美国国家科学院院刊。2005年7月5日；102(27): 9613–9618.
c-Myc通过端粒和间期核内染色体重塑诱导染色体重排
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谢里夫·路易斯
*加拿大曼尼托巴大学马尼托巴细胞生物学研究所，675 McDermot Avenue，Winnipeg，MB，R3E 0V9；‡荷兰代尔夫特理工大学定量成像组应用科学学院成像科学与技术系，2628 CJ Delft；§耳鼻咽喉头颈外科，健康科学中心，GB421-820 Sherbrook Street，Winnipeg，MB，Canada R3A 1R9；∥德国癌症研究中心皮肤致癌遗传学部，Im Neuenheimer Feld 280，69120 Heidelberg，Germany；**法国贝桑松25030 Jean Minjoz大学医院IETG实验室血液科；和††法国雷恩35033 Pontchaillou大学医院血液科，EA 3889，IFR140 GFAS
巴特·弗莫伦
*加拿大曼尼托巴大学马尼托巴细胞生物学研究所，675 McDermot Avenue，Winnipeg，MB，R3E 0V9；‡荷兰代尔夫特理工大学定量成像组应用科学学院成像科学与技术系，2628 CJ Delft；§耳鼻咽喉头颈外科，健康科学中心，GB421-820 Sherbrook Street，Winnipeg，MB，Canada R3A 1R9；∥德国癌症研究中心皮肤致癌遗传学部，Im Neuenheimer Feld 280，69120 Heidelberg，Germany；**法国贝桑松25030 Jean Minjoz大学医院IETG实验室血液科；和††法国雷恩35033 Pontchaillou大学医院血液科，EA 3889，IFR140 GFAS
尤瓦尔·加里尼
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伊恩·T·杨
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阿曼达·古菲
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塞尔达·利希滕斯泰金
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法比安·库特勒
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Tony C.Y.Chuang先生
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莎拉雷·莫希尔
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维吉尼·穆吉
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艾丽斯·Y.C.庄
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保罗·唐纳德·克尔
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蒂埃里·费斯特
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佩特拉·布坎普
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萨宾·迈
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*加拿大曼尼托巴大学马尼托巴细胞生物学研究所，675 McDermot Avenue，Winnipeg，MB，R3E 0V9；‡荷兰代尔夫特理工大学定量成像组应用科学学院成像科学与技术系，2628 CJ Delft；§耳鼻咽喉头颈外科，健康科学中心，GB421-820 Sherbrook Street，Winnipeg，MB，Canada R3A 1R9；∥德国癌症研究中心皮肤致癌遗传学部，Im Neuenheimer Feld 280，69120 Heidelberg，Germany；**法国贝桑松25030 Jean Minjoz大学医院IETG实验室血液科；和††法国雷恩35033 Pontchaillou大学医院血液科，EA 3889，IFR140 GFAS
†S.F.L.、B.J.V.和Y.G.为这项工作做出了同等贡献。
¶现住址：马里兰州巴尔的摩约翰霍普金斯大学医学院头颈部耳鼻咽喉头颈外科，邮编21205。
编辑：George Klein，瑞典斯德哥尔摩卡罗林斯卡学院
2004年10月11日收到；2005年5月9日接受。
- 补充资料
支持信息
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摘要
在之前的工作中，我们发现正常细胞的端粒以非重叠和细胞周期依赖的方式组织在间期细胞核的3D空间内。在肿瘤细胞核中，端粒紧密结合，形成不同数量和大小的聚集物，这种顺序被扭曲。这里我们显示c-Myc过度表达诱导间期细胞核中的端粒聚集。与c-Myc解除调控的持续时间成正比，我们观察到间期细胞核中有三到五个端粒聚集形成周期。这些周期反映了由染色体端到端的端粒融合启动的断裂-桥接融合周期的开始和传播。继最初的染色体断裂之后，新的融合随之发生，断裂-桥-融合循环继续进行。在此期间，会产生非互惠易位。因此，端粒组织的c-Myc依赖性重塑先于基因组不稳定的发生，随后导致染色体重排。我们的发现表明c-Myc具有通过端粒融合对染色体进行结构修饰的能力，从而重组遗传信息。
关键词：基因组不稳定性，3D细胞核，断裂桥融合
多种改变伴随着肿瘤的发生和发展，导致基因表达的调节和基因组的不稳定性。这些相互关联的变化发生在拥有改变了的3D组织的核心中(1–三). 与这一概念相一致，最近的报告表明，肿瘤相关的染色体组织改变了3D细胞核(三–8). 然而，导致端粒和染色体结构改变的机制仍不清楚。
我们最近报道，正常间期细胞核有一个独特的3D端粒组织，它依赖于细胞周期(9,10). 端粒以非重叠方式组织，并在晚G期排列成中央端粒盘2细胞周期的阶段(9). 相反，肿瘤细胞显示出端粒的异常组织，可以在细胞核中客观地测量端粒的结构，显示出各种复杂程度和大小的端粒聚集体(9).
染色体易位、突变或扩增导致的c-Myc的组成性表达有助于许多癌症的发展和进展(11,12). c-Myc放松调控直接促进基因组不稳定性(13)导致局部特异性和核型不稳定(14–18). 此外，c-Myc诱导非法复制启动(19,20)，DNA断裂(21)，DNA修复的改变(22,23)和低水平的点突变(24,25). c-Myc短暂实验性激活后，c-Myc对基因组不稳定性的影响是可逆的(15). 然而，c-Myc在构成性放松管制后继续产生不稳定(16).体内c-Myc放松调控直接启动和促进肿瘤发生(26–30). 当c-Myc放松管制被废除时，体内如果没有发生额外的突变，肿瘤的发生是可逆的(29–34).
