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美国国家科学院院刊。2005年5月17日；102(20): 7227–7232.
2005年5月3日在线发布。 数字对象标识：10.1073/pnas.0501536102
预防性维修识别码：项目编号：1088171
PMID：15870199
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补体调节基因因子H中的一种常见单倍型(HF1/CFH型)个体易患年龄相关性黄斑变性

格雷戈里·海格曼，a、，b中，c（c） 唐·安德森，b中，d日 林肯·V·约翰逊，b中，d日 丽莎·汉考克斯，一 安德鲁·泰伯，一 丽莎·哈迪斯蒂，一 吉尔·L·哈格曼，一 希瑟·A·斯托克曼，一 詹姆斯·博查特，一 凯伦·盖尔斯（Karen M.Gehrs），一 理查德·史密斯，e（电子） 朱利安娜·西尔维斯特里，（f） 斯蒂芬·罗素，一 卡罗琳·C·W·克拉弗，克 艾琳·巴巴泽托，小时 斯坦利·张，小时 劳伦斯·亚努齐，小时 盖塔诺·R·巴里尔，小时 约翰·梅里安，小时 R.西奥多·史密斯，小时 亚当·K·奥尔什，我 朱莉·贝杰隆，j个 贾娜·泽南特，小时 乔安娜·E·梅里安，小时 伯特·戈尔德，我 迈克尔·迪安，我和Rando Allikmets公司h时，k、，我
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补充资料

摘要

老年性黄斑变性（AMD）是发达国家老年人不可逆失明的最常见原因。我们以前的研究表明补体激活参与了AMD标志性病变——血肿的形成。在这里，我们发现因子H（HF1）是替代补体途径的主要抑制剂，在视网膜色素上皮内积聚并合成。因为之前的连锁分析确定了染色体1q25-32，其中含有因子H基因(HF1型/CFH公司)，作为AMD易感性位点，我们分析了HF1型在由≈900例AMD病例和400例匹配对照组成的两个独立队列中进行遗传变异研究。我们发现八种常见的HF1型具有AMD的SNP；两种常见的错义变体表现出高度显著的相关性（I62V，χ2=26.1和P（P）= 3.2 × 10-7个和Y402H，χ2=54.4和P（P）= 1.6 × 10-13). 单倍型分析显示HF1型变异导致AMD风险升高或降低。AMD患者和对照组中一种常见的高危单倍型的出现频率分别为50%和29%[比值比（OR）=2.46，95%可信区间（1.95-3.11）]。该单倍型的纯合子占24%的病例和8%的对照[OR=3.51，95%置信区间（2.13-5.78）]。还鉴定了几个保护性单倍型（OR=0.44-0.55），进一步表明HF1在AMD的发病机制中起作用。我们认为，当与诸如感染等触发事件相结合时，替代补体途径调节器中的遗传变异是AMD在人群中占很大比例的基础。

A类基因相关性黄斑变性（AMD）是导致不可逆视力丧失的主要原因(1，2)影响全球约5000万人。AMD的特征是由于神经视网膜和潜在脉络膜之间的界面发生变性和新生血管变化而导致中央视力逐渐丧失。在这个位置有视网膜感光细胞、视网膜色素上皮（RPE）、称为布鲁赫膜（BM）的基底膜复合体和脉络膜毛细血管网。

主流观点认为AMD是一种复杂的疾病，源于多种遗传和环境风险因素的相互作用(三，4). 家族聚集性研究表明，高达25%的病例可以确定基因贡献(5). 因此，AMD似乎是多个易感基因座之间相互作用的产物，而不是单基因疾病的集合。涉及的基因座数量、所产生的归因风险以及不同基因座之间的相互作用仍不清楚。

连锁分析和候选基因筛选对AMD的遗传学提供了有限的见解。可靠的关联ABCA4公司(6，7)和阿波（ApoE）(8，9)已报告。最近的一项研究表明图5(10)，尽管这一点尚未得到证实。全基因组连锁分析(4，11)将一个AMD表型（ARMD1；MIM 603075）与染色体区域1q25-q31联系起来(12).图6已初步确定为致病基因(13)，尽管它没有说明重大疾病负荷(14，15). 几个群体对1q染色体重叠位点的鉴定(11，16)表明该基因座可能含有一个主要的AMD相关基因。

