跳到主要内容
访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
美国国家科学院院刊。2002年6月25日；99(13): 8903–8908.
2002年6月11日在线发布。 数字对象标识：10.1073/pnas.122254599
PMCID公司：24396英镑
PMID：12060709

的角色磅1Peutz–Jegher综合征的致病基因，在胚胎发生和息肉病中

Kou-ichi Jishage公司,*† Jun-ichi Nezu公司,* 川端康介,* 岩田孝文,* 渡边美穗,* 三叶昭夫,‡ 明日香Ose,‡ 清崎县,* 武井嘉介,* 上田信夫,* 上田大也,* 木下美子,‡ 迪特尔·詹妮,§ Miyuki Shimane公司,*和铃木浩史*
作者信息 文章注释 版权和许可信息 PMC免责声明

摘要

Peutz-Jeghers综合征（PJS）是一种主要遗传性人类疾病，其特征是胃肠道错构瘤性息肉病和粘膜皮肤黑色素沉着。LKB1（STK11）丝氨酸/苏氨酸激酶是PJS致病基因的产物，已定位于染色体19p13.3。然而，几项研究得出的结果与LKB1号机组基因突变与PJS。我们构建了一个基因敲除突变磅1确定它是否是PJS的致病基因，并检查其生物学作用磅1基因。磅1−/−老鼠死了子宫内性交后8.5至9.5天。在交配后9.0天，Lkb1型−/−胚胎通常比同龄的同卵双胞胎小，发育迟缓，并且没有经历胚胎翻转。在10至14个月大的婴儿中观察到多发性胃腺瘤息肉磅1+/−老鼠。我们的结果表明磅1是正常胚胎发生所必需的，并且与肿瘤的发展有关。这个磅1+/−小鼠适合研究PJS遗传性胃肿瘤发生的分子机制。

关键词：肿瘤‖胚胎发育

Peutz–Jeghers综合征（PJS）是一种常染色体显性疾病，其特征是嘴唇和口腔粘膜出现黑色素斑点，以及多发性胃肠错构瘤性息肉(1,2). PJS的发病率估计为120000例新生儿中的1例(三). PJS患者出现息肉的频率如下：96%的患者为小肠；结肠，27%；直肠24%；和胃，24%(4). PJS基因座已被定位到染色体19p13.3LKB1号机组丝氨酸/苏氨酸激酶基因（GenBank登录号。U63333型)染色体19p13.3被鉴定为PJS的致病基因(5,6). 然而，一些研究报告发现，PJS与LKB1号机组基因突变(7–9). 最近有报道称磅1在血管内皮生长因子信号通路和胚胎血管形成中发挥重要作用(10). 在本研究中，确定PJS的致病基因并分析其生物学作用磅1，我们创造了缺乏磅1通过靶向突变。我们的人类PJS患者小鼠模型似乎适合用于PJS发病的进一步研究。

材料和方法

小鼠的克隆磅1基因。

鼠标磅1通过与人类杂交筛选预盆栽文库（菌株129/Ola）后，从德国人类基因组项目（柏林）资源中心购买基因组共粒克隆LKB1号机组cDNA作为探针。鉴定出两个阳性克隆（P2436Q3和L07209Q3）。鼠标Lkb1型使用基于小鼠的引物，通过PCR从两个阳性cosmid克隆中扩增基因片段磅1cDNA序列（GenBank登录号。AB015801号). 这些扩增片段直接测序。将小鼠序列与人类基因序列进行比较，发现两个cosmid克隆都缺少外显子1和部分内含子1。因此，对小鼠内含子1（5′-ACTGCAGCTGACCAGCCAGCAGCAGGAT-3′）和5′非翻译区使用引物磅1cDNA（5′-CGAAGAGAGAGAAGAGAGAGAGTGG-3′），我们从正常小鼠基因组DNA中扩增出包含内含子1和外显子1的区域。完整鼠标的顺序磅1通过组合这些序列（小鼠的序列磅1该基因以登录号存入GenBank。AB026255号).

