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2005年3月11日在线发布。 数字对象标识:10.1186/1471-2091-6-4

图3

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HSF1阴性小鼠胚胎成纤维细胞的比较分析. (一个)HSF1和HSF1突变体S326A DNA结合能力的比较。使用HSE DNA探针和热处理或非热处理细胞的提取物进行电泳迁移率变化分析,这些细胞已于一天前转染凝胶顶部所示的结构。凝胶下方显示了相同样品的抗HSF1蛋白印迹,报告了不同结构HSF1形式的相对表达水平。HSF1/HSE:HSF1-DNA复合物;NS:非特异性信号,用作未加热细胞样品组的负荷控制,以及独立用于热处理细胞样品组;HS:在43°C下热处理30分钟;C: 未经热处理。(B类)热诱导内源性反式激活热休克蛋白70用印迹法显示的少量构建物和荧光素酶报告物HSP70-fLUC和pRL-CMV转染细胞中的基因。转染后一天,培养物要么未经处理(C),要么在43°C下热处理30分钟(HS)。在37°C下进一步培养6小时后制备提取物,并用于蛋白质印迹。顶部印迹用识别HSP70的抗体探测,而底部印迹用HSF1抗体探测。底部印迹显示突变型和野生型HSF1形式积累到类似水平。请注意,在与转染HSF1形式共迁移的所有通道中都存在微弱的非特异性信号。(C类)B.数据的定量比较(D类)对B中HSP70进行分析的相同提取物中的相对荧光素酶报告活性。本图显示了几个独立实验之一的代表性结果。

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