在AMD和阿尔茨海默病等疾病中(17)、动脉粥样硬化(18)和肾小球肾炎(19)特征性病变和沉积有助于疾病的发病和进展。虽然这些疾病的分子基础可能多种多样，但沉积物中含有许多共享的分子成分，部分归因于局部炎症和补体级联激活，补体级联是宿主防御中先天免疫系统的关键元素。Drusen是早期AMD（eAMD）的标志性沉淀物，最近的研究表明其形成过程中存在局部炎症和补体级联激活(20-30). Drusen含有补体激活剂、抑制剂、激活特异性补体片段和末端通路成分，包括膜攻击复合物（MAC）。MAC是一种溶解复合物，在各种疾病过程中对外来病原体以及本地宿主细胞和组织都是致命的。

膜增生性肾小球肾炎（MPGN）II型（MPGNII）是一种罕见（≈1:1000000）的肾脏疾病，其特征是替代补体通路的不受控制的激活，患者经常在黄斑部出现眼鼓。这些在成分和外观上与AMD患者难以区分(23，31-33). 此外，一名MPGNII患者的因子H基因发生突变(HF1型)是替代补体途径的主要抑制剂（P.Zipfel，个人交流）。此外，一些患有MPGN III型（一种相关疾病）的扩展家族中的个体显示出与1q31-1q32中定位的染色体区域的联系(34)这与AMD连锁研究中确定的位点重叠。这些共同的发现为研究HF1型参与AMD和MPGN II型的开发。

在这项研究中，我们确定了HF1型AMD和MPGN II型患者和匹配对照的序列变异，并分析它们与疾病表型的关系。我们还检查了HF1型正常和AMD供体黄斑RPE/脉络膜复合体中HF1蛋白的转录和分布。

方法

患者。本研究使用了两组独立的AMD病例和年龄匹配的对照组。个人为欧美血统，年龄超过60岁，根据机构审查委员会（哥伦比亚大学和爱荷华大学）批准的协议注册。这些组包括404名临床记录AMD的无关患者（平均年龄79.5±7.8岁）和131名来自爱荷华大学的无关对照个体（平均年龄78.4±7.4岁；年龄和种族匹配），以及550名临床记录的AMD的非相关患者（平均年纪71.32±8.9岁）来自哥伦比亚大学的275个不相关对照组，按年龄和种族匹配（平均年龄68.84±8.6岁）。患者由训练有素的眼科医生进行检查。

所有立体眼底照片都由C.C.W.K.进行分级，并由她根据标准化分类系统对个人进行培训(35，36). 对照组没有任何黄斑疾病的明显症状，也没有已知的AMD家族史（0期）。AMD患者根据招募时最严重眼部的分类，分为表型类别[eAMD（1a、1b、2a、2b和3期）、地理萎缩（GA；4期）和渗出性（脉络膜新生血管；4期]AMD。使用QIAamp DNA blood Maxi试剂盒（加利福尼亚州巴伦西亚，齐亚根）从外周血白细胞中生成基因组DNA。

人类捐赠眼睛。在死亡后5小时内，从爱荷华州狮子、俄勒冈州狮子和佛罗里达州中部狮子眼库获得了人类捐赠者的眼睛。使用上述相同的分级标准对眼底和/或后极进行分级(35，36). 来自38名有临床记录的AMD患者的非血缘供者（平均年龄81.5±8.6岁）和19名无血缘关系的对照供者的DNA（平均年龄80.5±8.8岁；年龄和种族匹配）用于单链构象多态性（SSCP）分析，以检查基因型-表型关系。从供体视网膜、RPE/脉络膜和RPE细胞以及供体衍生RPE细胞培养物中制备总RNA(37)用于RT-PCR和实时定量RT-PCR分析。

免疫组织化学。按照参考文献所述处理后极。20; 一些直接埋入OCT复合物中，无需事先固定。将组织切片至6-8μm厚，并按照参考文献所述进行免疫标记。20将相邻切片与二级抗体单独孵育，作为对照。如参考文献所述，制备了一些免疫标记标本，并用共焦激光扫描显微镜观察。24使用的抗体列在图例中图1.