的生成磅1击倒老鼠。

鼠标磅1将含有内含子1（≈7 kb）的cosmid克隆的基因片段亚克隆到DT-a盒B质粒载体(11)，其中包含白喉毒素a基因片段作为阴性选择标记。一段PGK-neo盒式磁带，两侧有两个液氧磷生成序列（5′-ATAACTTCGTAGACATACATTACAGAGTTAT-3′）并插入后面的内含子1的III位点。然后通过插入液氧磷将碎片分割成后面的第8外显子下游的III位点（图。​（图11一). AB2.2-Prime embryonic stem（ES）cells（Lexicon Genetics，The Woodlands，TX）通过电穿孔和线性化靶向载体转染，然后在添加300μg/ml G418（GIBCO/BRL）的培养基中培养。利用引物LOXP3 S2（5′-CCGGTTCACAACTTC-3′）和MPJ37（5′-GTTCCACAGCTTATTATTGCC-3′）对G418抗性克隆进行PCR筛选。3人的存在-液氧磷等位基因千磅来自ES细胞克隆的I-cut基因组DNA先前通过Southern blot分析确认。将ES细胞注入C57BL/6J（日本CLEA，东京）胚泡(12). 为了获得磅13-液氧磷杂合突变体，雄性嵌合体与C57BL/6J雌性进行交配。产生无效突变小鼠，其中Lkb1型包含外显子2–8，环状表达载体pCre-pac(13)将其微量注射到受精的C57BL/6J卵子的原核中磅13-液氧磷杂合突变精子。这些卵被培养，然后转移到ICR（CLEA Japan）假孕受体的输卵管中。通过对尾部细胞的DNA进行PCR，完成了外显子2-8缺失的筛查。使用以下引物对Takara Ex Taq（京都Takara）进行PCR基因分型：MPJ37和MPJ69（5′-CCTTTTGGCTGCTGGGTGACTTCTG-3′）（图。​（图11一). 在94°C下初始热启动2分钟后，运行36个循环（94°C 30秒，68°C 3分钟）。

保存图片、插图等的外部文件。对象名称为pq1322545001.jpg

鼠标磅1基因靶向。(一)鼠标的结构磅1基因（外显子1-10）、靶向载体、靶向和无效等位基因的预测结构，这些都可以通过Cre-loxP介导的重组从靶向等位基因生成。在靶向载体中，新霉素基因（neo第页)两侧有两个液氧磷序列已插入后面的第三个位点位于内含子1，还有一个液氧磷序列已插入另一个后面的第8外显子之后的III位点。指出了用于检测每个等位基因的每个PCR引物和Southern blots探针的定位。限制位点的位置巴姆HI（B）和千磅还指示了I（K）。(b条)PCR分析（PCR，左侧)和Southern blot分析（STN，赖特)ES细胞克隆。在Southern分析中，用千磅用LOXP3 S2和MPJ37引物检测靶基因。来自野生型等位基因（W）和靶向等位基因的条带用箭头表示。(c（c）)Southern blot分析磅13-液氧磷杂合小鼠，由两个独立的ES细胞克隆（克隆256和358）产生。Southern blot分析按照b条. (d日)PCR分析Lkb1型+/−将pCre-pac质粒注射到C57BL/6J受精卵的原核中产生的后代磅13-液氧磷杂合突变精子。使用MPJ69和MPJ37引物检测缺失外显子2-8的空等位基因（N），其两侧为液氧磷序列。

胚胎分析。

在受精后8.5至17.5天（插入日期，0.5dpc），将胚胎从蜕膜和卵黄囊中剥离，取出羊膜，然后在立体显微镜下拍摄胚胎照片。胚胎尾部组织用于DNA分析。将该组织悬浮在50μl细胞裂解缓冲液（0.5%Nonide P-40/800 ng/ml蛋白酶K/1×PCR缓冲液）中，并在55°C下培养2 h。将其在95°C下煮沸15 min，然后在冰上冷冻。然后使用该悬浮液的1μl样品进行PCR分析。使用以下引物，利用Takara Ex Taq，通过PCR进行基因分型：MPJ54（5′-TGAGAGCACCCTGAGGGA-3′）、MPJ56（5′-ACAGAGCTCCAAGGA-3′。​（图11一). 为了检测无效和野生型等位基因，分别用MPJ109/MPJ1107引物（无效等位基因）和MPJ105/MPJ107引物（野生等位基因。在94°C下初始热启动2分钟后，运行36个循环（94°C 30秒，68°C 3分钟）。

