美国国家科学院院刊。2006年4月4日；103(14): 5496–5501.
生活应激与糖皮质激素受体和β基因表达减少2-哮喘儿童的肾上腺素能受体
*和*
格雷戈里·米勒
加拿大不列颠哥伦比亚大学心理学系，加拿大不列支敦士登哥伦比亚省温哥华西城2136号，V6T 1Z4
伊迪丝·陈
加拿大不列颠哥伦比亚大学心理学系，加拿大不列支敦士登哥伦比亚省温哥华西城2136号，V6T 1Z4
加拿大不列颠哥伦比亚大学心理学系，加拿大不列支敦士登哥伦比亚省温哥华西城2136号，V6T 1Z4
新泽西州普林斯顿大学伯顿·H·辛格编辑，2006年1月31日批准
作者贡献：G.E.M.和E.C.设计的研究；G.E.M.和E.C.分析数据；通用电气和E.C.撰写了这篇论文。
摘要
尽管有证据表明，紧张的经历会加剧哮喘的症状，但人们对其发生的生物学机制知之甚少。本研究检测了生活压力是否会降低糖皮质激素受体和β2-肾上腺素能受体。共有77名儿童参加了这项研究（59%为男性；平均年龄为13.5岁）。其中39人被医生诊断为哮喘，38人健康。在对应激经历进行深入访谈后，通过肘前静脉穿刺收集白细胞，并使用实时RT-PCR定量mRNA。慢性应激与β2-哮喘儿童的肾上腺素能受体。然而，在健康儿童的样本中，这种影响的方向是相反的。研究前6个月发生的重大生活事件不足以影响基因表达模式。然而，当这些事件发生在慢性应激源的背景下时，它们与基因表达模式的关联就更加明显了。同时经历急性和慢性应激的哮喘儿童糖皮质激素受体mRNA减少5.5倍，β2-肾上腺素能受体mRNA与没有类似压力源暴露的哮喘儿童的相关性。这些发现表明，应激经历会降低糖皮质激素和β2-哮喘儿童的肾上腺素能受体基因。在一定程度上，它降低了对糖皮质激素抗炎特性或β-激动剂支气管扩张特性的敏感性，这一过程可以解释与应激相关的哮喘发病率增加。
越来越多的证据表明，压力经历会加剧儿童哮喘的症状(1–5). 例如，在一项为期18个月的儿童哮喘前瞻性研究中，严重的生活事件使哮喘发作的风险增加了近2倍。当生活事件发生在慢性压力源的背景下时，其影响更加显著。暴露于高水平急性和慢性应激的儿童在随后的2周内发病风险增加了3倍(6,7).
尽管发现了这种强有力的模式，但人们对负责任的潜在机制知之甚少(1). 应激经历通常会激活下丘脑-垂体-肾上腺皮质和交感-肾上腺-髓质轴，导致激素皮质醇、肾上腺素和去甲肾上腺素分泌增加。虽然这些分子通常被认为是压力相关疾病的介质(8)它们在压力与哮喘之间的联系尚不清楚。高水平的皮质醇可以减轻呼吸道和周围的炎症；类似地，肾上腺素等β肾上腺素能激动剂是有效的支气管扩张剂。这些观察结果表明了一个自相矛盾的结论，即压力经历应该改善而不是加剧哮喘症状(9,10). 然而，迄今为止收集的临床数据与这一结论不一致。有压力的经历会导致哮喘恶化(1,2).
