3’-非翻译区参与确定血管紧张素II受体与G蛋白偶联特异性的证据。

许多基因的mRNA 3'-非翻译区（3'-UTR）已被确定为mRNA转录本身和翻译产物的重要调节器。此前，我们证明，稳定表达血管紧张素受体亚型（AT（1A））的中国仓鼠卵巢K1细胞（含和不含3'-UTR）在AT（1A的mRNA含量及其与细胞内信号通路的耦合方面存在差异。此外，使用AT（1A）3'-UTR探针进行的RNA迁移率测定和UV交联研究发现，中国仓鼠卵巢K1细胞中存在一个55kDa的主要mRNA-结合蛋白复合物。在本研究中，我们通过共同表达AT（1A）3'-UTR序列“诱饵”来与天然受体3'-UCR竞争其mRNA-结合蛋白，从而确定了大鼠肝上皮（WB）细胞系中天然AT（1A”受体3'-UTR的功能意义。使用AT（1A）受体和[（125）I]血管紧张素II（AngII）结合研究的特异性引物进行PCR分析表明，WB（B（max）=2.7 pmol/mg蛋白质，K（d）=0.56 nM）中天然AT（1A”受体的表达。Northern-blot分析显示，3'-UTR去甲氧基表达细胞中的天然受体mRNA表达显著增加，证实了3'-UTR在mRNA失稳中的作用。与溶媒对照组相比，AngII分别通过[（3）H]胸苷和[（3。胸腺嘧啶核苷和亮氨酸的激活与细胞数量的显著增加（细胞增生）相关。在这些细胞中，AngII通过AT（1）受体与G蛋白αi偶联来刺激GTPase活性。我们还指出，AT（1A）受体与G-蛋白αi的功能偶联是AngII介导的WB细胞增生的一个重要机制，它通过特异性阻断G蛋白αⅠ的活化。与野生型细胞相比，3'-UTR“诱饵”的稳定表达产生AngII刺激的蛋白质合成和细胞肥大，[（3）H]亮氨酸掺入显著增加，[（3H]胸腺嘧啶掺入和细胞数量没有增加。此外，使用特异性G蛋白α抗体进行的[（125）I]AngII交联和免疫沉淀研究表明，在野生型细胞中，AT（1A）受体与G蛋白αI偶联，而在表达3'-UTR“诱饵”的细胞中，AT1A受体与G蛋白质αq偶联。这些发现表明，3'-UTR介导的受体功能变化可能部分通过受体从G蛋白αi转换为G蛋白αq偶联来介导。我们的结果表明，3'-UTR介导的AT（1A）受体转录后修饰对调节组织特异性受体功能至关重要。