胚胎Lkb1的免疫组织化学。

将8.5和9.0 dpc的野生型怀孕小鼠处死，并灌注含有4%多聚甲醛的周期性赖氨酸-甲醛（PLP）固定剂。取出野生型胚胎，在4°C下用PLP固定剂固定6-8小时。然后将样品在丙酮中4°C下脱水16 h。然后取出丙酮，将标本包埋在石蜡中并切片(14). 切片用二甲苯和丙酮浸泡脱蜡，然后进行免疫组织化学染色。用封闭试剂（Block Ace，Snow Brand Milk Production，Tokyo）处理后，用以下抗体之一在4°C下孵育16小时：兔抗Lkb1 P6抗体（1μg/ml）(15)针对小鼠Lkb1的氨基酸末端（氨基酸27-45）附近的肽图谱提出；山羊抗Lkb1 D19（Santa Cruz Biotechnology），对抗小鼠Lkb1氨基酸末端（氨基酸位置未知）附近的肽；或正常兔IgG（1μg/ml，Dako）。通过用生物素标记的山羊抗兔IgG抗体（Vector Laboratories）或兔抗山羊IgG免疫抗体（Ventor Laboratory）孵育切片，然后用辣根过氧化物酶偶联链霉亲和素（Vectors Laboratorys）孵养切片，并与0.05%二氨基联苯胺（Wako Pure Chemical，大阪）反应，观察结合抗体在0.05 M Tris●Cl（pH 7.4）、0.05%叠氮化钠和0.036%H中2O（运行）2用苏木精对切片进行复染。

粪便隐血测试。

使用Shionogi A（正交olidine）和ShionogiB（番石榴）载玻片（大阪Shionogi-）制成的试剂盒进行粪便潜血试验。粪便样本来自磅1+/−将野生型小鼠分散在载玻片上，并按照制造商推荐的方案进行检查。在这项测试中，如果Shionogi A和B试剂盒均呈阳性结果，则认为样本呈阳性。

息肉的组织学分析。

用中和的10%福尔马林溶液固定胃和肠的腺组织，将其包埋在石蜡中，切成4至5μm的切片，用苏木精/伊红或氮杂酸染色，并进行显微镜检查。

分析磅1Northern印迹和逆转录酶-PCR在息肉中的表达。

从野生型和磅1+/−通过使用ISOGEN（Nippon Gene，Toyama，Japan）对小鼠进行研究。接下来，将20μg总RNA在1%琼脂糖凝胶上电泳，并转移到Hybond N+膜。这些膜在含有50%甲酰胺、5×盐-磷酸钠EDTA（0.18 M NaCl/10 mM磷酸盐，pH 7.4/1 mM EDTA）、0.5%十二烷基硫酸钠、5×登哈特溶液、10%硫酸右旋糖酐、250μg/ml变性鲑鱼精子DNA和32P标记鼠标磅1cDNA探针。将膜在2×SSC和0.2%十二烷基硫酸钠中于65℃洗涤30 min，然后在0.5×SSC中洗涤30 min并在65℃洗涤0.2%十二烷基苯磺酸钠。cDNA是由野生型和磅1+/−使用Thermoscript逆转录酶-PCR系统（GIBCO/BRL）对小鼠进行检测。用2.5μM引物MPJ23（5′-AGAAACCAACCAACAGAGACAG-3′）引物对RNA进行引物引物扩增，该引物特异性地引物位于基因组外显子10的非编码区磅1用Takara Ex Taq（Takara）进行扩增，引物对如下：外显子1特异的LKS1（5′-ATGGACGGGCGCGCGCGA-3′）和外显子6特异的MPJ18（5′-GGTGAGTCTCCTCCCAAGTT-3′）；MPJ4（5′-TTCAGGTGACATCTGGT-3′），对外显子5特异，LKAS1（5′-CACTGCTGCTTGCAGGCCGA-3′），对外显子9特异。在94°C下初始热启动2分钟后，运行40个循环（94°C 30秒，60°C 30秒钟，72°C 2分钟）。利用pGEM-T Easy Vector系统（Promega）将PCR产物克隆到质粒中。然后使用Applied Biosystems 377自动DNA测序仪和BigDye终止剂循环测序2.0版就绪反应（Perkin–Elmer）以及T7和SP6引物对其进行测序。对于每个息肉，检查了20多个质粒克隆的序列。

