图3。

表达HPAI H7 HA蛋白的融合性rNDV载体的构建和鉴定。(A类)rNDV/F3aa-嵌合H7 cDNA构建体的示意图。H7 HA蛋白的外结构域与NDV F蛋白的跨膜结构域和胞质尾部融合。该嵌合H7 HA基因插入rNDV/F3aa载体的P和M基因之间。(B类)病毒生长动力学的比较。用每种病毒的100个形成斑点的单位接种10日龄鸡胚，并在不同时间点（接种后24、48和72小时）收集尿囊液。病毒滴度（组织培养50%感染剂量，TCID₅₀)用抗NDV兔血清和抗兔IgG FITC-标记抗体（DAKO）通过免疫荧光法测定Vero细胞中的抗体。(C)在感染rNDV的细胞中表达WT H7 HA蛋白或H7 HA嵌合蛋白。感染后36小时收集感染细胞，并使用细胞裂解物进行免疫印迹分析。(D类)与WT H7 HA蛋白相比，H7 HA嵌合蛋白在rNDV病毒中的掺入量增加。从感染的鸡胚尿囊液中纯化出rNDV/B1-H7和rNDV/F3aa-嵌合H7。在SDS/10%聚丙烯酰胺凝胶上分离rNDV/B1-H7或rNDV/F3aa嵌合H7的病毒蛋白。将病毒蛋白转移到硝化纤维素膜上，用抗鸡H7-HA多克隆抗体和抗鸡IgG过氧化物酶标记抗体（Jackson ImmunoResearch）通过化学发光检测H7-HA蛋白。