保存图片、插图等的外部文件。对象名称为zpq0200583070001.jpg

HF1的免疫定位(A类-H（H）)和MAC（C5b-9）(我-L（左）)RPE/脉络膜（Chor）复合体。视网膜；Dr，drusen医生。(A类-天)自身荧光RPE脂褐素颗粒为红色（Cy3通道）。(A类和B类)一名患有萎缩性AMD的84岁男性的共焦免疫荧光图像。抗-HF1抗体（圣地亚哥先进研究技术公司）标记了drusen和subRPE空间（绿色；Cy2通道）中的亚结构元素（箭头）。这些元素还通过使用针对C3片段（iC3b、C3d和C3dg）的抗体来显示IR。脉络膜毛细血管腔内的抗HF1标记（星号）反映了循环中的HF1。（比例尺：A类，5微米；B类，3μm）(C类和天)一名患有AMD的83岁男性的核糖核酸酶和视网膜色素上皮下间隙中HF1的共聚焦定位（抗HF1；Quidel，San Diego）（绿色）。(C类)Drusen IR是均匀的。(天)HF1 IR存在于整个脉络膜和RPE下间隙（箭头）。（比例尺：C类，10微米；天，20微米）(电子-L（左）)RPE细胞质和脉络膜中的棕色色素是黑色素。(电子和如果)79岁供体眼球中HF1在玻璃疣中的定位。(电子)抗-HF1单克隆抗体标记（Quidel）（紫色反应产物）在脉络膜毛细血管壁、基底膜和脉络膜中明显可见（箭头所示）。(如果)同一只眼睛的对照组没有一级抗体。缺少标签。（比例尺：电子，10微米；如果，10微米）(G公司和H（H）)HF1在黄斑的定位。(G公司)78岁AMD患者的骨髓、脉络膜毛细血管壁和毛细血管间柱（箭头所示）有广泛的标记。(H（H）)无AMD供体黄斑部的对照切片；更不用说标签了。（比例尺：G公司，20微米；H（H），20微米）(我和J型)C5b-9在黄斑下RPE脉络膜中的定位(我)和黄斑外(J型)在81岁AMD捐赠者的同一只眼睛里。(我)强烈的抗C5b-9 IR与血栓、骨髓和脉络膜毛细血管内皮有关。(J型)黄斑外，BM附近只有零星标记。（比例尺：我，20微米；J型，20微米）(K（K）和L（左）)AMD供体黄斑区C5b-9的定位(K（K）)第二个没有AMD的捐赠者(L（左）). (K（K）)抗C5b-9标记主要与脉络膜毛细血管壁（黑色箭头）和毛细血管间柱（白色箭头）有关。AMD眼睛的标记要强烈得多。请注意，同一捐赠者的黄斑中的抗HF1标记模式非常相似(G公司). （比例尺：K（K），15微米；L（左），20微米）

突变筛选和分析。的编码和相邻内含子区高频1通过SSCP分析、变性高效液相色谱（DHPLC）和直接测序检测变异。SSCP、DHPLC和DNA测序分析的引物（表2，发布为支持信息（在PNAS网站上）设计用于扩增每个外显子及其相邻的内含子区域macvector公司软件（Accelrys，圣地亚哥）。如参考文献所述，对PCR-衍生扩增子进行序列变异筛选。6和15SSCP和DHPLC检测到的所有变化均根据标准协议通过双向测序进行确认。统计分析，包括χ2Fisher的精确测试如参考文献所述。38中提供了详细的协议支持文本：统计分析，发布为支持信息在PNAS网站上。

基因分型。SNP是通过数据挖掘（Ensembl数据库，dbSNP；Celera Discovery System，Applid Biosystems）和测序发现的。测试人群中频率>10%的变异检测从Applied Biosystems购买，作为验证的库存SNP按需检测，或提交给Applied biosystem按设计检测管道。使用的技术与参考文献中描述的相同。37简单地说，在应用生物系统9700 384孔热循环器上对5 ng DNA进行50次循环，并在应用生物系7900 HT序列检测系统中读取板。

结果

RPE-脉络界面的因子H。在6名早期AMD供体和3名年龄相近但无AMD或黄斑水肿的供体的眼睛中评估了HF1在黄斑和黄斑外RPE/脉络膜复合体中的分布(图1). 在AMD供体者中，在脉络膜毛细血管周围、RPE下间隙和鼓膜中存在强烈和特异的HF1免疫反应（IR）(图1A类-电子和G公司). HF1抗体通常标记为均匀的鼓膜(图1C类和电子). 在某些情况下，drusen中的子结构元素(图1A类和B类)与已知HF1配体的C3片段（例如iC3b）抗体反应(25，27). 与年龄匹配的对照组相比，AMD供体的HF1 IR更稳健，且在黄斑区最为显著(图1G公司和H（H）). HF1在黄斑中的分布(图1G公司)与C5b-9高度相似(图1我-K（K）)；在这两种情况下，标记包括脉络膜毛细血管。黄斑外位置显示HF1和C5b-9 IR较少(图1J型). 50岁以下且无AMD的供体RPE/脉络膜中几乎未观察到C5b-9 IR(图1L（左）).