本文中描述的所有实验都是根据楚盖制药公司颁布的《研究动物护理和使用指导原则》进行的。

结果

的生成磅1突变小鼠。

将同源重组ES细胞克隆注射到囊胚中以生成嵌合体。四个ES细胞克隆的嵌合体（图。​（图11b条)用C57BL/6J进行繁殖以生产磅13-液氧磷杂合小鼠。我们获得了两个独立的突变小鼠系，它们有3个-液氧磷序列（图。​（图11c（c）). 对256和358个品系的小鼠进行繁殖，并用于进一步分析。要建立磅1+/−小鼠，其中磅1包括外显子2-8的基因被删除，pCre-pac被注入磅13-液氧磷杂合受精卵。75个注射的卵子被转移到受体体内。12个结果中有3个被确定为Lkb1型+/−Cre-loxP重组导致外显子2–8缺失的小鼠（图。​（图11d日).

缺乏功能性磅1基因导致死亡在乌特罗.

9.5 dpc时，最多磅1−/−胚胎已被吸收（PCR基因分型；数据未显示）。8.5 dpc，直播磅1−/−胚胎仍然可以恢复（表​（表1）。1). 这个磅1−/−与野生型相比，9.0 dpc下恢复的胚胎明显较小，并且表现出发育迟缓（图。​（图2）。2). 这个磅1−/−胚胎没有经历胚胎翻转，仅形成约10对体节，在8.0–8.5 dpc时与野生型胚胎相似（图。​（图22 b条和c（c）). 身体和头部尺寸磅1−/−9.0dpc的胚胎相当于8.5dpc的野生型胚胎。然而，体内体节的大小磅1−/−9.0dpc的胚胎不到8.5dpc野生型胚胎的一半。

表1

杂交后代胚胎和活仔的基因型LKB-1型杂合小鼠

数据处理中心胚胎数量
基因型
被吸收的总计
野生型异质人类
3.5三13三—19
8.561954*34
9.581008†26
10.5三120217
16.5–17.54170728
产后55910—146
*包括四名异性恋者。 
†包括四个同型、一个异型和三个未知基因型。 
保存图片、插图等的外部文件。对象名称为pq1322545002.jpg

的形态学磅1−/−胚胎和野生型胚胎中Lkb1的表达。(a–d)形态Lkb1型−/−胚胎。野生型(一)以及磅1−/−(c（c）和d日)9.0 dpc和野生型(b条)8.5 dpc。的大小磅1−/−胚胎与8.0～8.5dpc的正常胚胎相似。请注意磅1−/−胚胎没有经历胚胎翻转，体节非常小。(e（电子）–克)8.5 dpc时野生型胚胎Lkb1的免疫染色(e（电子）)和9.0 dpc(（f）和克)使用抗Lkb1抗体。心脏(克)和有核胚胎血细胞(（f）)在9.0 dpc下对野生型胚胎进行Lkb1免疫染色。S： 索米特。只有一个有核胚胎血细胞(e（电子）)对8.5 dpc的野生型胚胎进行Lkb1免疫染色。（放大倍数：一–d日, ×40;e（电子）和（f）, ×400;克, ×100.)

