选择性表达VEGF亚型的小鼠视网膜中的小动脉和小静脉模式

VEGF-异型小鼠的遗传和生存能力。

血管内皮生长因子^+/120,血管内皮生长因子^+/164、和血管内皮生长因子^+/188小鼠正常、健康，寿命正常。的后代血管内皮生长因子^+/120繁殖对以正常的孟德尔频率出生，但有一半血管内皮生长因子^120/120新生儿出生后不久死于心脏呼吸窘迫(6). 其他的血管内皮生长因子^{120个/120个}小鼠出生后2周内死亡，部分原因是心肌血管生成受损导致心力衰竭(6).

血管内皮生长因子^164/164老鼠出生的频率是正常的孟德尔频率。366名出生于血管内皮生长因子^+/164繁殖对，25%血管内皮生长因子^+/+，51%是血管内皮生长因子^+/164，24%是血管内皮生长因子^164/164.体重正常增加（32±6 g in血管内皮生长因子^+/+老鼠，n个=8，与32±4克英寸血管内皮生长因子^164/164老鼠，n个=23，第7周；P（P）=NS），可育（4个月内每个繁殖对的产仔数：4.8±1.3血管内皮生长因子^+/+老鼠，n个=4，而VEGF为4.8±0.5^164/164老鼠，n个= 4;P（P）=NS），产下正常大小的幼崽（11±3只幼崽血管内皮生长因子^+/+垃圾，n个=35，与10±3相比血管内皮生长因子^164/164垃圾，n个= 58;P（P）=NS）。

血管内皮生长因子^188/188小鼠出生时代表性不足；在73只活产幼崽中，24%是血管内皮生长因子^+/+，64%是血管内皮生长因子^+/188，只有12%是血管内皮生长因子^188/188，表示血管内皮生长因子^188/188年小鼠在宫内死亡(P（P）<0.05（观察值与预期值）。存活的VEGF^188/188年小鼠体重增加少于血管内皮生长因子^+/+7周龄小鼠（32±6 g in血管内皮生长因子^+/+老鼠，n个=8，与22±3克英寸血管内皮生长因子^188/188老鼠，n个= 16;P（P）< 0.05).血管内皮生长因子^188/188繁殖对的可育性较差（4个月内每个繁殖对的窝数：4.8±0.5血管内皮生长因子^+/+老鼠，n个=4，与3.7±0.6相比血管内皮生长因子^188/188老鼠，n个= 3;P（P）<0.05），产仔数较小（11±3只幼崽血管内皮生长因子^+/+垃圾，n个=35，而7±2只幼崽血管内皮生长因子^188/188垃圾，n个= 53;P（P）< 0.05).

野生型小鼠视网膜血管的发育。

通过对CD31/PECAM或内皮细胞凝集素（EC）、血管平滑肌细胞（vSMCs）和周细胞（PC）的平滑肌α肌动蛋白（SMA）以及星形胶质细胞（AC）的胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的全山制剂进行免疫染色来监测视网膜血管化。为了研究内皮周细胞（PEC）的募集，将VEGF-isoform小鼠与在PEC中表达LacZ的小鼠杂交^LacZ公司老鼠）(9). 通过ephrin-B2原位杂交和将VEGF亚型小鼠与携带血管内皮生长因子的小鼠交叉，检测内皮细胞的动脉规格LacZ公司内源性控制基因肾上腺素-B2启动子（EB2^LacZ公司老鼠）(7).