RPE是HF1的本地来源。适当尺寸的放大器HF1型和FHL1层（截短的亚型）基因产物是从培养的人类RPE和新分离的RPE和RPE/脉络膜复合体中生成的，而不是从有或无AMD的供体眼睛中获得的神经视网膜（图4，发表于支持信息在PNAS网站上）。实时定量RT-PCR分析证实HF1型和FHL1层RPE和脉络膜中含量丰富，接近肝脏中观察到的水平（图5，发表于支持信息在PNAS网站上）。

HF1变体与AMD相关。确定HF1型与AMD相关，所有22个编码外显子及其50-100 bp侧翼内含子序列在爱荷华大学队列中由SSCP筛选（在队列的50%子集中筛选了一些外显子；参见表1和表3，发布为支持信息在PNAS网站上）。共检测到26个序列变异：编码区17个SNP，包括5个同义替换和12个非同义替换，以及9个内含子SNP(图2). 编码区SNP包括先前描述的常见非同义变异，如外显子2中的I62V、外显子9中的Y402H和外显子18中的D936E（图。​（图22和​和3三和表1). 还检测到内含子2剪接受体位点的一个常见变体IVS2-18insTT。AMD患者和对照组中也检测到五种罕见（<0.5%）变异（数据未显示），表明罕见HF1型疾病中的等位基因。爱荷华州队列中的7个SNP产生了详细的基因分型数据(图2和表​表11和3；另请参见表4，其发布为支持信息并采用病例对照研究设计进行关联分析。发现与AMD高度相关的几个变异，包括非同义I62V（χ2= 15.0,P（P）= 1.1 × 10-4)和Y402H（χ2= 49.4,P（P）= 2.1 × 10-12)变异和IVS2变异（χ2= 22.2,P（P）= 2.4 × 10-6) (表1). 该队列中与AMD相关性最强的是第10外显子的同义A473A变异体[比值比（OR）=3.42，95%可信区间（CI）（2.27-5.15）]。

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的示意图高频1/CFH公司基因。图的顶部显示了分析中使用的11个SNP的大致位置。编码的HF1蛋白包含20个SCR、一个RGD结构域和N-连接的糖基化位点（潜在位点“P”）。根据参考文献中公布的数据，下图描述了病原体和其他底物的大致结合位点。40和41。地图未按比例绘制。

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关联分析HF1型单倍型。一组八个信息量最大的SNP高频1在哥伦比亚病例和对照中选择基因并分析成对连锁不平衡。显示R2和D′值。显示频率>3%的所有单倍型。计算了病例和对照组比较的OR，95%的CI显示在括号中。还显示了病例（CAS）和对照（CON）中单倍型的估计频率。主要危险单倍型（H1）显示在深色阴影中，保护单倍型显示在浅色阴影中。仅在这些风险和保护性单倍型中发现的SNP被装箱。进行二倍体分析以评估显性和隐性效应。H1单倍型（H1/H1）的纯合子具有显著风险，H2/H2个体受到显著保护。有关分析和访问其他数据的详细信息，请参阅支持文本：统计分析.

表1。

HF1 SNP与AMD的相关性
lowa队列
哥伦比亚队列
位置任命dbSNP ID续，n个案例，n个χ2P（P）或95%氯续，n个案例，n个χ2P（P）或95%氯
发起人发起人3753394卢比——————2645492.840.0891.230.98-1.52
四分之一IVS1系统529825卢比——————26654725.44.66×10−71.921.49-2.48
外显子2I62伏rs80029268228151.1 × 10−42.791.67-4.6526154626.13.21×10−71.951.51-2.52
IVS2系统检验TT—12639022.212.44 × 10−62.381.65-3.4427354928.49.87 × 10−82.041.57-2.63
IVS6系列IVS6系列3766404卢比——————271546231.59 × 10−62.111.56-2.85
外显子7A307A型1061147卢比13140449.42.09 × 10−122.822.11-3.7826254759.61.16 × 10−142.341.89-2.91
外显子9Y402H型rs106117013140349.42.09 × 10−122.822.11-3.7827254954.41.64 × 10−132.251.79-2.75
外显子10A473A型2274700卢比6822135.143.07×10−93.422.27-5.1526454245.41.61 × 10−112.101.69-2.61
IVS10型IVS10型203674卢比——————26454566.14.29 × 10−162.441.97-3.03
外显子13Q672Q问题3753396卢比1294040.210.651.120.76-1.642655452.050.151.240.94-1.65
外显子18D936E型1065489卢比672230.640.80.8090.51-1.562645360.530.461.120.85-1.49