Lkb1蛋白在胚胎中的表达模式。

进行免疫组织化学分析以鉴定表达Lkb1的细胞。在9.0 dpc的野生型胚胎中，有核胚胎血细胞结合抗Lkb1 P6抗体和抗Lkb1D19抗体（图。​（图22（f）)和心脏组织结合的抗Lkb1 D19抗体（图。​（图22克). 然而，在8.5 dpc结合的抗Lkb1 P6抗体下，野生型胚胎中的胚胎血细胞很少（图。​（图22e（电子）). 当使用正常IgG代替这些抗体时，9.0 dpc的野生型胚胎中没有细胞被染色（数据未显示）。

磅1+/−小鼠出现胃肠道息肉。

在4-14个月龄的野生型小鼠中未检测到潜血。然而，36%和82%的磅1+/−4个月龄和14个月龄的小鼠隐血检测呈阳性（表​（表2）。2). 肉眼检查显示10个月大（但4个月大）小鼠的息肉聚集物隐血阳性（图。​（图3三一). 这些息肉聚集体的大小几乎与14个月大的胃的大小相似Lkb1型突变小鼠（图。​（图3三 b条和c（c）). 大多数息肉位于腺胃幽门窦和十二指肠的交界处。发现垂死或死亡后立即，磅1+/−与充满食物的腺胃相比，老鼠的肠道中含有食物（图。​（图3三c（c）). 大多数磅1+/−小鼠只有腺胃息肉；12人中只有一人磅1+/−小鼠的小肠和腺胃都有息肉。检查的其他器官（包括大肠）未发现息肉（表​（表3）。三). 14个月大的脾脏磅1+/−小鼠息肉出血后体积增大。这些小鼠在幽门处也表现出息肉样肿瘤生长到胃腔中（图。​（图3三d日). 息肉的核心由带有结缔组织的粘膜肌层的树状分支形成（图。​（图3三e（电子）). 息肉由两种类型的细胞组成：类似表面粘液细胞的细胞和类似幽门腺的细胞。这些细胞的相对比例不同，但所有息肉都分化成类似幽门腺的结构。息肉表面覆盖着类似粘液细胞的细胞。这些细胞深入粘膜，形成类似胃凹坑的腺小管（图。​（图3三（f）); 所有这些细胞都是柱状的，有些细胞肥大，呈高柱状外观（图。​（图3三克). 在每个息肉相对较深的区域，类似幽门腺的细胞，核大，细胞质苍白，形成腺腔。在息肉的某些区域可以看到类似粘液细胞和类似幽门腺细胞的表面细胞的连续性（图。​（图3三（f）). 与其他细胞相比，形成腺结构的细胞表现出更少的核密度和更少的核异型性，并表现出单层排列（图。​（图3三克). 没有多层生长，但在息肉的某些部位核密度较高，在一些息肉细胞中也观察到核异型性和有丝分裂增加（图。​（图3三小时). 与幽门腺相似的细胞很少在靠近基底膜的细胞质中含有嗜酸性物质（图。​（图3三我). 囊性扩张主要由类似幽门腺的细胞排列。息肉表面有水肿。间质中偶尔可见纤维化和单核细胞浸润。粘膜下层或肌层无广泛坏死或增殖细胞浸润。胃幽门内发现的息肉样肿瘤被诊断为腺瘤性息肉，主要基于以下特征：分化良好的腺胃细胞增殖呈息肉样，异型性很小，粘膜下层或肌层无明确浸润。

表2

年隐血试验结果LKB1号机组突变小鼠

年龄基因型小鼠数量
受试小鼠总数积极的否定
4个月异质1147
野生型606
14个月异质1092
野生型10010
保存图片、插图等的外部文件。对象名称为pq1322545003.jpg