出生前，小鼠视网膜是无血管的，从玻璃样血管和脉络膜血管接受氧气。出生后，视网膜厚度和新陈代谢的增加会导致生理性缺氧，从而上调VEGF的表达并引发视盘血管的生长(10). 这导致在出生后第2天（P2）形成均匀的毛细血管样血管迷路，该迷路覆盖了约40%的视网膜（未显示）。PEC分析^LacZ公司小鼠发现这些原始血管已经被PEC覆盖，但PEC不表达SMA（未显示）。使用全支架原位杂交，在50%的视网膜血管（例如，在未来的小动脉中）中以交替模式（未显示）可检测到肾配蛋白B2，这表明在血管发育的早期阶段已经发生了动静脉畸形。

到P5时，血管床覆盖了大约70%的视网膜，并重新形成了一个更成熟的分支血管网络，从形态学上可以区分为小动脉、小静脉和毛细血管（图​（图2a）。2a） ●●●●。小动脉柄管腔较小，周围有无毛细血管区（毛细血管修剪的结果），而小静脉较宽，嵌于毛细血管丰富的区域。Ephrin-B2在视网膜小动脉中表达，但在小静脉中不表达（图​（图2，2、b和c）。PEC分析^LacZ公司小鼠发现PEC已沿所有血管扩散（图​（图2d），2d） 而SMA的表达在较大的小动脉中可检测到，但在小静脉或毛细血管中未检测到（图​（图2e）。2e） ●●●●。透射电子显微镜（EM）证实沿视网膜毛细血管存在PC，在固定过程中收缩（图​（图22f） ●●●●。

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图2

视网膜血管发育血管内皮生长因子^+/+和血管内皮生长因子^164/164老鼠。(一)PECAM染色血管内皮生长因子^+/+第5页。毛细血管达到视网膜半径的三分之二到四分之三。小动脉柄（A）很薄，有一个无毛细血管区。静脉（V）较宽，缺乏无毛细血管区。La，小动脉长度；Lv，脉管长度；Lr，视网膜半径；Lva，血管床半径。(b条和c（c）)ephrin-B2（EB2）的原位杂交(b条)使用或(c（c）)无IV型胶原荧光免疫染色血管内皮生长因子^+/+视网膜处于P5（EB2/CollIV）。EB2的表达仅限于形态学上定义的小动脉（见上文），并延伸至动脉毛细血管（箭头所示）。(d日和e（电子）)用LacZ（在PEC中，蓝色圆点）、凝集素（在EC中，红色）和抗SMA（在vSMC中，绿色）在血管内皮生长因子^+/+×PEC^LacZ公司P5视网膜（LacZ/Lec/SMA）。(d日)PEC已沿所有视网膜血管扩散，而(e（电子）)只有小动脉SMA阳性。(（f）)的EM血管内皮生长因子^+/+P5处的毛细管，其看起来收缩。(克)PECAM染色血管内皮生长因子^+/+P9视网膜。(小时)SMA染色血管内皮生长因子^+/+在P14处仅限于小动脉及其侧分支。(我)血管内皮生长因子^+/+×PEC^LacZ公司4周时视网膜。舌骨动脉（HA）退化（HA残余，箭头所示）。(j个)凝集素（红色）和GFAP（在AC中，绿色）的双重染色（Lec/GFAP）。脉管系统前面的交流网络。(k个)PECAM染色血管内皮生长因子^164/164视网膜位于P5。血管发育正常。

到P9时，血管网已经到达视网膜的外围（图​（图2g）。2g） ●●●●。小动脉和小静脉的生长分别超过视网膜半径的88%±4%和79%±6%（表​（表1）。1). 静脉大于小动脉，而毛细血管的管腔最小（表​（表1）。1). 平均而言，每个视网膜有五到六个小动脉和小静脉（表​（表1）。1). PEC覆盖小动脉、小静脉和毛细血管，导致毛细血管EC/PC比率（EC/PC比）为5:1（表​（表1）。1). 然而，只有小动脉的一级和二级侧支表达可检测到的SMA水平，而微静脉和毛细血管在P9及以后仍为阴性（图​（图22h） ●●●●。