由于c-Myc放松调控导致下游基因改变的复杂性，我们研究了c-Myc是否影响哺乳动物间期细胞核的3D组织，以及这种重塑是否对基因组稳定性产生影响。我们发现c-Myc的放松调控会导致端粒和染色体的3D核组织重塑，从而创造引发基因组不稳定的拓扑条件。
材料和方法
细胞和条件Myc激活。已经描述了Ba/F3的培养条件(35)和PreB(36)单元格。浆细胞瘤细胞系MOPC460D是J.Mushinski（贝塞斯达国立卫生研究院）赠送的礼物。用台盼蓝通过血细胞仪计数测定细胞活力。从BALB/c小鼠中分离出原代小鼠浆细胞瘤DCPC21(37).v-abl病毒/myc公司-诱导浆细胞瘤(38)收集BALB/c小鼠的初级淋巴细胞（中央动物护理方案02-039）。
激活MycER(39)在Ba/F3或PreB细胞中，105每毫升细胞用100 nM 4-羟基三苯氧胺（4HT）处理。在4HT处理前24小时分裂细胞。非4HT处理的对照细胞在乙醇中培养，乙醇用于溶解4HT(25,26,39). 进行了两种不同的MycER活化方案。首先，在培养基中单独添加4HT直到其生物效应减弱后，对c-Myc诱导的3D端粒组织变化进行分析(40–42). 在10天内，每24小时检查一次细胞核。每6小时进行一次第二次疗程，持续120小时(). 为了对Myc活化进行时间依赖性分析，给予4HT 2或12小时，然后去除4HT。或者，每12小时添加一次4HT，或给药一次，但留在培养基中。荧光免疫组化法检测MycER的活化。
MycER激活方案。4HT在细胞系中持续15–24小时的作用(40–42)，如虚线所示。在120小时的时间段内，每6小时采集一次细胞。同时处理模拟处理的对照细胞。
免疫组织化学（IHC）。如参考文献所述，对Myc蛋白进行荧光IHC。43使用多克隆抗c-Myc抗体（N262；Santa Cruz Biotechnology）和山羊抗兔IgG FITC抗体，每种抗体的稀释度为1:100。使用蔡司Axiophot 2显微镜进行分析。图像由库克CCD SensiCam相机采集。
细胞死亡。两名独立观察员对对照细胞和MycER激活细胞的凋亡体进行了评估，他们在存在或不存在MycER活化的情况下，对每个时间点300个DAPI染色的细胞核进行了评分。
端粒FISH。收集Ba/F3、PreB和浆细胞瘤细胞（200×克然后在含有3.7%甲醛（Fluka）的PBS中重新悬浮并培养20分钟。然后，执行端粒FISH方案(9,44)使用Cy3-或FITC-标记的PNA探针（DAKO）。进行了三个独立的实验。每个时间点至少检查30个细胞核和20个中期。使用Zeiss Axioplan 2和冷却AxioCam HR B&W、DAPI、Cy3或FITC过滤器，结合Planapo 63x/1.4油物镜，对端粒FISH后中期进行成像。图像是通过使用公理视觉3.1（蔡司）在多通道模式下。由于存在多个变量，因此使用了一般线性建模程序。为了测试不同组之间的平均聚集值，对数据的正态性和稳健性进行了双向方差分析测试。有关所有测试的详细信息，请参见支持材料和方法，发布为支持信息在PNAS网站上。
3D图像采集。每个时间点至少分析30个细胞核。公理视觉3.1采用了反褶积模块和渲染模块。对于每个荧光色素，3D图像由100个图像组成，沿z（z）和107 nmxy公司方向。使用了约束迭代算法选项(45).