比较病例组和对照组（Cont）以及Yates组中每个SNP的等位基因1和等位基因2的频率χ2和P（P）计算这些值以及OR和95%置信区间（95%CI）。每个基因型的实际计数如表3所示，无可用数据。

在哥伦比亚大学的一个独立队列中，同样的两个非同义SNP与AMD高度相关（I62V：χ2= 26.1,P（P）=3.2×10-7个和Y402H:χ2= 54.4,P（P）= 1.6 × 10-13) (表1). 除了在爱荷华州队列中检测和在哥伦比亚队列中筛选的那些外，还选择了其他几个内含子SNP（基于其频率和商业分析的可用性）（共11个SNP）。该队列中与IVS10中SNP rs203674的相关性最强（χ2= 66.1,P（P）= 4.29 × 10-16)[比值比=2.44，95%置信区间（1.97-3.03）]。虽然OR是适度的，但变体非常常见；30.5%的病例为等位基因B纯合子，而对照组为12.9%。位于HF1 C末端区外显子13和18中的Q672Q和D936E变体没有显示出统计学上显著的相关性。因此，HF1的N端区域，包括参与病原体和底物分子识别的结构域(图2)与AMD关联。来自两个队列的数据，包括与AMD基因型SNP的显著关联，关联的频率和程度惊人地相似（表​（表11和4）。

当整个AMD患者队列与对照组进行比较时，观察到的相关性非常显著(表1). 当AMD的主要亚表型，包括eAMD、脉络膜新生血管和GA分别进行分析时，eAMD和脉络膜新生动脉的相关性显著。GA组在某些情况下偏离了一般趋势，特别是外显子13（Q672Q）和18（D936E）等位基因定义的单倍型（数据未显示）。尽管这种偏差在不同病因方面可能是显著的，但它没有达到统计意义，很可能是因为所检查的GA病例数量相对较少。

对两个队列进行的连锁不平衡（LD）分析表明，在一个扩展的HF1型哥伦比亚队列的结果如所示图3; 所有样本的完整基因分型数据可根据要求提供(支持文本：统计分析). 外显子2-3区域的三个SNP位于几乎完全LD中，外显子7和9中的A307A和Y402H变体以及外显子13和18中的Q672Q和D936E变体也是如此。病例和对照组的单倍型估计确定了50%病例中最常见的高危单倍型，而对照组只有29%【OR=2.46，95%CI（1.95-3.11）】。24.2%的病例和8.3%的对照组存在该单倍型的纯合子[OR=3.51，95%CI（2.13-5.78）]。34%的对照组和18%的病例中发现了两种常见的保护性单倍型[OR=0.48，95%CI（0.33-0.69）和OR=0.54，95%CI=0.33-0.69）]。区分风险和保护性单倍型的SNP主要包含在外显子2和11之间的一个区域；该区域以外的SNP，例如启动子SNP和外显子13和18中的SNP增加的影响很小。

讨论

AMD和MPGNII中的HF1多态性。这里提供的数据将两个独立队列中大部分AMD病例与补体调节基因的特定多态性联系起来HF1型/CFH公司(39-41). 单倍型分析显示，半数AMD患者存在最常见的高危单倍型，而对照组为29%。与先前与AMD相关的遗传异常相比，所观察到的关联程度是惊人的(6，7，12-14). SNP关联的频率和程度在两个队列中相似；一些SNP在每个SNP中都与AMD高度显著相关。eAMD患者和脉络膜新生血管患者的相关性特别强，而GA患者的相关性较小。未发现其他与特定眼部表型的相关性。还鉴定出了几个保护性单倍型，进一步表明HF1型AMD发病机制中的作用。

