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| 状态 |
2008年10月17日公开 |
| 标题 |
局部Rho-GTPase激活调节肿瘤细胞突起中的RNA动力学和分区 |
| 有机体 |
家犬 |
| 实验类型 |
按数组分析表达式
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| 总结 |
mRNA转运和局部蛋白翻译与突起的细胞结构域有关，如神经元生长锥，而对蛋白翻译的放松控制与肿瘤的恶性程度有关。我们在这里显示，激活的RhoA（而非Rac1）在MSV-MDCK-INV肿瘤细胞的伪足中富集，并且Rho、Rho激酶（ROCK）和肌球蛋白II调节RNA对这些肿瘤细胞域的微管依赖性靶向。ROCK抑制不影响假足肌动蛋白的周转，但显著降低假足RNA周转的动力学。基因阵列分析表明，所分析的总基因中，7.3%的基因在伪足和细胞体组分之间的差异大于1.6倍。其中，只有13.2%（261个基因）在伪足中富集，表明只有有限数量的总细胞mRNA在肿瘤细胞突起中富集。肿瘤假足信使核糖核酸队列和富含神经元过程的信使核糖核酸队列的比较确定了由M-Ras和Shp2蛋白磷酸酶的表达定义的肿瘤假足特异性信号网络。通过ROCK抑制将假足Rho/ROCK激活与特定mRNA的局部表达联系起来，M-Ras和Shp2 mRNA的假足表达减少。参与蛋白质翻译和信号传递的mRNA的假足蛋白富集表明，局部mRNA翻译调节不太稳定的信号分子的假足表达以及翻译这些mRNA的细胞机制。mRNA转运和局部蛋白翻译与突起的细胞结构域有关，如神经元生长锥，而对蛋白翻译的放松控制与肿瘤的恶性程度有关。我们在这里显示，激活的RhoA（而非Rac1）在MSV-MDCK-INV肿瘤细胞的伪足中富集，并且Rho、Rho激酶（ROCK）和肌球蛋白II调节RNA对这些肿瘤细胞域的微管依赖性靶向。ROCK抑制不影响假足肌动蛋白的周转，但显著降低假足RNA周转的动力学。基因阵列分析表明，所分析的总基因中，7.3%的基因在伪足和细胞体组分之间的差异大于1.6倍。其中，只有13.2%（261个基因）在伪足中富集，表明只有有限数量的总细胞mRNA在肿瘤细胞突起中富集。通过比较肿瘤伪足mRNA队列和富含神经元过程的mRNA队列，确定了由M-Ras和Shp2蛋白磷酸酶表达定义的肿瘤伪足特异性信号网络。通过ROCK抑制将假足Rho/ROCK激活与特定mRNA的局部表达联系起来，M-Ras和Shp2 mRNA的假足表达减少。参与蛋白质翻译和信号传递的mRNA的假足蛋白富集表明，局部mRNA翻译调节不太稳定的信号分子的假足表达以及翻译这些mRNA的细胞机制。假足Rho/ROCK激活可能通过刺激mRNA的假足移位，从而调节局部信号级联的表达，从而影响肿瘤细胞的迁移和转移。
关键词：肿瘤细胞，突起细胞域，伪足vs细胞体，RNA贩运
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| 总体设计 |
假足动物纯化——假足动物的纯化如前所述（Jia等人，J.Biol.Chem.280，30564-732005）。简单地说，107个MSV-MDCK-INV细胞被镀在100 mm 1um孔过滤器上，过滤器安装在100 mm Falcon Petri培养皿中的两个3-3.5”定制垫圈（Boulons Plus，Anjou，QC）之间，外部用琼脂糖密封，以防细胞泄漏到过滤器底部。培养24小时后，用含有0.1 mM Ca2+和1 mM Mg2+的冷PBS清洗过滤器4次，并清洗过滤器顶部（细胞体）和底部（假足）用玻璃盖片在冰镇裂解缓冲液中刮除的过滤器（20 mM Tris-HCl pH 7.6，0.5%NP-40，250 mM NaCl，3 mM EDTA，3 mM EGTA，含有新添加的2 mM DTT，0.5 mM PMSF，1 mM钒酸钠，2.5 mM氟化钠和1 uM亮普汀）。Affymetrix基因阵列-基因芯片在伦敦区域基因组中心（加拿大安大略省伦敦罗伯茨研究所；网址：http://www.lrge.ca). 使用Affymetrix GeneChip Scanner 3000扫描六只Affymotrix犬阵列（3个伪足，3个细胞体），并使用统计表达式算法参数的默认值、所有探针集的目标信号为150、标准化值为1，对GCOS1.2（Affymmetrix Inc.，Santa Clara，CA）生成的基因进行信号强度扫描。为了确定假足类和细胞体样本之间基因表达水平的显著差异，使用Partek Pro（密苏里州圣路易斯）进行了单向-ANOVA。显著调制基因被定义为绝对log2倍变化大于0.7的基因。通过Z评分标准化数据对所有6个样本进行分层聚类，将基因汇总在一起。
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| 贡献者 |
贾Z,山下TM,纳比IR |
| 引文 |
18845542 |
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| 提交日期 |
2008年10月17日 |
| 上次更新日期 |
2012年3月20日 |
| 联系人姓名 |
伊凡·罗伯特·纳比 |
| 电子邮件 |
irnabi@exchange.ubc.ca
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| 电话 |
604-822-7000
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| 组织名称 |
不列颠哥伦比亚大学
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| 部门 |
CPS公司
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| 门诊化验室 |
实验室编号：3.420
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| 街道地址 |
LSI，2350健康科学购物中心
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| 西蒂 |
温哥华 |
| 省/自治区 |
英国哥伦比亚 |
| 邮政编码 |
V6T1Z3型 |
| 国家 |
加拿大 |
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| 平台（1） |
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| 样品（6）
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| 关系 |
| 生物项目 |
PRJNA109537项目 |