表1

VEGF-isoform小鼠视网膜血管的特征

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玻璃样血管存在于发育过程中，但一旦发育中的视网膜血管向视网膜提供足够的氧气，就会退化(15)（图​（图2i）。2i） ●●●●。与之前的研究结果一致，玻璃样血管仅包含动脉(15)EB2中的所有玻璃样血管^LacZ公司小鼠表达ephrin-B2（未显示）。玻璃样血管在P0时与视网膜相邻，但不与视网膜血管接触，从P0开始剥离视网膜直至其消退，很容易从视网膜上剥离。到P9时，他们表现出衰退的迹象，并在4周后消失（图​（图22i） ●●●●。

星形胶质细胞的发育（AC）与通过产生VEGF梯度来引导血管生长有关(10). GFAP和凝集素的全贴式双重免疫荧光染色显示，纺锤形AC在P0.5时在无血管视网膜上扩散，并在P2-3时到达视网膜周边（未显示）。这些无血管区域的AC表达丰富的VEGF（未显示）。后来，它们被组织成一个管状网络，包裹在生长缓慢的容器周围（图​（图2j）。2j） ●●●●。一旦血管系统到达视网膜周边（P9），中心血管化区域的VEGF表达量最小。

血管内皮生长因子正常视网膜血管发育^164/164老鼠。

在血管内皮生长因子^164/164小鼠，原始迷路的形成和随后的重塑与血管内皮生长因子^+/+小动脉、小静脉和毛细血管的数量和大小与P5相似（图​（图2k，2k、 表​表1）。1). 小动脉生长超过89%±10%，毛细血管生长超过99%±5%，小静脉生长超过视网膜半径的80%±12%（表​（表1）。1). Ephrin-B2和SMA表达（未显示），以及PEC数和EC/PC比率（表​（表1），1)玻璃样体消退、AC积聚和VEGF表达与血管内皮生长因子^+/+所有年龄段（未显示）。

VEGF中视网膜动脉发育受损^188/188老鼠。

视网膜血管。在只表达VEGF的小鼠中₁₈₈P3（未显示）形成的正常毛细血管迷路，含有PEC（尚未表达SMA）。到P5时，只有正常数量的一半大血管存在。这些在形态学上被确定为小静脉（图​（图3a），三a） ，不表达ephrin-B2（图​（图3，三，b和c），并且未对SMA进行染色（图​（图3e），三e） ，尽管存在PEC（图​（图3三d）,固定后收缩（图​（图3f）。三f） ●●●●。在P6，在残留的视网膜小动脉中可以检测到ephrin-B2，这表明动脉规格没有丢失（插图如图所示​图3c）。三c） ●●●●。在P9时，只有一半的正常小动脉发育，长出的小动脉仅占视网膜的17%±13%，并且小动脉的大小较小（表​（表1；1; 图​图3g）。三g） ●●●●。它们也被较少的LacZ阳性PEC覆盖（表​（表1），1)，在P9和P14处SMA染色微弱（图​（图3h）。三h） ●●●●。与动脉缺损相比，静脉和毛细血管发育基本正常。平均而言，每个视网膜有5到6个小静脉，它们生长正常（图​（图3，三、a和g；表​表1），1)而毛细血管在P9时生长超过视网膜的99%±2%（表​（表1）。1). 小静脉有点扩大，并被PEC覆盖，这对SMA是阳性的（图​（图3h），三h） 可能是由于动脉发育不足和由此导致的视网膜灌注异常。此外，毛细血管修剪减少，导致毛细血管床更加致密，每个视网膜区域的PEC数量略有增加（表​（表1；1; 图​图3，三，d和e），但在正常EC/PC比率下（表​（表11).