端粒的3D图像分析。端粒测量用电视节目(9,46). 通过为端粒选择一个简单的阈值，可以找到一个二值图像。在此基础上，计算每个物体的强度重心，得到一组坐标(x、 y，z)用屏幕上的十字表示。计算每个端粒的积分强度是因为它与端粒长度成正比(47). 积分区域是通过在找到的坐标上增加一个球体来确定的。在生长的每一步（迭代）之后，这个体积下的总和（端粒）都会减去它周围的总和（背景水平）。当球体的生长过程没有导致积分强度增加时，算法停止，并通过自动背景校正获得端粒的积分强度。
染色体作图和相间核中染色体重叠的测量。如参考文献所述进行染色体涂布。48通过使用来自Applied Spectral Imaging（Vista，CA）的小鼠染色体5（Cy3）、13（FITC）、7（Cy3）、10（FITC）和17（FITC）的涂料。如上所述，对着色细胞核进行3D图像采集。染色体重叠的测量是在3D图像采集和约束迭代去卷积后进行的，如下所示：(我)基于DAPI复染图像，我们确定了核体积的3D边界。忽略了该卷之外的数据。(ii（ii）)对于每一条染色体，我们确定了一个强度阈值，并且只涉及高于阈值的体素，这些体素属于特定的染色体。测量每个染色体对所占的总体积(V（V）1和V（V）2). (三)测量两对染色体所占的体积，V（V）o个。将此值除以V（V）1和依据V（V）2，测量相对于每个染色体对总体积的重叠水平，V（V）0/V（V）1,V（V）0/V（V）2（有关详细信息，请参见图8，该图发布为支持信息在PNAS网站上）。
光谱核型分析（SKY）。使用SKY系统执行小鼠SKY（应用光谱成像）(37). 每个时间点检查20个中期。在MycER激活后测定染色体重排的显著值。通过双向方差分析比较对照细胞和Myc活化细胞的平均总染色体数和每条染色体的数目。此外，在120小时的实验期间，对易位、断裂和融合的发生进行了统计分析。对<0.05的值被认为是显著的。只使用了频率程序，然后进行了Fisher精确测试。这个对总体研究值<0.0001。
支持信息。有关更多信息，请参见图9-12、电影1-3和表2-4，发布为支持信息在PNAS网站上。
结果
c-Myc激活前端粒的三维组织。我们研究了c-Myc的放松调控是否影响间期细胞核中端粒的3D组织。为此，我们分析了两个独立的永生化小鼠B淋巴细胞系Ba/F3中条件c-Myc表达的影响(35)和PreB(36)，稳定转染MycER(39). 对于这两种细胞系，我们首先使用原代BALB/c B淋巴细胞作为对照，评估了非MycER活化细胞细胞核中端粒的三维结构。与我们之前的研究一致(9)三维成像显示，正常原发BALB/c B细胞核的端粒显示出不重叠的端粒位置(). 在没有MycER激活的情况下，PreB和Ba/F3间期细胞核也显示出不重叠的端粒位置(）。因此，上述细胞系适合于研究条件c-Myc激活对3D端粒组织的影响。
初级和永生化B淋巴细胞间期细胞核中的端粒组织，端粒位置无重叠。(一)原代B细胞核。(b条)近二倍体PreB细胞的细胞核。(c（c）)四倍体Ba/F3细胞的细胞核。端粒显示为红色；细胞核为蓝色。3DF，三维正视图；3DS、3D侧视图。
三维端粒组织的c-Myc依赖性破坏：相间核中端粒聚集物（TA）的形成。接下来我们分析了条件c-Myc表达对端粒3D组织的影响。用4HT短暂激活MycER后，在PreB和Ba/F3细胞中均观察到核c-Myc信号（图9b条和d日). 在非4HT处理的对照细胞中，在细胞质中发现MycER（图9一和c（c）; 另见参考。39).
为了确定c-Myc放松调控是否影响端粒的3D组织，我们进行了时间过程实验。在第一组实验中，在单次4HT处理后，在PreB和Ba/F3细胞中研究了c-Myc放松调节和3D端粒组织。在c-Myc解除调控后的第0、24、48、72和96小时以及第10天对细胞核进行分析，并与模拟处理的对照细胞的细胞核进行比较。在这两种细胞系中，对端粒的3D核组织的分析表明，c-Myc放松调控可诱导TA的形成。TA是在簇中发现的端粒群，因此在间期核中紧密相关。这种3D端粒组织与非MycER激活的PreB、Ba/F3细胞和小鼠原代淋巴细胞的正常3D组织不同().说明了在MycER激活的PreB和Ba/F3细胞的间期细胞核中存在TA(）。虽然以前在肿瘤细胞核中观察到过这种TA(9)，它们在条件c-Myc表达细胞中的存在是以前未发现的。
4HT处理后72小时，c-Myc放松调控可诱导PreB和Ba/F3细胞间期细胞核内的TA。(一)模拟处理的PreB细胞显示不重叠的端粒（红色）。(b条)带有TA的MycER激活的PreB细胞（绿色箭头）。(c（c）)模拟处理的Ba/F3细胞显示不重叠的端粒。(d日)MycER激活的Ba/F3细胞显示TA的形成（绿色箭头）。
c-Myc诱导相间核内TA循环。在随后的实验中，我们更密切地研究了c-Myc解除调控与TA形成之间的时间关系。为此，在120小时内每6小时采集一次细胞。我们还改变了条件c-Myc表达的持续时间()，证实核c-Myc染色如上（图9和11）。接下来，确定端粒的3D组织(). 此时，我们只关注近二倍体PreB细胞(49). 我们的阳性对照是构成性过度表达c-Myc的细胞[小鼠浆细胞瘤(27)和浆细胞瘤线()]. 阴性对照组为模拟处理的PreB细胞().
