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生物化学杂志。2003年3月1日；370（第2部分）：567–578。
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两个关键谷氨酸残基突变对人羧肽酶M活性和稳定性的影响及其糖基磷脂酰肌醇锚定信号的表征。

富隆滩,斯科特·巴尔西蒂斯,朱迪·K·布莱克,安德烈亚·巴洛赫（Andrea Blöchl）,纪方茂,罗伯特·P·贝克尔,大卫·沙赫特、和Randal A Skidgel公司
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摘要

人羧肽酶（CP）M在杆状病毒感染的昆虫细胞中以糖基磷脂酰肌醇锚定的形式表达，而截短的形式，缺乏糖基磷脂酰肌醇锚定的假定信号序列，以高水平分泌到培养基中。这两种形式的分子量（50kDa）均低于天然胎盘CPM（62kDa。通过将Ser（406）突变为Ala、Thr或Pro并在HEK-293和COS-7细胞中表达来研究预测的糖基磷脂酰肌醇锚定附着位点。野生型和S406A和S406T突变体在质膜上以糖基磷脂酰肌醇锚定形式表达，但S406P突变体没有表达，并且保留在核周位置。通过定点突变研究Glu（260）和Glu（264）在CPM中的作用。Glu（260）突变为Gln对动力学参数的影响最小，但降低了热稳定性，而Ala突变使k（cat）/k（m）降低了104倍，进一步降低了稳定性。相反，Glu（264）突变为Gln导致活性降低10000倍，但该酶仍与对氨基苯甲酰精氨酸-脑葡萄糖结合，并对胰蛋白酶处理产生抗性，表明该蛋白折叠正确。这些结果表明Glu（264）是关键的催化谷氨酸，Glu（260）可能稳定活性位点的构象。

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选定的引用

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文章来自生物化学杂志由以下人员提供生物化学学会