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图3

视网膜血管发育血管内皮生长因子^188/188老鼠。(一)P5处PECAM染色。毛细血管外生长与血管内皮生长因子^+/+视网膜，但没有形态学上明确的小动脉。(b条和c（c）)第5页的EB2/CollIV。P5无EB2表达。插入c（c）以下为：血管内皮生长因子^188/188×电子束2^LacZ公司P6处的视网膜显示小ephrin-B2阳性血管（箭头所示）。(d日和e（电子）)LacZ/Lec/SMA上血管内皮生长因子^188/188×PEC^LacZ公司视网膜位于P5，显示(b条)高PC密度(c（c）)但没有SMA免疫反应性。(（f）)P5的EM显示正常的毛细血管收缩。(克)P9处PECAM染色，视网膜中周毛细血管密度增加（箭头所示），部分切除玻璃样动脉。(小时)SMA免疫反应在小动脉中减弱，但在第14页的小静脉和毛细血管中呈阳性（箭头所示）。(我和j个)血管内皮生长因子^188/188年×PEC^LacZ公司4周时视网膜。(我)玻璃样动脉持续存在和小动脉发育不足。(j个)玻璃体动脉剥离后的相同视网膜。玻璃体动脉的中央部分可以切除，但不能切除周围部分（箭头所示）。(k个)Lec/GFAP。AC在血管床前面组织成管状网络。

玻璃样血管不容易从视网膜上分离出来，并且在P5与视网膜血管网建立了许多连接。到P9时，几个玻璃样血管已经迁移到外周视网膜并建立了动脉网（图​（图3g）。三g） ●●●●。舌骨动脉持续到4周大（图​（图3i）三i） 并穿透视网膜中段残留小动脉最大生长部位远端的内界膜（图​（图3，三、i和j）。可能是由于动脉供应不足导致VEGF表达增加（未显示），玻璃样血管浸润视网膜，从而挽救了灌注不足的周边。

AC通过P2（未显示）正常迁移至视网膜周边，并在P5处生长出的血管之前重新形成网络（图​（图3k）。三k） ●●●●。在P9，在玻璃体血管与视网膜血管床连接的部位（未显示），AC数量增加。

血管内皮生长因子的血管外生长受损^120/120视网膜。

在血管内皮生长因子^120/120老鼠。P5只发育出大小均匀的原始毛细血管迷路（图​（图4a）。4a） ●●●●。尽管动脉和静脉在形态学上无法区分，但50%的视网膜血管表达ephrin-B2（图​（图4，4b和c），表明动静脉规范发生在重塑阶段之前。PEC招募延迟；仅在视盘内和周围检测到分散的PEC（图​（图4d），4d） ，并且在P5时视网膜仍为SMA阴性（图​（图44e（电子）). EM表明，PC的稀疏性导致固定时毛细血管松弛（图​（图4f），4f） ，如与PC脱落相关的糖尿病视网膜病变。

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图4

视网膜血管发育血管内皮生长因子^120/120老鼠。(一)P5处PECAM染色。血管外生长明显受损。小动脉和小静脉在形态学上难以区分。(b条和c（c）)第5页的EB2/CollIV。EB2阳性和阴性血管簇交替出现。(d日和e（电子）)LacZ/Lec/SMA开启血管内皮生长因子^120/120×PEC^LacZ公司视网膜位于P5。(d日)视盘附近稀疏的蓝色细胞。(e（电子）)未检测到SMA免疫反应。(（f）)P5的EM显示毛细管松弛。(克)P9处PECAM染色，小动脉的损伤比小静脉的损伤更明显。(小时)动脉SMA染色较淡，而小静脉和毛细血管在P14处SMA呈强阳性。(我)血管内皮生长因子^120/120×接头1^LacZ公司P9处视网膜，玻璃体动脉持续扩张和迂曲。(j个)Lec/GFAP。AC组织形成网络存在于血管化区域，但在更外围的视网膜中迅速转变为原始的双极形状和平行组织（箭头所示）。(k个)P9未固定的全支架制剂，伴有视网膜出血（箭头）。