肉眼和组织学外观磅1+/−老鼠。(一–c（c）)息肉的大体外观磅1+/−老鼠。幽门窦（PA）和十二指肠（D）交界处息肉（P）的大体外观。幽灵（Pylorus）(一)10个月(b条)14个月。(c（c）)息肉的大小在14个月大时几乎与腺胃的大小相等。注意十二指肠和小肠不含食物。S： 腺胃；P： 息肉。(d日–我)14个月时对息肉进行组织学检查。(d日和（f）–i）苏木精和伊红染色。(e（电子）)阿赞染色。(d日)息肉低倍部分伸入胃腔。(e（电子）)息肉的核心由带有结缔组织的粘膜肌层的树状分支形成（箭头所示）。(（f）)息肉由两种细胞组成：表面粘液上皮样细胞（SC）和幽门腺样细胞（PC），并形成腺小管样胃小凹（LGP）。(克)柱状或高柱状的表面粘液上皮样细胞（SC）。幽门腺样细胞有大的细胞核和苍白的细胞质（PC）。(小时)在一定比例的增殖细胞中观察到高核密度、核异型性和有丝分裂（箭头）。(我)幽门腺样细胞的细胞质中也含有嗜酸性物质。（放大倍数：一–c（c）, ×2;d日, ×5;e（电子）, ×20;（f）, ×100;克–我, ×200).

表3

息肉的位置LKB1号机组突变小鼠

基因型小鼠数量
总计息肉的位置
胃肠其他器官
野生型6000
异质121210

这些小鼠在11–20个月大时被杀死并观察。 

磅1胃息肉中的表达。

野生型磅1该基因在胃息肉中表达磅1+/−小鼠，其模式与磅1在对照组小鼠的腺胃细胞中表达，但信号强度约为对照值的一半（图。​（图44一). 突变型和野生型磅1在磅1+/−鼠标（图。​（图44b条). 克隆到质粒中的逆转录酶-PCR产物的测序表明，来自两个基因的息肉中的野生型mRNA磅1+/−小鼠没有任何突变（数据未显示）。

保存图片、插图等的外部文件。对象名为pq1322545004.jpg

Northern blot和逆转录酶-PCR分析磅1息肉。(一)从18个月大的婴儿中分离出1-6:20μg总RNA磅1+/−和野生型小鼠。通道1和通道2：野生型腺胃（wi）。泳道3和4：磅1+/−（他）。通道5和6：胃息肉磅1+/−通道3和5，以及通道4和6：来自同一只小鼠的RNA。老鼠磅1cDNA作为探针。重制β-肌动蛋白印迹，作为负荷控制。(b条)通道1-6：引物对1扩增，LKS1位于外显子1，MPJ18位于外显子6。7-12道：引物对2扩增，MPJ4位于第5外显子，LKAS1位于第9外显子。泳道13-18：通过位于外显子1的引物对3 LKS1和位于外显子9的LKAS1进行扩增。泳道1、2、7、8、13和14：野生型腺胃（wi）；通道3、4、9、10、15和16：胃腺的正常部分磅1+/−（他）；车道5、6、11、12、17和18：胃息肉磅1+/−注意，在杂合小鼠中，来自靶向等位基因（删除的外显子2-8）的突变mRNAs（约500 bp）在15–18道中表达。

讨论

在本研究中，我们证明了LKB1号机组是PJS的致病基因，如在所有患者中发现息肉的事实所示磅1+/−老鼠。以前的研究结果反对LKB1号机组PJS中的基因突变可能是突变分析方法的差异、位点异质性、表观遗传失活LKB1号机组(16)或第二个基因参与诱导PJS。

息肉的组织学特征磅1+/−小鼠与人类PJS中发现的息肉相似。这些包括上皮错位，存在许多外观正常的细胞，罕见或不存在核异型性，缺乏淋巴管浸润，提示早期腺瘤起源(17,18). 在人类PJS中，息肉最常见的部位是小肠，其次是大肠和胃(19,20). 然而，目前磅1+/−小鼠，息肉主要位于腺胃。小鼠和人类在腺瘤性息肉病大肠杆菌（APC）突变方面观察到肿瘤优先部位的差异(21). 家族性腺瘤性息肉病患者中息肉最多空气污染指数突变和息肉亚太区突变小鼠分别出现在大肠和小肠中。这种差异可能是由饮食的差异和/或修饰基因的作用引起的。在本研究中，没有发现胃息肉从错构瘤到腺瘤再到癌变的组织学证据磅1+/−直到它们至少14个月大。在一对患有PJS的人类双胞胎的案例研究中，其中一对双胞胎20岁时死于肠梗阻，另一对52岁时死于癌症(1,22). PJS患者的早期表现包括多发错构瘤性息肉(1,2). 晚年，PJS患者的癌症发病率增加(23,24).磅1+/−由于肠梗阻和/或息肉出血，小鼠可能在癌变和转移发生之前死亡。

