重标记全长蛋白质

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背景

什么是同位素标记?

同位素标记是一种用于化学和生物学的技术,其中分子中的一个或多个原子被该原子的同位素(通常是放射性同位素或稳定同位素)取代。这通常是为了帮助追踪原子通过化学反应或代谢途径的路径,或测量系统内物质的运动或分布。它还可以用于获取有关分子结构或功能的信息。

什么是同位素标记

由于生产同位素化学物质和异源蛋白质的方法成本高昂,因此迫切需要一种经济的15N/13C同位素标记策略。细胞培养中氨基酸的稳定同位素标记(SILAC)是一种多重定量蛋白质组学方法,将同位素(重)标记的氨基酸代谢并入整个蛋白质组。

Creative BioMart现在为6000种蛋白质提供了广泛的质谱(MS)标准。在HEK293T细胞中产生,并用[U-13C6,15N4]-L-精氨酸和[U-13C6,15N2]-L-赖氨酸标记,这些带有适当翻译后修饰的全长蛋白质是理想的鉴定和定量标准。

优势

  • 精密度:同位素标记允许对蛋白质进行非常具体和精确的鉴定和量化。
  • 稳定性:同位素在化学上与非放射性同位素相同,因此不会干扰蛋白质的正常功能或行为。
  • 敏感:同位素标记是高度敏感的,甚至可以检测到蛋白质表达或功能的微小变化。
  • 非破坏性
  • 多重标签:通过同位素标记,可以将多种同位素并入同一蛋白质中,不仅可以详细研究蛋白质的位置,还可以研究它与其他蛋白质或分子的相互作用。
  • 真实的翻译后修饰
  • 高数据一致性
  • 再现性高
  • 确定最佳SRM和MRM过渡
  • 适用于大多数类型的MS设备
  • 公司效率超过90%

应用

结构测定:核磁共振波谱和其他技术使用同位素标记来确定蛋白质的三维结构。特别标记的同位素在数据中提供了更高的分辨率和清晰度。

反应追踪:同位素标记可以跟踪蛋白质在系统内的反应或代谢。例如,标记的原子可以用来追踪生物系统中蛋白质的代谢途径。

量化:同位素标记有助于使用质谱法对复杂混合物中的蛋白质进行定量。

酶/底物研究:在酶底物研究中,同位素标记有助于确定机制和途径。

蛋白质-蛋白质相互作用:同位素标记也用于研究蛋白质相互作用、蛋白质折叠和动力学。

生物分子研究:同位素标记是生物分子研究的基础,包括药物的发现和开发。

蛋白质周转率研究:它可以用来测量蛋白质的合成和分解速率。

它还允许通过帮助理解反应速率和机理进行动力学研究。

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