与其他基因型相比，毛细血管床血管内皮生长因子^120/120老鼠只覆盖了三分之二以上的视网膜血管内皮生长因子^120/120存活至P9的小鼠（表​（表1）。1). 血管网部分重塑为形态上可识别的动脉、毛细血管和静脉（图​（图4g）。4g） ●●●●。为了区分非特异性的一般性血管缺陷和特定的小动脉缺陷，小动脉的生长以视网膜半径和血管床的百分比表示。动脉发育受损最为严重；只有不到一半的小动脉生长在35%的视网膜和53%的血管床上（表​（表1；1; 图​图4g）。4g） ●●●●。只有一半的小静脉可以从形态学上识别出来血管内皮生长因子^120/120P9时的小鼠，但小静脉管腔大小正常，长出的视网膜半径仅为52%，但血管床超过80%（表​（表1；1; 图​图4g）。4g） ●●●●。视网膜中央有更多扩张的毛细血管（表​（表1）。1). 小动脉、小静脉和毛细血管周围的PEC较少，导致EC/PC比率增加（表​（表1）。1). 毛细血管的脆弱性也反映了这种损伤，导致出血（图​（图4k）。4k） ●●●●。可能是由于血流动力学应激增加，这些PEC对SMA的染色更强烈（图​（图4h）。4h） ●●●●。血管内皮生长因子在无血管视网膜中的表达显著上调，表明周边视网膜高度缺血（未显示）。

在VEGF中未观察到玻璃样变性的迹象^120/120在P9时，小鼠的玻璃样血管出现扩张和扭曲（图​（图4i）。4i） ●●●●。然而，与VEGF不同^188/188小鼠，VEGF中的玻璃样动脉^{120个/120个}小鼠既没有穿透视网膜，也没有与视网膜血管连接。

AC最初正常迁移至视网膜外围（未显示）。通过P5和P9，与视网膜血管相关的中央血管化视网膜中的AC显示出较强的GFAP表达。然而，在无血管视网膜周边，GFAP免疫反应较弱（图​（图4j），4j） 可能是由于缺血引起的组织损伤。血管床边缘的VEGF表达更丰富，可能是局部缺氧的结果（未显示）。

VEGF受体的表达。

来自血管内皮生长因子^+/+P5和P9的幼崽显示，NP-1在视网膜小动脉中表达，在视网膜小静脉中表达的水平低得多（图​（图5a）。5a） ●●●●。高倍镜显示NP-1以EC表示（图​（图5b）5b） 也可能出现在PEC中（图​（图5，5，b和c），也标记PDGF受体-β（图​（图5d）。5d） ●●●●。以前曾报道过内皮细胞和内皮细胞中NP-1 mRNA的表达(16). 通过NP-1、凝集素和SMA的三重免疫荧光染色，在视网膜神经元中检测到NP-1，但在视网膜的内皮细胞或内皮细胞中未检测到（图​（图5，5、e和f）。VEGFR-1或VEGFR-2的免疫染色表明，VEGFR-1在动脉和静脉的内皮细胞和血管平滑肌细胞中表达（图​（图5，5而VEGF-R2仅在视网膜毛细血管和小静脉的内皮细胞中表达（图​（图5，5、i和j）、大脑、心脏和肾脏（未显示）。VEGFR-1和VEGFR-2染色的特异性已在其他地方报道(17). VEGFR-1的表达(18)和NP-1(19)之前已在PEC中记录。

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图5

血管内皮生长因子受体表达血管内皮生长因子^+/+视网膜。(一)NP-1在P5的全贴装原位杂交。在小动脉中表达显著，在小静脉中表达离散。(b条)P7视网膜切片的原位杂交提示内皮细胞和内皮细胞中NP-1的表达（箭头所示）。(c（c）和d日)高倍全山原位杂交(c（c）)NP-1和(d日)PDGF受体-β（PDGFRβ）表明PEC对PDGFRα呈阳性，提示PEC中NP-1表达（箭头所示）。(e（电子）和j个)使用凝集素、抗SMA和抗VEGFR对血管内皮生长因子^+/+第9页的眼睛。凝集素（蓝色）、VEGFR（红色）和SMA（绿色）。(e（电子）和（f）)NP-1在视网膜神经元（箭头）中可检测到，但其在血管中的表达超出了免疫染色的检测极限。(克和小时)VEGFR-1（R1）以vSMC和EC表示（箭头）。(我和j个)VEGFR-2（R2）表达仅在毛细血管和小静脉的内皮细胞（箭头）中检测到。