先前的研究表明，PJS患者息肉的LKB1免疫染色呈阴性(25)我们使用从全息肉中分离的mRNA评估杂合性丢失（LOH）磅1+/−老鼠。然而，我们的研究结果并不表明LOH是息肉形成的原因Lkb1型+/−老鼠。关于突变体mRNA表达的研究结果磅1等位基因表明，显性负性机制可能直接参与息肉的形成。因为突变蛋白可能至少有一个96-aa蛋白（外显子1）。或者，因为磅1mRNA在磅1+/−小鼠约为野生型的一半，单倍体功能不全(26)可能影响息肉的形成。然而，如前所述，含有野生型等位基因的正常细胞污染息肉可能会干扰LOH评估(27,28).

磅1−/−胚胎在8.5到9.5dpc之间死亡。发育性逮捕磅1−/−由于死亡突变胚胎的大小和发育与8.0～8.5dpc的正常胚胎相对应，胚胎发生在10对染色体期左右。磅1−/−胚胎表现出畸形体节，并且没有经历胚胎翻转。这些发现表明磅1最近有报道称，基因在胚胎发育中起着重要作用(10). 另一项研究发现磅1mRNA在小鼠胚胎发生早期（7-11dpc）普遍表达(29). 然而，在本研究中，只有有核的胚胎血细胞和心脏组织在9.0dpc时结合了Lkb1抗体。这种差异可能是由Lkb1蛋白表达水平的变化引起的。在8.5和9.0 dpc之间，有核胚胎血细胞中Lkb1蛋白表达的显著变化可能与磅1−/−胚胎在9.0dpc左右。有趣的是，最近的研究报告称，在9.0dpc左右，小鼠胚胎的卵黄囊和主动脉旁内脏开始出现多能干造血细胞(30). 此外，磅1-缺陷小鼠表现出血管异常和血管内皮生长因子失调，并在妊娠中期死亡(10). 总之，这些发现表明，9.0 dpc时有核胚胎血细胞中Lkb1的表达对于多能干造血生长和/或分化至关重要。

我们的磅1+/−小鼠模型似乎是研究PJS的有用工具，可能有助于设计这种疾病的新疗法。

最近，三好等。(31)据报道，在Lkb1型杂合敲除小鼠。三好市的结果等.的论文支持我们关于Lkb1缺陷参与胃肠道肿瘤形成的结果。

致谢

我们感谢S.Uchida提供了出色的技术援助，M.Masutai、K.Ueno和T.Watanabe提供了有益的意见，以及T.Yagi提供了pCre-pac质粒。