c-Myc诱导的端粒聚集体呈周期性出现。(一)条件c-Myc放松管制导致TA形成。(澳大利亚)阴性对照：非Myc-deregulated PreB细胞核，3D端粒核位置不重叠。(英国广播公司–bd公司)在TA形成的任何给定时间点，在条件c-Myc表达后都会出现不同大小和数量的TA。端粒显示为绿色；TA用红色箭头表示。(Ae公司)阳性对照：浆细胞瘤细胞系，MOPC460D，由于T12导致组成型c-Myc失调；15显示TA。原发性浆细胞瘤细胞也获得了类似的结果（数据未显示）。(B类)c-Myc诱导TA循环。在120小时内，TA的增加倍数超过对照水平。在此期间，c-Myc在不同时间段内上调（参见). 黑色，4HT持续2小时并去除；红色，4HT给药12小时后取出；绿色，4HT添加一次，未移除；蓝色，在0、12和24小时添加4HT；灰色，控制单元。连续激活MycER后观察到的最高TA形成水平和单个TA峰值分别用箭头和箭头表示。误差条表示二项分布的95%置信区间。
这一时间过程证实了c-Myc放松管制可诱导TA。典型图像显示，每个MycER激活的PreB细胞核中的TA大小和数量不同(，红色箭头）。在30、48、72和96小时时观察到高诱导水平的TA，96小时后下降(，箭头）。TA形成的最高水平在下文中称为TA峰值。在120小时以上进行的6小时时间过程表明，TA以c-Myc依赖的方式形成，并表现出周期性外观(). TA周期的数量与c-Myc放松的持续时间直接相关。例如，2小时的Myc活化诱导了三个这样的周期，而12小时导致了五个周期(、黑线和红线）。4HT，留在培养基中，直到其对我们细胞的生物效应消失()，还诱导了五个TA循环(，绿线）。在这种情况下，每12小时重复连续激活MycER可导致96%的细胞核出现TA。这些细胞在30小时后死亡(，蓝线），因为c-Myc放松调节的重复循环，而不是由于4HT的毒性(50). 因此，在此实验设置中只观察到一个TA循环(，箭头）。TA和3D体积显著增加（表3）。
c-Myc-诱导的TA周期代表断裂桥融合（BBF）周期和染色体重排。c-Myc诱导的前B细胞核内TA的周期在所有c-Myc激活期都表现出相似的周期性(). 我们推断，这些周期可能反映了端粒或BBF周期的持续关联和分离。BBF循环可能是由双着丝粒染色体的断裂引起的，在后期诱导每个核内有多个或大的TA的细胞凋亡。为了解决这些可能性，我们首先检查了不同时间的中期染色体：TA形成高峰之前、期间和之后120小时的时期。我们使用了小鼠SKY的全基因组分析和中期染色体的端粒FISH。注意到显著水平的双着丝粒染色体(). 对照细胞具有正常的核型（图12）。然而，在MycER激活的PreB细胞中，已经发生了融合。我们展示了18号和4号染色体端粒末端的融合()，红色和绿色箭头）和两条染色体1之间(，绿色箭头）。1号染色体可能在前一个后期断裂(，绿色圆圈）。另一个末端缺失的染色体1位于同一中期板的中心，染色体2、3和7显示末端缺失(). 端粒FISH证实了涉及染色体两端和姐妹染色单体的端粒融合(). 存在后期桥和环状染色体()和数据未显示）。
MycER激活的PreB细胞中BBF循环的分子细胞遗传学证据。(一)SKY分析揭示了端粒融合和染色体断裂。(a上部)中期，原始图像(左侧); 中期分类图像(居中); 中期，倒置DAPI图像(赖特). (a下部)光谱核型。图中显示了18号和4号染色体的端到端融合（红色箭头），以及1号染色体与1号染色体断裂片段的融合（绿色箭头）。一条断裂的1号染色体被圈出。注意额外的断裂染色体1、2、3和7。(b条)端粒FISH显示染色体的端到端融合。(上部)定心融合（见箭头和插页）。(下部)端粒融合（见箭头和插页）。(c（c）)后期桥梁。(上部)DAPI染色细胞核短时间暴露（100毫秒）。(下部)同一图像的长曝光（500毫秒）使后期桥可见（白色箭头），但使细胞核过度曝光。(d日)SKY显示染色体融合（红色箭头）和非互易易位（白色箭头）。也存在断裂的染色体（染色体4、6、12和17）。
c-Myc诱导的条件表达Myc细胞间期细胞核3D结构变化的性质如下：在TA形成的高峰以及之后，观察到端到端染色体融合显著增加，超过对照水平。这一结果导致染色体断裂和非互易易位显著增加（图。和和表2）。总之，TA循环揭示了BBF循环，即两条染色体的融合，从而形成双中心及其后期的断裂(). 这些周期是由条件Myc放松调控诱导的，并导致基因组不稳定的开始，由这些BBF周期引起的染色体重排证明了这一点（图。和以及表2）。
单次给药4HT后120小时，MycER激活的PreB细胞中的染色体畸变。在最初的12小时内，端到端融合（蓝色）增加到40%。随着时间的推移，融合的百分比降低。易位（橙色）在12小时出现，在42小时达到最大值35%。无端粒染色体末端（绿色）随时间增加，在30小时达到峰值，75%的中期至少有一个无端粒的染色体末端。随后，无端粒染色体末端的百分比降低。Q-FISH实验证实端粒末端在以后的时间点愈合。误差条显示了二项分布的95%置信区间(51). 由于置信区间的存在，当使用标准误差时，误差条比预期的要大，这在这种情况下是不适用的。有关每个时间点和偏差的详细信息，请参见表2。
接下来，我们研究了含TA的细胞在实验过程中是否死亡。如果这种可能性存在，我们预计在TA形成高峰或之后不久，Myc激活的细胞中的细胞死亡与TA形成高峰相关。Myc活化细胞的凋亡水平比对照细胞高≈2倍(). 在120小时内的任何特定时间点，凋亡细胞死亡都没有偏好性。我们得出的结论是，BBF周期，而不是凋亡，促成了TA形成的周期。