MPGNII是一种罕见的与HF1缺乏相关的肾脏疾病，患者也会出现早发性黄斑水肿，这是AMD的标志性病变。相同的11个SNP如表1在20名无关的MPGNII患者中也进行了基因分型。大约70%的MPGNII病例携带HF1型高危单倍型，为特异性高频1单倍型是黄斑形成的关键因素，并增加了AMD相关黄斑病变的易感性。

HF1多态性的功能含义。大多数AMD相关HF1型SNP位于编码蛋白的重要功能域内(图2)由20个短一致重复序列（SCR）组成。SCR包含C3b、肝素、唾液酸和C反应蛋白的结合位点(图2). 因此，这些SNP可能通过表达水平、结合效率和/或其他特性的变化影响HF1功能。例如，外显子2 I62V变异体位于SCR2中，其中包括C3b结合位点，而外显子9 Y402H变异体则位于结合肝素和C反应蛋白的SCR7结构域中。有趣的是，IVS2剪接位点变异中TT插入的影响分析(https://splice.cmh.edu)建议在天然受体位点上游6bp处建立一个新的隐秘剪接受体。一些研究的SNP也可能影响HF1亚型的表达。例如，I62V存在于预测的外显子剪接增强子中(42). 其他常见SNP的功能后果可能不大，因为它们涉及晚发型表型，不受严格的进化约束(43).

HF1型具有更实质性影响的变异与早期的严重疾病有关，如非典型溶血性尿毒症综合征（aHUS）(40，41，44-46).HF1型导致aHUS的突变通常是限制FH1抑制功能的错义突变。尽管在对aHUS患者进行全面筛查后，仅约25-35%的患者中发现了可能的致病突变HF1型(44)在aHUS患者中，由257C>T（启动子）、A473A（第13外显子）和D936E（第18外显子(44). aHUS中的高危单倍型与AMD和/或MPGN没有重叠。值得注意的是，aHUS突变集中在HF1基因的3′端，仅产生全长HF1。相反，AMD高危单倍型位于产生全长HF1和截断（FHL1）蛋白的区域。因此，确定这两者的作用可能很重要HF1型-AMD中的衍生蛋白。

存在风险HF1型单倍型与替代途径的感染因子或非典型激活剂结合，可能会大大增加一个人对疾病的易感性。似乎不同形式的HF1型基因是在对激活补体替代途径的病原体作出反应时出现的。弱作用HF1型单倍型可以减少补体抑制，并对细菌感染提供更强的保护。弱等位基因也可能使个体易受宿主细胞/组织损伤，这可能是补体激活的结果。这些因素的综合作用很可能决定了由此产生的疾病表型的严重程度，范围从AMD到MPGN。

AMD患者HF1功能障碍的生物模型。补体系统的一个主要功能是防御传染源(47-49). 补体的激活触发一个放大的蛋白水解级联反应，导致激活表面的修饰、可溶性促炎性过敏毒素的释放和MAC的形成，MAC是一种通过形成跨膜孔促进细胞溶解的大分子复合物。不受控制的补体激活可导致宿主细胞和组织中的旁观者损伤。因此，HF1和其他循环和膜相关蛋白进化来调节系统(48).

补体成分谱，包括终末途径补体成分、活化特异片段和调节剂，已在树突状细胞（和/或邻近的RPE细胞）、骨髓内和/或与AMD的脉络膜毛细血管相关中确定(21-24，26-28，50，51). 有证据表明，细胞介导的事件也可能促成这一过程(29，52-54).

在这里，我们表明，HF1是补体C3成分的调节剂，也是有AMD病史的人类捐赠者的血肿成分。HF1与其配体C3b/iC3b在树突状体内含淀粉样蛋白的亚结构元素中共定位（图6，发表于支持信息在PNAS网站上），将这些结构作为子RPE空间中的候选补体激活子(25，50). 如C5b-9 IR所示，HF1和MAC共同分布于RPE-脉络膜界面，在既往有AMD病史的捐赠者的黄斑区最为活跃。

HF1和C5b-9的分布惊人地相似，这意味着大量MAC生成并沉积在RPE-脉络膜界面。这一发现表明高危人群编码的HF1蛋白HF1型单倍型可能具有减弱的补体抑制功能。与AMD相关的HF1变异体可能使RPE和脉络膜细胞处于替代途径介导的补体攻击的持续风险中。这些发现与AMD病理学主要表现在黄斑的事实相一致，并且BM水平的补体激活是血肿形成和BM完整性破坏过程中的关键因素(55)这与晚期新生血管性AMD有关。

