所用反式激活分析的验证、突变体S326A的反式激活分析以及用于磷酸化分析的FLAG-HSF1的分离. (一个)用报告基因混合物（LEXA fLUC和pRL CMV）和0–40 ng LEXA-HSF1共转染的96孔培养皿中细胞的反激活分析。C： 控制未加热电池；HS：电池在44°C下进行标准热处理30分钟。(B类)用0.5 ngβ-半乳糖苷酶表达结构（B-GAL）或0.5 ng LEXA-HSF1转染的细胞中HSF1-免疫活性蛋白的相对量。转染后一天制备的提取物通过抗HSF1蛋白印迹分析。给出了HSF1信号的量化，如顶部插入部分所示。请注意，插入物仅显示印迹的相关（扫描）部分，即大约60–100 kD的多肽大小。HSF1形式出现在代表非特异性信号的单个频带之上的几个紧密间隔的频带。(C类)含有免疫隔离FLAG-HSF1的考马斯蓝染色凝胶。M： 分子量为kD的标记如左图所示。注意，出现在98 kD标记处和下方的带簇通过平行抗HSF1蛋白印迹（未显示）被鉴定为HSF1形式。(D类)反激活分析比较用荧光素酶报告基因混合物和FLAG-LEXA-HSF1取代突变体S326A、亲本FLAG-LEXA-HSF1或B-GAL的表达构建体（0.5 ng）共转染的细胞中HSF1形式的活性。转染后一天，将细胞暴露于300μM CdCl2持续2小时（Cd）或进行标准热处理（HS），或未经处理（C）。显示了处理后6 h测定的萤火虫荧光素酶相对活性。(E类)在C下分析平行（热处理）培养物的FLAG western blot，比较转染后一天FLAG-LEXA-HSF1突变体S326A和亲本FLAG-LEXA-HSF1的表达水平。微管蛋白信号被用作负荷控制。印迹下方的数字表示在FLAG印迹中突变S326A和亲本FLAG-LEXA-HSF1信号的定量比较。