表1。
非MycER和MycER激活的PreB细胞的凋亡水平
| %细胞凋亡
| |
|---|
| 时间，h | 控制 | MycER激活的PreB细胞 | 增加折叠次数 |
|---|
| 0 | 3 | 3 | 1 |
| 12 | 2 | 4 | 2 |
| 24 | 6 | 12 | 2 |
| 30 | 4 | 10 | 2.5 |
| 42 | 2 | 8 | 4 |
| 48 | 5 | 10 | 2 |
| 66 | 4 | 11 | 2.75 |
| 72 | 3 | 8 | 2.7 |
| 84 | 3 | 5 | 1.7 |
| 96 | 3 | 3 | 1 |
| 102 | 2 | 3 | 1.5 |
c-Myc激活间期核中染色体的三维组织。TA和BBF周期的启动以及随后的染色体重排促使我们研究在MycER激活期间染色体在其3D核位置是否受到影响。为此，我们检查了120小时内特定染色体的重叠情况。MycER激活的PreB细胞的SKY显示染色体重排涉及7、13和17号染色体。发现其他重排，但未达到显著水平（未显示数据）。我们在96小时内检测了三种染色体组合。这一时期涵盖了TA形成的所有峰值(). 如所示，我们观察到，随着时间的推移，染色体5（红色）和13（绿色）之间的重叠发生了变化（图7一和B类). 当细胞进入第一个TA周期时，在更近的地方发现了两条染色体。第10号染色体（绿色）和第7号染色体（红色）的重叠百分比也有所增加()7号染色体（红色）和17号染色体（绿色）(). 代表性的3D电影在电影1-3中显示。
Myc活化细胞核中的染色体位置。(一)4HT后96小时内用染色体涂料涂布的代表性细胞核(). (顶部)染色体5和13。(中部)染色体7和10。(底部)染色体7和17。(B类)染色体5和13的c-Myc去调控细胞细胞核中染色体重叠的测量(左侧)、7和10(居中)、7和17(赖特)在96小时的时间内。
讨论
c-Myc诱导端粒聚集、融合和BBF周期。先前的研究表明，c-Myc在单基因水平上触发了复杂的基因组不稳定性网络(14,15,19)和整个染色体(16–18)（有关审查，请参阅参考。13). 此外，c-Myc诱导非法复制启动(19,20)，染色体重排(18)、DNA断裂、DNA修复的改变(21–23)和低水平的点突变(24,25). 本研究揭示了染色体水平上c-Myc依赖性基因组不稳定性的一种先前未被证实的机制直接影响端粒的完整性。
四种不同的Myc活化处理发现TA循环具有明显的周期性，这表明存在与生物学相关的Myc依赖过程。理论上，Myc诱导的TA周期可以反映(我)端粒短暂结合和随后分离的核重构；(ii（ii）)启动BBF周期的端到端染色体融合(52,53); (三)c-Myc诱导细胞死亡；和(iv（四）)以上所有因素的组合。我们的数据与BBF周期一致，排除了细胞凋亡是TA周期的直接因素。在整个研究过程中，细胞凋亡的水平是相同的，并且始终达到对照细胞的两倍左右。在MycER激活的PreB中，细胞增殖增加了2倍，从而弥补了细胞的损失(19). 这些数据还表明，如参考文献所述，存在基因组不稳定和凋亡的遗传分离。54.端粒关联和分离(55)对TA循环的贡献目前尚不清楚。
对五个TA周期过程中观察到的染色体融合、断裂和重排的详细分析，直接证明了BBF周期在TA周期中的作用。我们证明了端到端融合的发生，这种融合产生双中心染色体，并在后期断裂，使一条染色体或染色单体与另一条染色体或者染色单体的片段分离。由此产生的无端粒末端继续与其他染色体融合，这是一个称为BBF循环的事件周期(52,53). 实验数据支持从融合到断裂和非互易易位的这些事件。TA周期的周期性与PreB细胞的a≈12 h群体倍增时间一致(19). TA的每个峰都与TA的重复形成相一致。峰值后的时间点与双着丝粒染色体的断裂一致。无端粒末端启动新的BBF循环，直到不再存在无端粒染色体末端。
从端粒到染色体重排：c-Myc依赖性基因组不稳定性的新途径。穆勒(52)和麦克林托克(53)首先描述了BBF循环，这是染色体端到端融合的机制，有助于基因组不稳定的发生。BBF循环有助于缺失、基因扩增、非互易易位以及与肿瘤发生相关的整体遗传变化(56–63).
我们的研究表明，c-Myc是通过BBF循环引发基因组不稳定性的一个关键因素。端粒较长的端粒酶阳性永生化小鼠PreB细胞（未发表的数据）中的这种BBF周期与报道的端粒极短的BBF周期不同(61,64). 一些TA（但不一定全部）代表融合，正如中期染色体分析所示。TAs和端到端融合取决于c-Myc激活的时间和水平。对这两个事件发生频率的分析表明，它们之间有着密切的联系。随着融合启动BBF循环，断裂和非互易易位的频率随时间增加。
因此，c-Myc依赖性基因组不稳定性的先前未经特征化的途径始于染色体的端粒末端。TA和BBF周期都是Myc表达失控的表现，导致染色体重排，继而导致基因组不稳定。
局部染色体移动增加了细胞核中的染色体重叠。局部位置的这种时间变化可能允许染色体末端的直接接触，并促进重组和/或融合。在c-Myc解除调控后观察到这种运动，这表明癌蛋白对染色体的局部核定位有影响。染色体运动以前也曾被他人研究和发现(65–69).