这项研究中获得的数据也可能提供有关AMD既定风险因素的作用的见解，例如吸烟史，这是记录最为一致的AMD风险因素(1，2). 研究表明，香烟烟雾通过C3的修饰激活替代补体途径在体外(56). 类似过程的作用体内可能会促进眼部RPE-脉络膜界面的炎症反应，加速血栓形成，加剧AMD的遗传易感性HF1型单倍型。

这项研究的结果提供了强有力的证据，证明补体调节因子的一种特定的常见单倍型HF1型使个人易患AMD。结果还表明，在大部分AMD病例中，HF1介导的替代途径补体激活和激活系统的致病因子的调节异常。因此，参与补体激活及其调节的分子成为AMD治疗干预的主要靶点。

补充材料

支持信息：

致谢

我们感谢D.Bok博士、P.Dudley、M.Niesman、L.Donoso、P.Luthert、B.Martin、R.Mullins、N.Aptsiauri、Y.Wang、Q.Lu、V.Chong、A.Hughes、V.Sheffield、M.Radeke和P.Johnson博士的见解和有益讨论；J.Hoballah、J.Sharp、T.Krezowik、T.Weingeist、C.Boldt、J.Folk、T.Johnson、M.Wilkinson、A.Lotery、D.Zumbro、E.Stone、J.Sanders、P.Gouras、C.McAvoy、S.Thompson、L.Arbisser和A.Arbisser-博士为招募患者提供无休止的承诺和协助；L.Buckta、K.Betts、K.Peterson、C.Sweet、R.Lee、S.Baruah、J.Roos、R.Wolfe、S.McCormick、J.Donahue、J.Smith、S.Imhoff、K.Kelly和员工、T.Ali和员工、B.Murphy和员工以及T.Fisher提供技术支持；J.Requard和爱荷华州狮子队、俄勒冈州狮子队和佛罗里达州中部狮子眼库的工作人员；以及参加爱荷华州退休和老年中心，以致力于这项研究工作。最重要的是，我们感谢那些无私地为这项研究计划贡献时间和/或亲人的眼睛的个人和家庭；没有他们的参与，科学就无法向前发展。这项工作得到了美国国立卫生研究院拨款EY11515（给G.S.H.）、EY13435（给R.A.）、EY11527（给L.V.J.）和EY11521（给D.H.A.）的支持；卫生与公共服务部合同NO1-CO-12400（致医学博士）；美国黄斑变性基金会（G.S.H.）；国际视网膜研究基金会（G.S.H.）；眼科研究所；基金会战斗失明（R.A.）；Ruth和Milton Steinbach基金（G.S.H.和R.A.）；给黄斑变性研究中心的礼物；以及爱荷华州大学和哥伦比亚大学预防失明研究公司的无限制拨款。G.S.H.在贝尔法斯特皇后大学医学院担任名誉教授。

笔记

作者贡献：G.S.H.、M.D.和R.A.设计的研究；G.S.H、D.H.A.、L.V.J.、L.S.H.、A.J.T.、L.I.H.、J.L.H.、H.A.S.、J.D.B.、R.J.H.S、J.S.、C.C.W.K.、I.B.、A.K.O.、J.B.、J.Z.、J.E.M.、B.G.、M.D.和R.A.进行研究；G.S.H.提供了新的试剂/分析工具；G.S.H、D.H.A.、L.V.J.、L.S.H.、A.J.T.、L.I.H.、J.L.H.、H.A.S.、J.D.B.、R.J.H.S.、C.C.W.K.、I.B.、A.K.O.、J.B.、J.Z.、J.E.M.、B.G.、M.D.和R.A.分析数据；G.S.H.、D.H.A.、L.V.J.、M.D.和R.A.撰写了论文；G.S.H.、J.L.H.、H.A.S.、K.M.G.、G.S.、S.R.R.、S.C.、L.A.Y.、G.R.B.、J.C.M.和R.T.S.提供了患者DNA样本和临床病史信息。

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缩写：AMD，年龄相关性黄斑变性；eAMD，早期AMD；视网膜色素上皮；MAC，膜攻击复合物；BM，布鲁赫膜；膜增生性肾小球肾炎；单链构象多态性；GA，地理萎缩；IR，免疫反应性；OR，比值比；CI，置信区间。

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文章来自美国国家科学院院刊由以下人员提供美国国家科学院