血管内皮生长因子亚型在内皮生长中的作用。

星形胶质细胞在内皮细胞前迁移，并通过释放VEGF将其引导至视网膜周边(20). 血管床生长正常血管内皮生长因子^164/164和血管内皮生长因子^188/188小鼠（除了血管内皮生长因子^188/188视网膜）。相反，在VEGF中^120/120小鼠EC生长有缺陷，影响所有血管类型。这可能是因为VEGF₁₂₀在诱导EC有丝分裂方面作用较小(21)或对VEGFR-1的亲和力降低(22)可能影响EC功能或生存(6). 或者，VEGF₁₆₄和VEGF₁₈₈在结合细胞外基质时，可能提供基质相关的指导线索，促进EC通过视网膜迁移，可能是通过建立VEGF梯度或EC迁移的“轨迹”。这些线索可能在血管内皮生长因子^120/120可溶性VEGF在其中扩散的小鼠₁₂₀该亚型可诱导EC随机迁移。这些假设与VEGF的发现一致₁₂₀-与VEGF相比，表达肿瘤是低血管性的₁₆₄-或血管内皮生长因子₁₈₈-表达肿瘤(23). 这意味着不同的VEGF亚型在新生血管的正确模式中具有重要作用。血管模式化是正常血管生成的一个基本特征，在分子水平上仍知之甚少。

VEGF亚型在视网膜动脉发育中的作用。

视网膜小动脉和小静脉的形成存在基因型特异性缺陷。在血管内皮生长因子^+/+和血管内皮生长因子^164/164小鼠，小动脉在P9处伸出约90%的整个血管床。在血管内皮生长因子^120/120小鼠的微静脉和小动脉数量较少且较小，但当微静脉伸出80%以上时，小动脉仅延伸到血管床的约50%。动脉缺损在血管内皮生长因子^188/188小动脉（而非小静脉）较小，仅延伸到血管床的18%以上。因此，VEGF₁₆₄亚型足以促进小静脉和小动脉的发育，即血管内皮生长因子₁₈₈异型体允许小静脉但不允许小动脉的发育，而VEGF₁₂₀亚型对小静脉尤其是小动脉的发育来说是不够的。

动脉EC规范。

当前的假设表明，未分化血管网络的“动脉化”需要vSMC的重塑和募集，以响应血流动力学力（参考文献。24). 最近的研究表明，动脉和静脉内皮细胞在分子水平上与血管发育的早期阶段不同，可以通过其僵局的表达来区分(25)，D114(26)，百万像素(27)，NP-1(16)、ephrin-B2（动脉内皮细胞）及其受体Eph-B4（静脉内皮细胞）(7)和激活素受体样激酶-1(28). 与此修订模型一致，ephrin-B2在血管内皮生长因子^+/+和血管内皮生长因子^164/164小鼠，甚至在小动脉可以被形态区分之前。由于ephrin-B2也在未建模的视网膜血管中表达血管内皮生长因子^120/120小鼠，小动脉发育受损不能归因于流产的小动脉EC规范。相反，ephrin-B2在血管内皮生长因子^188/188小鼠被推迟到P6，这时，基本的小动脉开始生长，这表明这些内皮细胞是动脉分化的，但无法正常生长。有缺陷的动脉是否在血管内皮生长因子^188/188小鼠因EC前体的延迟或受损动脉规格和/或动脉EC的生长，以及为什么VEGF₁₂₀和血管内皮生长因子₁₆₄亚型比VEGF更有效₁₈₈在诱导动脉规格和/或生长方面，尚待确定。有趣的可能性是，短亚型诱导动脉标记物的表达（如Bmx所示）(27)甚至在早期影响成血管细胞或血管内皮生长因子₁₈₈该亚型可能无法为视网膜小动脉内皮细胞提供空间指导或分化线索，因为它仍然与细胞外基质相关。