涉及癌基因解除调控的几种调控途径可能会影响3D核组织。癌蛋白，包括c-Myc，可以改变3D核组织和染色质组织(70–72). 它们还影响核基质。高迁移率组蛋白I（Y）（HMGI（Y））是一种c-Myc依赖的核基质蛋白(73)在肿瘤形成期间表达增加(2). 分析myc公司-人类基因组中的结合位点表明c-Myc与编码核骨架成分的基因结合(74). 此外，组成性c-Myc表达与端粒重复序列结合蛋白TRF2的下调有关(10)端粒封顶和基因组稳定性所需的蛋白质(75). Myc也参与DNA修复的调控(22,23)并被证明会导致DNA断裂(21). 综上所述，许多不同的c-Myc依赖机制可能会潜在地影响核组织，如图所示，在端粒处汇聚。
致谢
我们感谢Michael Mowat博士对这份手稿的批判性阅读，感谢Mary Cheang博士的统计分析，感谢Cheryl Taylor-Kashton和Landon Wark的反褶积。这项工作得到了加拿大创新基金会、加拿大卫生研究院、马尼托巴癌症护理中心（S.M.）、法国基金会（巴黎）和法国外交部长（T.F.）、Sander-Siftung和Deutsche Krebshilfe（P.B.）、物质基础研究基金会物理技术项目的支持，代尔夫特国际金融研究中心生命技术中心（Cyttron）和代尔夫脱研究计划生命科学与技术（荷兰代尔夫t）。
笔记
作者贡献：S.Mai设计的研究；S.F.L.、A.G.、Z.L.、F.K.、T.C.Y.C.、S.Moshir、V.M.和S.Mai进行了研究；B.J.V.、Y.G.和I.T.Y.提供了新的试剂/分析工具；S.F.L.、B.J.V.、Y.G.、A.G.、Z.L.、F.K.、T.C.Y.C.、S.Moshir、V.M.、A.Y.C.C.、P.D.K.、T.F.、P.B.和S.Mai分析数据；Y.G.和S.Mai撰写了这篇论文。
本文直接（第二轨道）提交给PNAS办公室。
缩写：4HT，4-羟基三苯氧胺；SKY，光谱核型分析；TA，端粒聚集物。
工具书类
1Pienta，K.J.，Partin，A.W.&Coffey，D.S.（1989）癌症研究。 49,2525-2532. [公共医学][谷歌学者] 2Leman，E.S.、Madigan，M.C.、Brunagel，G.、Takaha，N.、Coffey，D.S.和Getzenberg，R.H.（2003）细胞生物化学杂志。 88,599-608. [公共医学][谷歌学者] 三。Zink，D.、Fischer，A.H.和Nickerson，J.A.（2004）Nat.Rev.癌症 4,677-687. [公共医学][谷歌学者] 4Parada，L.A.、McQueen，P.G.、Munson，P.J.和Misteli，T.（2002年）货币。生物。 12,1692-1697. [公共医学][谷歌学者] 5Parada，L.和Misteli，T.（2002）趋势细胞生物学。 12,425-432. [公共医学][谷歌学者] 6Roix，J.J.、McQueen，P.G.、Munson，P.J.，Parada，L.A.和Misteli，T.（2003）自然遗传学。 34,287-291. [公共医学][谷歌学者] 7Parada，L.A.、McQueen，P.G.和Misteli，T.（2004）基因组生物学。 5,R44条。[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 8Neves，H.、Ramos，C.、da Silva，M.G.、Parreira，A.和Parreira-L.（1999）血液 93,1197-1207. [公共医学][谷歌学者] 9Chuag，T.C.，Moshir，S.，Garini，Y.，Chuang，A.Y.，Young，I.T.，Vermolen，B.，van den Doel，R.，Mougey，V.，Perrin，M.，Braun，M。，等。(2004)BMC生物。 2,12[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 10Ermler，S.、Krunic，D.、Knoch，T.A.、Moshir，S.和Mai，S.，Greulich-Bode，K.M.和Boukamp，P.（2004）《欧洲细胞生物学杂志》。 83,681-690. [公共医学][谷歌学者] 11Nesbit，C.E.、Tersak，J.M.和Prochownik，E.V.（1999）癌基因 18,3004-3016. [公共医学][谷歌学者] 12Potter，M.和Marcu，K.B.（1997年）货币。顶部。微生物。免疫学。 224,1-17. [公共医学][谷歌学者] 13Mai，S.&Mushinski，J.F.（2003）J.环境。病态。毒物。昂科尔。 22,179-199. [公共医学][谷歌学者] 14Mai，S.（1994）基因 148,253-260. [公共医学][谷歌学者] 15Mai，S.、Hanley-Hede，J.和Fluri，M.（1996）癌基因 12,277-288. [公共医学][谷歌学者] 16Mai，S.、Fluri，M.、Siwarski，D.和Huppi，K.（1996）染色体研究。 4,365-371. [公共医学][谷歌学者] 17Felsher，D.W.和Bishop，J.M.（1999）程序。国家。阿卡德。科学。美国 96,3940-3944.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 18Rockwood，L.D.，Torrey，T.A.，Kim，J.S.，Coleman，A.E.，Kovalchuk，A.L.，Xiang，S.，Ried，T.，Morse，H.C.，3rd，&Janz，S.（2002）癌基因 21,7235-7240. [公共医学][谷歌学者] 19Kuschak，T.I.，Kuscham，B.C.，Taylor，C.L.，Wright，J.A.，Wiener，F.&Mai，S.（2002）癌基因 21,909-920. [公共医学][谷歌学者] 20Louis，S.F.、Gruhne，B.和Mai，S.（2005）掠夺。Oncog。，正在印刷中。