为了解决这个悖论并确定潜在的潜在机制，我们提出了另一种假设，将应激经历与哮喘发病率联系起来(9). 它坚持认为，压力源促进下丘脑-垂体-肾上腺皮质和交感-肾上腺-髓质轴的荷尔蒙产物的持续分泌。随着这些分子浓度的持续升高，靶组织会发生糖皮质激素受体（GRs）和肾上腺素能受体的代偿性下调。这一过程降低了对糖皮质激素抗炎特性和β-激动剂支气管扩张特性的敏感性，从而有助于在暴露于哮喘触发因素时促进持续炎症和气道收缩。
本文以社区哮喘儿童为样本，探讨了这一事件链中的第一步。我们对急性和慢性生活压力进行了详细的访谈，并收集了白细胞，以量化GR和β2-肾上腺素能受体（β2AR）。主要假设是(我)急性和慢性应激源都与受体mRNA表达减少和(ii（ii）)当急性事件叠加在现有的慢性应激源上时，对基因表达的影响最为显著。
结果
初步分析。
描述了样本的特征。哮喘儿童和健康儿童在年龄、民族/种族背景和家庭收入方面相似(P（P）值>0.41）。然而，各组在性别分布方面存在差异，哮喘队列中男性所占比例更大（χ2= 4.78,P（P）= 0.04). 两组的体重指数相似(P（P）>0.95），尽管正如预期的那样，哮喘儿童的用力呼气量（FEV）较低1)百分位数(t吨(75)= 2.27,P（P）< 0.03).
表1。
| 人口统计学和医学特征 | 哮喘(n个= 39) | 健康(n个= 38) |
|---|
| 人口统计学的 | | |
| 年龄，年 | 13.4 ± 2.7 | 13.5 ± 2.1 |
| 性别，男性数量* | 28 (71%) | 18 (47%) |
| 下降（欧洲） | 24 (61.5%) | 25 (65.8%) |
| 后裔（亚洲人） | 9 (23.1%) | 8 (21.1%) |
| 年收入（超过50000美元） | 24 (61.5%) | 25 (65.8%) |
| 医疗特征 | | |
| 体重指数，kg/m2 | 20.8 ± 3.2 | 20.8 ± 3.6 |
| FEV公司1（预测值的%）* | 94.0 ± 13.5 | 102.9 ± 10.1 |
| 吸入皮质类固醇（每周>3次）* | 12 (15.6%) | — |
| 支气管扩张器（每周>3次）* | 11 (14.3%) | — |
| 白三烯拮抗剂（每周>3次）* | 2 (2.6%) | — |
该研究的主要预测因素和结果变量总结如下哮喘儿童和健康儿童在家庭、家庭生活、学术和友谊领域的慢性压力水平相似(P（P）值>0.41）。在入学前的3个月和6个月期间，他们也经历过类似数量的重大生活事件(P（P）值>0.39）。GR和βmRNA的显著差异2AR很明显。由于相对数量的每个单位差异都表明基因表达存在2倍的差异，哮喘儿童表达的β2AR mRNA(t吨(75)= 4.32,P（P）<0.001），GR mRNA几乎是医学健康儿童的两倍(t吨(75)= 1.97,P（P）< 0.05).
表2。
| 预测因素和结果 | 哮喘(n个= 39) | 健康(n个= 38) |
|---|
| 压力等级 | | |
| 慢性压力 | | |
| 家庭关系（1-5分） | 2.2 ± 0.6 | 2.4 ± 1.0 |
| 家庭生活（1-5级） | 2.5 ± 0.7 | 2.5 ± 1.0 |
| 学术（1-5分） | 2.2 ± 0.8 | 2.2 ± 0.9 |
| 友谊（1-5级） | 2.1 ± 0.8 | 2.2 ± 0.7 |
| 生活事件 | | |
| 过去3个月 | 7 (17.9%) | 5 (13.2%) |
| 过去6个月 | 8 (20.5%) | 7 (18.4%) |
| mRNA表达 | | |
| GR（RQ，log-2）* | 4.7 ± 1.5 | 3.8 ± 1.5 |
| β2AR（RQ，log-2）* | 6.8 ± 2.5 | 4.5 ± 2.2 |
为了确定潜在的混淆因素，计算了儿童的人口统计学和生物医学特征与结果之间的相关性。mRNA的相对数量在人口统计学类别中相似(P（P）值>0.21），但正如预期的那样，始终与FEV相关1百分位数和吸入性皮质类固醇和支气管扩张剂的使用(P（P）值<0.05）。特别是，经常使用支气管扩张剂的儿童表现出较高的GR和β2AR mRNA比没有(P（P）值<0.05）。吸入性皮质类固醇的使用也有类似的模式(P（P）值<0.05）。（这些差异反映了这样一个事实，即药物仅用于哮喘儿童，这些儿童作为一个群体，与健康儿童相比，这两种转录物的表达增加。在哮喘儿童中，服用皮质类固醇和支气管扩张剂的儿童的mRNA略有下降，但并不显著。）反映体重指数的变量和白三烯调节剂的使用与β2AR和GR。根据这些分析结果，我们包括FEV1在随后的所有分析中，皮质类固醇和支气管扩张剂的百分比和使用作为协变量。
慢性压力源的作用。
回归分析表明，哮喘儿童与健康儿童的慢性应激与受体mRNA的关系不同。以图形方式说明了这些发现。对于β2AR，医疗组状态与家庭慢性压力之间存在显著交互作用(B类=1.59，SE=0.76，P（P）< 0.04, ΔR（右）2= 0.05). 哮喘儿童β2AR mRNA随着家庭生活压力的增加而显著下降，而在健康儿童中，受体表达随着慢性压力而适度增加( 上部).