PEC招募。

PEC招募在血管内皮生长因子^164/164老鼠。相反，血管内皮生长因子^120/120小鼠表现出PEC募集普遍受损，导致毛细血管扩张和红细胞外渗，如这些小鼠心脏所述(6)以及PEC功能障碍或辍学的其他情况(29). EC发布PC招募所必需的信号（如PDGF-BB）(10). 由于PDGF-BB的表达在血管内皮生长因子^120/120老鼠(6)PEC募集障碍可能归因于血管内皮生长因子^120/120老鼠。有趣的是，VEGFR-1在视网膜（以及肾、脑和心脏）小动脉和小静脉PEC中表达（本研究和参考文献。18)表明VEGF可能对PC招募有直接影响(10). 自从VEGF₁₂₀亚型与VEGFR-1的亲和力低于VEGF₁₆₄异构体(22)，这种短的同种型可能不能像其他同种型那样有效地募集PEC。血管内皮生长因子^188/188另一方面，小鼠的微静脉和毛细血管显示出正常的PEC募集，但未发育的视网膜小动脉的覆盖率降低。这可能再次表明，在发育不全的小动脉中，PC募集受损是继发于EC功能异常。或者，较小的VEGF亚型的扩散可能对化疗吸引VEGFR-1阳性PEC至关重要。小动脉周围PC募集的特殊缺陷也可能提示VEGF的重要相互作用₁₆₄NP-1亚型，在视网膜小动脉中比在小静脉中表达更丰富。尽管尚未描述，但VEGF₁₈₈亚型可能与NP-1结合，因为它包含外显子7，编码这种相互作用的必需氨基酸残基(30). 也许这种长的同种型（与基质结合）无法到达PECs上的NP-1受体，或损害PC的迁移，因为它将NP-1阳性PC固定在VEGF位点₁₈₈生产。尽管配体的性质尚不清楚，但之前已经提出NP-1在细胞粘附中的作用(31). 另一种可能性是发育不全的小动脉中的血流异常，这可能会损害小动脉的成熟。最后，视网膜表型可能受到心脏、骨骼和肺部血管生成受损的影响血管内皮生长因子^{120个/120个}老鼠(6,32,33)，生长迟缓血管内皮生长因子^188/188或单个亚型的相对过表达。事实上，这些敲除小鼠中的每一只都表达了一种亚型，其表达水平与三种亚型的总表达水平相当血管内皮生长因子^+/+小鼠（本研究和参考文献。6). 然而，视网膜表型不太可能仅继发于其他器官的血管生长受损，因为在其他器官中未检测到此类特定的动脉缺陷。

其他器官的动脉发育。

虽然令人惊讶的是，这种长亚型在视网膜小动脉形成中的作用有限，但新的证据表明血管形成的机制(34)以及VEGF亚型的差异表达(32)高度依赖于组织微环境。在此背景下值得注意的是，视网膜PEC来自神经嵴细胞，而其他组织中的PEC来自其他来源(35).

作者感谢A.Van Lommel（鲁汶天主教大学病理学系）和A.Bouché，K.Vandevelde，W.Man，L.Kieckens，A.Manderveld，F.De Wever，K.Maris，T.Vancoetsem，E.Gils，K.Bijnns，A.Vandenhock，P.Van Wesemael，L.Godde，S.Lucas，C.Van Huylebroeck，S。Wyns（鲁汶转基因技术和基因治疗中心）寻求帮助。他们感谢K.Alitalo提供Tie1推广人。I.Stalmans是比利时Fonds voor Wetenschappelijk Onderzoek（FWO）的研究助理，P.D'Amore是朱尔斯和多丽丝·斯坦因预防失明研究教授。这项工作得到了FWO（G012500）、比利时国家歌剧院（2001/09）和欧盟（BMH4-CT98-3380）对P.Carmeliet的资助；从NIH（HL-6221和CA-45548）到D.J.Anderson和P.D'More；从Deutsche Forschungsgemeinschaft到H.P.Hammes。