21Vafa，O.、Wade，M.、Kern，S.、Beeche，M.、Pandita，T.K.、Hampton，G.M.和Wahl，G.M.（2002）分子电池 9,1031-1044. [公共医学][谷歌学者] 22Hironaka，K.，Factor，V.M.，Calvisi，D.F.，Conner，E.A.和Thorgiersson，S.S.（2003）实验室投资。 83,643-654. [公共医学][谷歌学者] 23Karlsson，A.，Deb-Basu，D.，Cherry，A.，Turner，S.，Ford，J.&Felsher，D.W.（2003）程序。国家。阿卡德。科学。美国 100,9974-9979.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 24Partlin，M.M.，Homer，E.，Robinson，H.，McCormick，C.J.，Crouch，D.H.，Durant，S.T.，Matheson，E.C.，Hall，A.G.，Gillespie，D.A.&Brown，R.（2003）癌基因 22,819-825. [公共医学][谷歌学者] 25Chiang，Y.C.、Teng，S.C.、Su，Y.N.、Hsieh，F.J.和Wu，K.J.（2003）生物学杂志。化学。 278,19286-19291. [公共医学][谷歌学者] 26Adams，J.M.、Harris，A.W.、Pinkert，C.A.、Corcoran，L.M.，Alexander，W.S.、Cory，S.、Palmiter，R.D.和Brinster，R.L.（1985）自然 318,533-538. [公共医学][谷歌学者] 27Potter，M.&Wiener，F.（1992年）致癌作用 13,1681-1697. [公共医学][谷歌学者] 28Pelengaris，S.、Khan，M.和Evan，G.I.（2002年）单元格 109,321-334. [公共医学][谷歌学者] 29Felsher，D.W.和Bishop，J.M.（1999）分子电池 4,199-207. [公共医学][谷歌学者] 30Marinkovic，D.，Marinkovi，T.，Mahr，B.，Hess，J.&Wirth，T.（2004）国际癌症杂志 110,336-342. [公共医学][谷歌学者] 31D’Cruz，C.M.，Gunther，E.J.，Boxer，R.B.，Hartman，J.L.，Sintasath，L.，Moody，S.E.，Cox，J.D.，Ha，S.I.，Belka，G.K.，Golant，A.，Cardiff，R.D.&Chodosh，L.A.（2001）自然医学。 7,235-239. [公共医学][谷歌学者] 32Jain，M.、Arvanitis，C.、Chu，K.、Dewey，W.、Leonhardt，E.、Trinh，M.，Sundberg，C.D.、Bishop，J.M.和Felsher，D.W.（2002）科学类 297,102-104. [公共医学][谷歌学者] 33Karlsson，A.，Giuriato，S.，Tang，F.，Fung-Weier，J.，Levan，G.&Felsher，D.W.（2003）血液 101,2797-2803. [公共医学][谷歌学者] 34Shachaf，C.M.、Kopelman，A.M.、Arvanitis，C.、Karlsson，A.、Beer，S.、Mandl，S.，Bachmann，M.H.、Borowsky，A.D.、Ruebner，B.、Cardiff，R.D.、。，等。(2004)自然 431,1112-1117. [公共医学][谷歌学者] 35Fest，T.、Mougey，V.、Dalstein，V.，Hagerty，M.、Milette，D.、Silva，S.和Mai，S.（2002）癌基因 21,2981-2990. [公共医学][谷歌学者] 36Mai，S.、Hanley-Hede，J.、Rainey，G.J.、Kuschak，T.I.、Paul，J.T.、Littlewood，T.D.、Mischak、H.、Stevens，L.M.、Henderson，D.W.和Mushinski，J.F.（1999）肿瘤形成 1,241-252.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 37Wiener，F.、Kuschak，T.I.、Ohno，S.和Mai，S.（1999）程序。国家。阿卡德。科学。美国 96,13967-13972.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 38Wiener，F.、Coleman，A.、Mock，B.A.和Potter，M.（1995）癌症研究。 55,1181-1188. [公共医学][谷歌学者] 39Littlewood，T.D.、Hancock，D.C.、Danielian，P.S.、Parker，M.G.和Evan，G.I.（1995）核酸研究。 23,1686-1690.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 40.Grenman，S.、Shapira，A.和Carey，T.E.（1988年）妇科。昂科尔。 30,228-238. [公共医学][谷歌学者] 41.Grenman，S.E.、Roberts，J.A.、England，B.G.、Gronroos，M.和Carey，T.E.（1988年）妇科。昂科尔。 30,239-250. [公共医学][谷歌学者] 42Mandlekar，S.、Hebbar，V.、Christov，K.和Kong，A.N.（2000）癌症研究。 60,6601-6606. [公共医学][谷歌学者] 43Fukasawa，K.、Wiener，F.、Vande Woude，G.F.和Mai，S.（1997）癌基因 15,1295-1302. [公共医学][谷歌学者] 44Figueroa，R.、Lindenmaier，H.、Hergenhahn，M.、Nielsen，K.V.和Boukamp，P.（2000）癌症研究。 60,2770-2774. [公共医学][谷歌学者] 45Schaefer，L.H.、Schuster，D.和Herz，H.（2001）《微生物学杂志》。 204,99-107. [公共医学][谷歌学者] 46Vermolen，B.J.，Garini，Y.，Mai，S.，Mougey，V.，Fest，T.，Chunag，T.C.Y.，Chuang，A.Y.C.，Wark，L.&Young，I.T.（2005）细胞计量学，正在印刷中。[公共医学] 47Poon，S.S.、Martens，U.M.、Ward，R.K.和Lansdorp，P.M.（1999）细胞计量学 36,267-278. [公共医学][谷歌学者] 48Beatty，B.，Mai，S.&Squire，J.编辑（2002）鱼类：一种实用的方法（牛津大学出版社，牛津）。