慢性应激与β2哮喘儿童与健康儿童AR表达不同。哮喘儿童中β2AR mRNA随着家庭生活而下降(上部)和家庭关系(下部)含有较高水平的慢性压力。相反的模式在健康儿童中很明显。作为家庭生活(上部)和家庭关系(下部)恶化，β的表达2AR基因增加。RQ，mRNA的相对数量。
慢性家庭压力也出现了类似的模式（对于互动，B类=1.56，SE=0.76，P（P）< 0.05, ΔR（右）2= 0.04). 在哮喘儿童中，低质量的家庭关系与β2AR mRNA，而在健康儿童中，这些变量正相关( 下部). 在这两组分析中，哮喘儿童的β2AR mRNA比健康儿童(P（P）值<0.001），但没有慢性应激的主要影响(P（P）值>0.35）。鉴于强大的相互作用，缺乏主要作用并不令人惊讶，这表明压力与mRNA的关联方向因医疗组状态而异。
尽管慢性应激与β2AR，在GR分析中没有出现类似的模式。家庭和家庭生活领域的慢性应激分级与GR mRNA无关，无论它们被视为主要影响还是与医疗组状态相关(P（P）值>0.11）。此外，学术和友谊领域的慢性压力评级与受体mRNA之间的相关性不显著(P（P）值>0.10）。
重大生活事件的作用。
方差分析未揭示主要生活事件与β2AR或GR mRNA。无论这些事件是在3个月还是6个月的窗口期内发生的，以及它们的存在是否与儿童的医疗状况相结合，都是这种情况(P（P）值>0.12）。因此，主要生活事件的简单存在不足以影响编码β2AR和GR。
然而，当在慢性应激的背景下考虑急性事件时，它们与β2AR和GR mRNA表达增强。以图形方式说明了注册后3个月内发生的事件的这些发现。对于β2AR，医疗组状态和双重暴露之间存在显著的交互作用，双重暴露定义为发生重大事件和家庭中持续的慢性压力(F类(1,69)= 6.40,P（P）< 0.02). 在患有哮喘的儿童中，急性和慢性压力的结合与β2AR信使核糖核酸( 顶部). 这种影响的程度相当大，在有和没有双重暴露的哮喘儿童之间，基因表达的差异达到9.5倍。在健康儿童中，这种模式被逆转；急性和慢性应激相结合与β增加5.5倍有关2AR mRNA。
当急性事件发生在持续的慢性应激中时，它们对β2AR和GR mRNA增强。哮喘儿童的β减少9.5倍2AR mRNA(顶部)GR mRNA减少5.5倍(中部)当他们同时面临重大生活事件和慢性家庭压力时。在健康儿童中，这种模式是相反的（所有面板）。GR mRNA的显著下降也发生在哮喘儿童身上，这些儿童在经历家庭慢性压力的同时也经历了重大生活事件(底部). 数据绘制为平均值±SEM.RQ，mRNA相对数量。
