接或间接作用于其他组织（如中枢神经系统），从而调节脂肪组织的可能性。
为了支持一种间接机制，在其他肌肉质量增加的转基因小鼠中，也报道了对脂肪积累的类似影响。例如，转基因小鼠过度表达IGF-1(29)或者滑雪(30)骨骼肌中几乎没有脂肪，尽管没有定量分析的报告。据报道，由于肌肉特异性胰岛素受体基因敲除，肌肉质量下降的小鼠出现了相反的效果，即脂肪积累增加(31).
要阐明肌肉生长抑制素调节体内脂肪代谢的机制，最终需要对基因操纵的动物进行分析，在这些动物中，肌肉生长抑素信号通路的成分在骨骼肌或脂肪组织中被特异性阻断。在这方面，我们已经证明，在体外，肌肉生长抑制素可以与激活素II型受体Act RIIA和Act RIIB结合，并且在骨骼肌中表达显性负型Act RIIB的转基因小鼠的骨骼肌质量显著增加，与在肌肉生长抑素基因敲除小鼠中看到的相比(32). 对脂肪垫的初步分析表明，这些转基因小鼠也减少了脂肪积累，这与肌肉生长抑制素对脂肪组织的间接作用是一致的（我们的初步结果）。然而，尽管使用骨骼肌特异性肌球蛋白轻链启动子/增强子来驱动突变受体的表达，但脂肪组织中也检测到转基因的表达，这使得对这些数据的解释变得复杂（我们的初步结果）。尽管与骨骼肌中的水平相比，转基因在脂肪组织中的表达水平极低，但这种低水平的表达可能足以阻断脂肪中的肌肉抑制素信号传导。
无论肌生长抑制素调节脂肪代谢的机制如何，我们已经证明，肌生长抑素活性的丧失可以对肥胖和2型糖尿病的两种遗传模型产生有益的代谢效应。具体地说，我们已经证明，肌抑制素突变可以部分抑制脂肪堆积和高血糖的发生A类年和勒普对象/对象老鼠。虽然肌抑制素在人类中的作用尚未阐明，但我们的研究结果增加了肌抑制蛋白抑制剂可能是预防或治疗代谢紊乱（如肥胖和2型糖尿病）的有用药物的可能性。
致谢
这项工作得到了NIH拨款R01HD35887和美国家用产品公司（S.J.Lee）的拨款支持。我们感谢Paul Dunlap对代谢率测定的帮助，感谢Dan Lane、Monica Kumar、Randall Reed和Mosi Beckett对Ucp3和S26探针的帮助。肌肉生长抑制素由约翰·霍普金斯大学授权给MetaMorphix Inc.（MMI），并转授权给美国家用产品公司。作者有权获得大学从该因子销售中获得的销售特许权使用费份额。作者和该大学拥有MMI股票，该股票受大学政策的某些限制。S.-J.Lee是MMI的顾问。这些安排的条款由大学根据其利益冲突政策进行管理。
工具书类
1A.C.McPherron和S.J.Lee，1996年。转化生长因子β超家族。在健康和疾病中的生长因子和细胞因子。第1B卷。D.LeRoith和C.Bondy，编辑。JAI Press Inc.美国康涅狄格州格林威治357–393。
2Massague J、Blain SW、Lo RS.生长控制、癌症和遗传性疾病中的TGFβ信号转导。单元格。2000;103:295–309.[公共医学][谷歌学者] 3McPherron AC、Lawler AM、Lee S-J。TGF-β超家族新成员对小鼠骨骼肌质量的调节。自然。1997;387:83–90.[公共医学][谷歌学者] 4McPherron AC，Lee S-J。肌肉生长抑制素基因突变导致的牛双肌肉萎缩。美国国家科学院程序。1997;94:12457–12461. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 5Kambadur R、Sharma M、Smith TPL、Bass JJ。双肌肉比利时蓝牛和皮埃蒙特牛的肌肉生长抑制素（GDF8）突变。基因组研究。1997;7:910–915.[公共医学][谷歌学者] 6Grobet L等人。牛肌肉生长抑制素基因的缺失导致牛出现双肌表型。自然遗传学。1997;17:71–74.[公共医学][谷歌学者] 7Grobet L等。一系列破坏肌肉生长抑制素功能并导致牛双肌肉的等位基因突变的分子定义。哺乳动物基因组。1998年；9:210–213.[公共医学][谷歌学者] 8Kadowaki T.通过敲除小鼠模型了解胰岛素抵抗和2型糖尿病。临床投资杂志。2000;106:459–465. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 9Mueckler M.胰岛素抵抗和骨骼肌谷氨酸转运的中断。临床投资杂志。2001;107:1211–1213. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 10Reaven G.人类疾病中胰岛素抵抗的病理生理学。生理学评论。1995;75:473–486.[公共医学][谷歌学者] 11Martin BC等。葡萄糖和胰岛素抵抗在2型糖尿病发展中的作用：一项25年随访研究的结果。柳叶刀。1992;340:925–929.[公共医学][谷歌学者] 12Lillioja S等。胰岛素抵抗和胰岛素分泌功能障碍是非胰岛素依赖型糖尿病的前兆。N英格兰医学杂志。1993;329:1988–1992.[公共医学][谷歌学者] 13Kahn CR。胰岛素作用、糖尿病基因和II型糖尿病的病因。糖尿病。1994;43:1066–1084.[公共医学][谷歌学者] 14Johnson PR，Hirsch J.六种遗传性肥胖小鼠脂肪库的细胞性。脂质研究杂志。1972;13:2–11.[公共医学][谷歌学者] 15Leshner AI、Littwin VA、Squibb RL。一种简单的胴体分析方法。生理行为。1972;9:281–282.[公共医学][谷歌学者] 16McPherron AC、Lee S-J.GDF-3和GDF-9：含有新型半胱氨酸的转化生长因子-β超家族的两个新成员。生物化学杂志。1993;268:3444–3449.[公共医学][谷歌学者] 17Lowell BB，Spiegelman BM.适应产热的分子理解。自然。2000;404:652–660.[公共医学][谷歌学者] 18Moustad Moussa N，Claycombe KJ。黄鼠肥胖综合征和促食欲诱导肥胖的机制。Obes研究。1999;7:506–514.[公共医学][谷歌学者] 19Dinulescu DM、Cone RD.Agouti和促尿激素相关蛋白：类似物和对比。生物化学杂志。2000;275:6695–6698.[公共医学][谷歌学者] 20Carpenter KJ，Mayer J.小鼠黄色肥胖的生理学观察。美国生理学杂志。1958;193:499–504.[公共医学][谷歌学者] 21Masuzaki J等人。瘦素过表达致死转基因小鼠的葡萄糖代谢和胰岛素敏感性黄色的阿古提突变。糖尿病。1999;48:1615–1622.[公共医学][谷歌学者] 22科尔曼DL。肥胖和糖尿病：导致小鼠糖尿病-肥胖综合征的两个突变基因。糖尿病。1978;14:141–148.[公共医学][谷歌学者] 23Schwartz MW等。中枢神经系统对食物摄入的控制。自然。2000;404:661–671.[公共医学][谷歌学者] 24Boston BA、Blaydon KM、Varnerin J、Cone RD。中枢POMC和瘦素途径对小鼠肥胖的独立和加性效应。科学。1997;278：1641年至1644年。[公共医学][谷歌学者] 25Friedman JM，Halaas JL。瘦素与哺乳动物体重的调节。自然。1998年；395：763–770。[公共医学][谷歌学者] 26Marsh DJ等。黑素皮质素-4受体缺陷小鼠对食欲肽和食欲肽的反应。自然遗传学。1999;21:119–122.[公共医学][谷歌学者] 27Kim HS等。在3T3-L1培养物中通过肌肉抑制素治疗抑制前脂肪细胞分化。生物化学与生物物理研究委员会。2001;281:902–906.[公共医学][谷歌学者] 28Mauvais-Jarvis F等人。一种探讨肌肉胰岛素抵抗和β细胞功能障碍在2型糖尿病发展中相互作用的模型。糖尿病。2000;49:2126–2134.[公共医学][谷歌学者] 29MusaróA等。局部Igf-1转基因表达维持衰老骨骼肌的肥大和再生。自然遗传学。2001;27:195–200.[公共医学][谷歌学者] 30Sutrave P、Kelly AM、Hughes SH。滑雪可引起转基因小鼠骨骼肌的选择性生长。基因发育。1990;4:1462–1472.[公共医学][谷歌学者] 31Brüning JC等。肌肉特异性胰岛素受体敲除显示NIDDM代谢综合征的特征，但不改变糖耐量。分子细胞。1998年；2：559–569。[公共医学][谷歌学者] 32Lee S-J，McPherron AC。肌肉生长抑制素活性和肌肉生长的调节。美国国家科学院程序。2001;98:9306–9311. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 