49Benedek，K.、Chudoba，I.、Klein，G.、Wiener，F.和Mai，S.（2004）染色体研究。 12,777-785. [公共医学][谷歌学者] 50Smith，G.、Taylor-Kashton，C.、Dustrichky，L.、Symons，S.、Wright，J.和Mai，S.（2003）肿瘤（巴西） 5,110-120.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 51威尔逊·E·B（1927）美国统计协会。 22,209-212.[谷歌学者] 52穆勒·H·J（1938）收集网络。 13,181-198.[谷歌学者] 54Fest，T.、Guffei，A.、Williams，G.、Silva，S.和Mai，S.（2005）癌基因 24,2944-2953. [公共医学][谷歌学者] 55Molenaar，C.，Wiesmeijer，K.，Verwoard，N.P.，Khazen，S.，Eils，R.，Tanke，H.J.&Dirks，R.W.（2003）EMBO J。 22,6631-6641.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 56DePinho，R.A.和Polyak，K.（2004）自然遗传学。 36,932-934. [公共医学][谷歌学者] 57Artandi，S.E.、Chang，S.、Lee，S.L.、Alson，S.、Gottlieb，G.J.、Chin，L.和DePinho，R.A.（2000）自然 406,641-645. [公共医学][谷歌学者] 58.Artandi，S.E.（2002年）摩尔医学趋势。 8,44-47. [公共医学][谷歌学者] 59Smith，K.A.、Stark，M.B.、Gorman，P.A.和Stark、G.R.（1992）程序。国家。阿卡德。科学。美国 89,5427-5431.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 60Ciullo，M.、Debily，M.A.、Rozier，L.、Autiero，M.，Billault，A.、Mayau，V.、El Marhomy，S.、Guardiola，J.、Bernheim，A.、Coullin，P.、。，等。(2002)嗯，分子遗传学。 11,2887-2894. [公共医学][谷歌学者] 61Hande，M.P.，Samper，E.，Lansdorp，P.&Blasco，M.A.（1999）《细胞生物学杂志》。 144,589-601.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 62Murnane，J.P.和Sabatier，L.（2004）生物论文 26,1164-1174. [公共医学][谷歌学者] 63Gisselsson，D.，Jonson，T.，Petersen，A.，Strombeck，B.，Dal Cin，P.，Hoglund，M.，Mitelman，F.，Mertens，F.&Mandahl，N.（2001）程序。国家。阿卡德。科学。美国 98,12683-12688.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 64Londono-Vallejo，J.A.（2004）癌症快报。 212,135-144. [公共医学][谷歌学者] 65Zink，D.&Cremer，T.（1998）货币。生物。 8,R321-R324。[公共医学][谷歌学者] 66Walter，J.、Schermelleh，L.、Cremer，M.、Tashiro，S.和Cremer（2003）《细胞生物学杂志》。 160,685-697.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 67Vourch，C.、Taruscio，D.、Boyle，A.L.和Ward，D.C.（1993）实验细胞研究。 205,142-151. [公共医学][谷歌学者] 68Ferguson，M.&Ward，D.C.（1992年）染色体体 101,557-565. [公共医学][谷歌学者] 69Bridger，J.M.、Boyle，S.、Kill，I.R.和Bickmore，W.A.（2000）货币。生物。 10,149-152. [公共医学][谷歌学者] 70Fischer，A.H.、Bond，J.A.、Taysavang，P.、Battles，O.E.和Wynford-Tomas，D.（1998）美国病理学杂志。 153,1443-1450.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 71Fischer，A.H.、Chadee，D.N.、Wright，J.A.、Gansler，T.S.和Davie，J.R.（1998）细胞生物化学杂志。 70,130-140. [公共医学][谷歌学者] 72.Chadee，D.N.、Hendzel，M.J.、Tylipski，C.P.、Allis，C.D.、Bazett-Jones，D.P.、Wright，J.A.和Davie，J.R.（1999）生物学杂志。化学。 274,24914-24920. [公共医学][谷歌学者] 73Takaha，N.、Hawkins，A.L.、Griffin，C.A.、Isaacs，W.B.和Coffey，D.S.（2002）癌症研究。 62,647-651. [公共医学][谷歌学者] 74Fernandez，P.C.、Frank，S.R.、Wang，L.、Schroeder，M.、Liu，S.、Greene，J.、Cocito，A.和Amati，B.（2003）基因发育。 17,1115-1129.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] 75van Steensel，B.、Smogorzewska，A.和de Lange，T.（1998年）单元格 92,401-413. [公共医学][谷歌学者] 
