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图4

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dam甲基化酶对端粒染色质的可及性增加碳酸钙Δ希尔1Δ双突变体。(A) 的示意图URA3公司染色体VIIL端粒附近的基因[(TG)n个]和乌拉3-1V号染色体自然位点的基因(33,78). 的限制站点Hin公司dIII和5′-GATC-3′序列分别用H3和Sau表示。GATC序列在野生型细胞中比在先生细胞以Sau*表示。预期的限制性片段(A、B、C和端粒片段T)如示意图所示。(B) 表达细菌大坝甲基化酶的菌株为PKY300(CAC公司+),PKY299(碳酸钙1Δ),PKY305(碳酸钙Δ),PKY310(碳酸钙Δ希尔1Δ),PKY311(希尔1Δ)和AJL387-5aΔsir2(沉默信息调控因子2Δ). 在琼脂糖凝胶电泳和DNA杂交之前,用四种不同的限制性内切酶组合消化每个菌株的DNAURA3公司探查。从左到右显示,每个菌株:用Hin公司dIII单独,消化Hin公司dIII以上Dpn公司一、 用…消化Hin公司dII加Dpn公司二、 用…消化Hin公司dIII以上沙特3AI.“DpnI保护”表示总计数在Hin公司dIII以上Dpn公司B限制性片段中存在I区,表明端粒URA3基因内的GATC位点受到了dam甲基化酶的保护。给出的值是两个独立实验数据的平均值。

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