在对GR的分析中也出现了类似的结果。医疗组状态与重大急性事件和慢性家庭压力的双重暴露之间存在显著的交互作用(F类(1,69)= 7.36,P（P）< 0.01).(中部)以图形方式显示此发现。当哮喘儿童同时暴露于急性和慢性应激源时，他们的GR mRNA减少了5.5倍。在健康儿童中，这一模式被颠倒并减弱；双重暴露与转录本增加2.5倍有关。当考虑到家庭生活领域的慢性压力时，同样性质的显著交互作用出现了(F类(1,69)= 5.11,P（P）< 0.03).(底部)研究表明，两次接触导致哮喘儿童GR mRNA下降4倍，而健康儿童GR基因表达增加2.5倍。
为了证实这些发现，对主要生活事件重复了6个月的分析。结果模式几乎相同，通过两次接触相互作用，β-2AR和GR(F类(1,69)值≥4.83，P（P）值<0.04）。在所有病例中，双重暴露与哮喘儿童的mRNA减少和健康儿童的mDNA增加相关（数据未显示）。然而，这些影响的程度略小于3个月窗口期的影响，哮喘儿童的差异在2.5至4.0倍范围内，健康儿童的差异则在1.6至6.0倍范围内。
调查结果的特殊性。
最后的分析检查了我们的发现是否针对β2AR和GR mRNA。我们重复了论文中的所有主要分析，这一次试图预测18S的表达，18S是作为PCR程序的一部分量化的持家基因。压力经历与18S mRNA的数量无关，无论它们是急性的还是慢性的(P（P）值>0.18）。这些发现表明，生活压力可能对GR和β2AR，而不是白细胞中的mRNA表达整体下降。
讨论
这些发现证明了压力生活经历与βmRNA表达之间的关系2AR和GR。由于他们的家庭生活以慢性应激为标志，哮喘儿童β2研究前6个月内发生的主要生活事件不足以影响基因表达模式。然而，当这些事件发生在慢性应激源的背景下时，它们与基因表达的关联会大大加强。患有哮喘的儿童在长期家庭压力下暴露于重大生活事件中，β2AR mRNA和GR mRNA相对于没有类似应激源暴露的哮喘儿童减少5.5倍。对于家庭中的慢性压力也有类似的发现；当与重大生活事件相结合时，GR mRNA减少4倍。
这些差异如何解释与压力体验相关的过度哮喘发病率？β2AR和GR是许多调节气道反应性和炎症的信号通路的起点。在气道平滑肌细胞上，β2AR激活有助于支气管放松。T淋巴细胞上的β2AR和GR在调节过敏原暴露后IL-4、IL-5和IL-13的表达中起关键作用。肥大细胞也组成性地表达这些受体，结扎可以抑制组胺和其他过敏介质的释放，并减少嗜酸性粒细胞的募集和激活(11–13). 因此，在一定程度上，观察到的mRNA差异表现为β2AR和GR，哮喘儿童在暴露于过敏触发因素后可能容易发生气道炎症和收缩。除了这些对气道和免疫功能的直接影响外，这些受体系统的应激相关下调可能会降低对β-激动剂和糖皮质激素药物的敏感性，这对哮喘的有效临床治疗至关重要(9). 的确，对糖皮质激素药物的耐药性与急性呼吸窘迫患者的发病率和死亡率增加有关(14).