缩写

PJS公司Peutz–Jeghers综合征
锿胚胎干
数据处理中心性交后天数

工具书类

1Jeghers H、McKusick V A、Karz K H。N英格兰医学杂志。1949;241:992–1005.[公共医学][谷歌学者]
2佩茨J·L。内德·蒂德施尔·杰内斯科德（Ned Tijdschr Geneeskd）。1921;10:134–146. [谷歌学者]
三。林德·N·M、格林·M·H。美国国家癌症研究所。1998;90:1039–1071.[公共医学][谷歌学者]
4McGarrity T J、Kulin H E、Zaino R J。美国胃肠病杂志。2000;95:596–604.[公共医学][谷歌学者]
5Jenne D E、Reimann H、Nezu J、Friedel W、Loff S、Jeschke R、Muller O、Back W、Zimmer M。Nat Genet。1998;18:38–43.[公共医学][谷歌学者]
6Hemminki A、Markie D、Tomlinson I、Avizienyte E、Roth S、Loukola A、Bignell G、Warren W、Aminoff M、Hoglund P等。自然（伦敦）1998;391:184–187.[公共医学][谷歌学者]
7.Olschwang S、Boissonm C、Thomas G。医学遗传学杂志。2001;38:356–360. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
8Olschwang S、Markie D、Seal S、Neale K、Phillips R、Cottrell S、Ellis I、Hodgson S、Zauber P、Spigelman A等。医学遗传学杂志。1998;35:42–44. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
9Launonen V、Avizienyte E、Loukola A、Laiho P、Salovaara R、Jarvinen H、Mecklin J P、Oku A、Shimane M、Kim H C等。癌症研究。2000;60:546–548.[公共医学][谷歌学者]
10Ylikorkala A、Rossi D J、Korsisaari N、Luukko K、Alitalo K、Henkemeyer M、Makela T P。科学。2001;293:1323–1326.[公共医学][谷歌学者]
11Yagi T、Nada S、Watanabe N、Tamemoto H、Kohmura N、Ikawa Y、Aizawa S。分析生物化学。1993;214:77–86.[公共医学][谷歌学者]
12.Kawase Y、Iwata T、Watanabe M、Kamada N、Ueda O、Suzuki H。当代主题实验室动画科学。2001;40:31–34.[公共医学][谷歌学者]
13Taniguchi M、Sanbo M、Watanabe S、Naruse I、Mishina M、Yagi T。核酸研究。1998;26:679–680. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
14佐藤Y、木开K、渡边S、后藤M、下坂Y。《美国病理学杂志》。1986;125:431–435. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
15Nezu J、Oku A、Shimane M。生物化学与生物物理研究委员会。1999;261:750–755.[公共医学][谷歌学者]
16Esteller M、Avizienyte E、Corn P G、Lothe R A、Baylin S B、Aaltonen L A、Herman J G。致癌物。2000;19:164–168.[公共医学][谷歌学者]
17Shepherd N A、Bussey H J、Jass J R。美国外科病理学杂志。1987;11:743–749.[公共医学][谷歌学者]
18Estrada R、Spjut H J。美国外科病理学杂志。1983;7:747–754.[公共医学][谷歌学者]
19Utsunomiya J、Gocho H、Miyanaga T、Hamaguchi E、Kashimure A。约翰·霍普金斯医学杂志。1975;136:71–82.[公共医学][谷歌学者]
20Burdick D，Prior J T。癌症。1982;50:2139–2146.[公共医学][谷歌学者]
21Shibata H、Toyama K、Shioya H、Ito M、Hirota M、Hasegawa S、Matsumoto H、Takano H、Akiyama T、Toyoshima K等。科学。1997;278:120–123.[公共医学][谷歌学者]
22韦伯·F·P。Q医学杂志。1949;12:404–408. [谷歌学者]
23Giardiello F M、Welsh S B、Hamilton S R、Offerhaus G J、Gittelsohn A M、Booker S V、Krush A J、Yardley J H、Luk G D。N英格兰医学杂志。1987;316:1511–1514.[公共医学][谷歌学者]
24Spigelman A D、Murday V、Phillip R K。内脏。1989;30:1588–1590. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
25.Karuman P、Gozani O、Odze R D、Zhou X C、Zhu H、Shaw R、Brien T P、Bozzuto C D、Ooi D、Cantley L C等。分子细胞。2001;7:1307–1319.[公共医学][谷歌学者]
26Quon K C，Berns A。基因发育。2001;15:2917–2921. [谷歌学者]
27Hemminki A、Tomlinson I、Markie D、Jarvinen H、Sistonen P、Bjorkqvist A M、Knuutila S、Salovaara R、Bodmer W、Shibata D等。Nat Genet。1997;15:87–90.[公共医学][谷歌学者]
28大岛M、大岛H、北川K、小林M、板仓C、武藤M。美国国家科学院程序。1995;92:4482–4486. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
29Luukko K、Ylikorala A、Tiainen M、Makela T P。机械开发。1999;83:187–190.[公共医学][谷歌学者]
30Godin I、Dieterlen-Lievere F、Cumuno A。美国国家科学院程序。1995;92:773–777. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
31Miyoshi H、Nakau M、Ishikawa T、Seldin M F、Oshima M、Taketo M M。癌症研究。2002;62:2261–2266.[公共医学][谷歌学者]
文章来自美国国家科学院院刊由以下人员提供美国国家科学院