这些观察结果强调了磨蚀的家庭关系和不稳定的家庭环境对哮喘儿童的潜在有害后果。在这方面，他们与最近几项临床研究的结果一致，这些研究表明，父母的压力与婴儿期的喘息有着前瞻性的联系(15)儿童哮喘在父母有困难的家庭中更为常见(5,16). 此外，那些照料者报告压力大、养育困难的儿童患哮喘的风险最大(17). 还有越来越多的证据表明，直系亲属以外的压力源很重要；暴露于社区暴力与哮喘儿童症状的更多表现相关(4). 总的来说，这些发现表明，在患有哮喘的儿童和青少年中，家庭生活质量和家庭关系是健康和幸福的重要决定因素，并且似乎比其他生活领域，如学术和同伴关系，具有更强的影响。
研究还发现，哮喘儿童和健康儿童对白细胞基因表达程序的调节存在差异。哮喘儿童表达更多β2AR和GR mRNA高于健康儿童。这些发现与研究结果一致，研究表明稳定的哮喘以淋巴细胞上GR密度升高为标志(18,19)β增加2淋巴细胞和肺组织上的AR(20,21). 这种现象背后的机制尚不清楚。一种可能性是，通过表达更多的受体，特别是糖皮质激素受体，哮喘患者能够更好地调节对过敏刺激的细胞因子反应。一种相关的可能性是，较高的受体数量有助于补偿长期接触针对这些系统的药物而产生的对糖皮质激素或支气管扩张剂的耐药性。然而，需要进一步研究来评估这些假设，因为几个研究小组已经发现哮喘患者和健康对照者的淋巴细胞上有类似的受体表达模式(22,23). 除了mRNA数量的总体差异外，我们的数据表明，压力源对健康儿童和哮喘儿童的基因表达程序有不同的调节作用。虽然哮喘儿童的应激经历与mRNA下调有关，但我们发现，在健康儿童中，某些情况下表现出相反的关联模式。这些模式仅在家庭压力和β2AR mRNA，因此持续的家庭压力与更大的β2AR mRNA在健康儿童中的表达，这种相关性随着重大生活事件的发生而扩大。这种发现模式出乎意料。在面临慢性压力源的健康成年人中，β2AR受体密度降低(24)类似于我们的哮喘患者。未来的研究需要确定健康儿童中这种现象的潜在机制，以便更好地理解压力经历及其引发的荷尔蒙级联如何改变哮喘儿童与健康儿童的基因表达程序。
这项研究有许多局限性，值得注意。首先，它的横截面设计排除了对因果关系方向的推断。尽管我们能够排除对这些发现的几种替代性解释，包括人口统计学、肺功能和药物使用，但有可能是未测量的变量虚假地夸大了应激经历与β2AR和GR。因果关系的方向也可能是从基因表达到压力体验，尽管很难想象这将如何运作，因为我们研究的组织是白细胞（而不是中枢神经系统）。第二，收集白细胞的方式不能使我们确定哪些细胞的遗传程序因压力经历而改变。我们发现的模式可能出现在粒细胞、单核细胞、淋巴细胞或这些细胞类别的某些组合中。需要进一步研究来澄清这个问题。同时，重要的是要记住β2AR和GR在大多数粒细胞、单核细胞和淋巴细胞上表达，每种细胞类型都参与导致哮喘症状的一个或多个过敏反应阶段(14,25,26). 此外，在这个样本中，细胞类型的相对平衡与生活压力无关，这表明我们的研究结果并不仅仅反映了白细胞在循环中运输过程中与压力相关的差异。最后，该方案评估了外周血白细胞中的mRNA。气道或其他淋巴腔中的细胞可能提供了更好的指示体内情况。然而，对于那些没有因参与而获得任何明显临床益处的儿童来说，很难获得这种性质的更具侵入性的措施。然而，下一波研究将需要评估我们的发现的普遍性，并确定它们是否扩展到与哮喘发病机制有关的其他组织。进行蛋白表达和受体结合实验以确定mRNA差异是否反映在受体数量和功能上也是一个高度优先事项。
尽管有这些局限性，这项研究提供了对压力经历加剧哮喘症状的机制的见解。先前的研究发现，在哮喘儿童和青少年中，应激源与较高水平的IgE、对过敏触发物更强的淋巴细胞增殖反应以及在体外产生T辅助因子2细胞因子，如IL-4和IL-5(27–29). 此外，哮喘患者对变应原挑战有反应，在自然主义生活应激源周围期间，嗜酸性粒细胞数量增多，IL-5分泌增加(30). 我们的发现在两个关键方面扩展了这些观察结果。首先，他们认为压力经历的具体特征决定了它是否与生物学结果相关。慢性压力源，包括磨蚀性的家庭关系或不稳定的家庭环境，似乎是最有害的。孤立出现的急性应激源不会影响基因表达，但当它们出现在慢性应激源中时，其与结果的关联强度会显著增强。其次，我们的研究结果扩展了以往的研究，证明了压力经历与基因表达水平的改变有关，并导致调节气道反应性和炎症的受体系统的mRNA数量减少。随着这种性质的进一步机制研究，科学家和临床医生将能够更好地理解长期以来临床智慧的生物学基础，即压力经历会导致哮喘发病率和死亡率。
方法
患者。
样本包括39名哮喘儿童和38名健康儿童。他们是从不列颠哥伦比亚省温哥华社区通过医生办公室、报纸和杂志以及社区环境中的广告招募的。如果孩子符合以下条件，他们有资格参加研究(我)他们的年龄在9岁到18岁之间(ii（ii）)他们英语流利，并且(三)他们在过去4周内没有出现上呼吸道疾病。为了被纳入哮喘组，儿童需要有哮喘的医生诊断，并且没有其他慢性疾病。健康儿童必须有无慢性医学和精神疾病的病史。有关儿童病史的信息是从父母那里收集的。
程序。
符合条件的儿童在家长的陪同下参观了我们的研究中心。在详细解释了研究程序后，获得了家长的书面同意，并获得了孩子的同意。然后将孩子带到一个单独的房间，在孩子的手臂上涂抹局部麻醉剂（EMLA；阿斯利康，威明顿，DE），为静脉穿刺做准备。然后就生活压力对儿童进行了深入访谈（见下文）。使用肺活量测定法进行肺功能测试。接下来，孩子坐在舒适的椅子上，通过肘前静脉穿刺采集血液。该方案得到了不列颠哥伦比亚大学研究道德委员会的批准。
生活压力访谈。
为了评估患者的压力体验，我们进行了加州大学洛杉矶分校生活压力访谈，儿童版(31). 这个半结构化的访谈涵盖了过去6个月里急性和慢性形式的压力。它关注多个生活领域的压力，包括家庭关系、友谊、学校和家庭生活。（家庭关系和家庭生活是慢性压力的不同领域。前者关注家庭成员之间的人际关系质量；后者关注父母的工作压力、家庭的财务状况和邻里环境的质量。）在每个领域中，一位训练有素的面试官提出了一系列开放式问题，并利用收集到的信息来评估长期持续压力的程度。评级从1到5不等，数字越高，反映出更严重和持续的困难。采访还产生了关于急性应激源发生的信息，在这种情况下，急性应激源被定义为具有离散发作和抵消的特定事件。为了判断急性事件的客观影响，我们的研究团队在听取了主要采访者关于事件细节的简要介绍后，进行了共识评级。影响等级从1（无长期影响）到5（严重的长期影响）不等。重要的是，共识评级明确考虑了事件发生的背景。例如，如果孩子的祖父患有心肌梗死，影响等级将取决于他们的关系有多密切，孩子是否去医院看望他，以及孩子是否有过应对严重家庭疾病的经历。按照惯例，我们认为评分>3（中度长期影响）的急性事件为重大生活事件。该访谈已成功用于8岁的儿童，有证据支持其信度和效度。例如，压力等级高的儿童和青少年容易出现抑郁发作(32–34).
GRs和β2AR。
GR和β的白细胞表达2通过实时RT-PCR定量AR mRNA。通过导管前静脉穿刺到PAXgene血液RNA管（Pre-Analytix，Hombrechtikon，Switzerland）中收集血液（2.5毫升）。然后通过使用PAXgene血液RNA试剂盒（Pre-Analytix）提取总RNA。RT-PCR在Applied Biosystems Prism 7000序列检测系统上进行，使用基于6-羧基荧光素标记TaqMan探针5′核酸酶活性的一步法（TaqMan-一步法RT-PCR；Applied biosystem）。对于β2AR是一种商用的检测系统（TaqMan基因表达检测#Hs00240532；Applied Biosystems），带有基于共识序列的引物和探针（美国国家生物技术信息中心RefSeq{“类型”：“entrez-notide”，“属性”：{“文本”：“NM_000682”，“term_id”：“1519243847”，“term_text”：“NM_000682“}}NM_000682号). 对GR的分析集中在显性受体亚型GR-α上，该亚型传递皮质类固醇的抗炎信号。为了量化GR-αmRNA的表达，我们与Applied Biosystems合作开发了TaqMan分析。引物序列为AGTGGTTGAAAATCCTTAACTATTGCT（正向）和GGTATTGTGGATGTATTCAGCTA（反向），并基于已建立的序列（RefSeq{“类型”：“entrez-notide”，“属性”：{“文本”：“NM_000176”，“term_id”：“1531243791”，“term_text”：“NM_000176“}}NM_000176号)对于GR-α。对于这两种分析，热循环方案包括在48°C下30分钟的逆转录，然后在95°C下10分钟的AmpliTaq激活，以及40个扩增周期，包括在95°C下15 s的变性和在60°C下60 s的退火/延伸。阈值周期(C类吨)数字是通过使用特别提款权1.1rq值软件（Applied Biosystems）。作为内部对照，18S mRNA水平与靶基因平行定量（TaqMan基因表达检测#Hs99999901；应用生物系统）。使用Δ将数据归一化C类吨方法（ΔC类吨=C类吨靶基因−C类吨内部控制）。结果表示为每个目标基因的相对数量，通过减去每个患者的Δ计算得出C类吨最大Δ的值C类吨分布中的值。因此，较高的相对量表明GR和β的表达更高2AR基因。相对数量的每一个单位差异都表明基因表达存在2倍的差异，因为在每个扩增周期中，基因产物都会加倍。
潜在混淆者。
我们测量了一些过程，这些过程可以为压力源和生物结果之间的关系提供其他解释。在与家长面谈期间，收集了儿童及其家人的人口统计特征信息。通过肺活量测定评估肺功能，并得出FEV1值。FEV公司1根据儿童的年龄、性别、种族和身高，将数值计算为预测值的百分比。在最后一次使用短效支气管扩张剂后至少4小时采取措施，并遵循大型多地点哮喘临床试验的方案(35). 为了评估药物的影响，家长被要求将孩子的所有药物带到研究中心。名称和剂量直接从标签上记录下来，并从父母和孩子那里确定过去2周内服用每种药物的天数。从这些数据中创建了两个变量，用于统计分析。其中一个反映了过去两周内给药的总剂量，另一个反映了药物使用的天数。由于这两个变量出现了相同的结果，因此在最后一轮统计分析中使用了后者。
统计分析。
统计分析中检验了三个主要假设。检查慢性应激源对GR和β的影响2AR表达式中，我们计算了一系列分层多元回归方程。根据连续输入的三个变量块预测每个转录本的相对数量。这些区块包括(我)代表潜在混淆因素的人口统计学和生物医学变量(ii（ii）)医疗组状态指标（哮喘与健康）和慢性应激，以及(三)表示后一因素相互作用的乘积项。当出现具有统计意义的交互作用时，根据Aiken和West概述的指南进行解释(36). 在低、中、高水平慢性应激下估计mRNA的相对数量，并分别绘制哮喘儿童和健康儿童的这些值。按照惯例，低慢性应激被定义为低于样本平均值1SD，中等应激被定义为由平均值，高慢性应激被界定为高于平均值1SD。检查急性事件对GR和β的影响2AR表达，进行双向方差分析。医疗组状态（哮喘与健康）和主要生活事件（缺席与现在）作为自变量，潜在的人口统计学和生物医学混淆被建模为协变量。最后，为了检查慢性压力是否会加剧急性事件的影响，我们创建了一个双重暴露变量，定义为过去3个月内发生重大事件，慢性压力评级为中度（即3）或更高。然后进行双向方差分析，以医疗组状态（哮喘与健康）和双重暴露（无与有）为自变量，并将潜在的混淆建模为协变量。对于所有统计分析，α设置为0.05，且双尾t吨进行显著性检验。除非另有说明，否则数值表示为平均值±SD。
致谢
我们感谢Steve Cole博士帮助我们设计和分析实时RT-PCR实验。这项工作得到了迈克尔·史密斯健康研究基金会的支持；加拿大卫生研究院；威廉·T·格兰特基金会和不列颠哥伦比亚省儿童和家庭发展部通过人类早期学习伙伴关系。
缩写
| β2应收账 | β2-肾上腺素能受体 |
| FEV公司1 | 用力呼气量 |
| 希腊 | 糖皮质激素受体。 |
脚注
利益冲突声明：未声明冲突。
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