无细胞体外蛋白表达

作为生物技术领域试剂的领先供应商,我们了解方便易用的系统对于蛋白质表达的重要性,包括对传统表达系统具有挑战性的大蛋白和膜蛋白。创意生物城开发了无细胞在体外表达系统,以满足对这些特定蛋白质类型的蛋白质合成的日益增长的需求。

什么是无细胞体外试验蛋白质表达?

无电池在体外蛋白质表达可以在所谓的“耦合”系统中进行,在同一反应混合物中同时进行RNA转录和蛋白质翻译。它是蛋白质研究中许多应用的优选选择,包括蛋白质标记和难以表达的蛋白质如膜蛋白和多种蛋白质复合物的表达的选择。建立该系统只需要两个基本条件:编码目标蛋白的模板和包含必要转录和翻译分子机制的反应溶液。

无细胞体外蛋白表达

细胞提取物提供反应溶液的全部或大部分分子

用于mRNA转录的RNA聚合酶

多肽翻译用核糖体

tRNA和氨基酸

酶辅因子与能源

蛋白质折叠所必需的细胞成分

无细胞的优势体外试验蛋白质表达

  • 能够表达对宿主细胞有毒的蛋白质
  • 高通量,可同时表达多种不同蛋白质
  • 反应条件很容易改变,可以控制蛋白质的修饰
  • 表达不同类型蛋白质的能力
  • 能够产生细胞毒性蛋白
  • 操作简单,节省时间

Cell-Free的服务内容体外试验蛋白质表达

1

基因合成加密码子优化

  • 领先的密码子优化系统
  • 稀有密码子、密码子偏倚等因素的分析与优化

时间表:1-2周

2

向量构造

  • 将目标基因克隆到表达载体中
  • 质粒测序
  • 质体制备

时间表:1周

蛋白质表达与纯化

  • 表达式条件优化
  • 蛋白质表达评估
  • 各种蛋白质纯化方法

时间表:1-2周

4

可选服务

时间线:1-2周

5

质量控制

  • SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
  • 蛋白质印迹
  • 质谱法

时间表:<1周

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Creative BioMart提供多种无细胞在体外系统。选择无细胞系统应根据蛋白质的生物学性质、应用和用于蛋白质表达的模板。如果您想更多地讨论您的项目,我们的团队可以指导您完成无细胞表达的过程。

不同的无细胞表达系统

系统 优势 缺点
大肠杆菌提取
  • 已建立的系统
  • 成本相对较低
  • 翻译速度快
  • 可与纳米盘组装结合用于膜蛋白
  • 可用的转基因菌株
  • 真核生物系统无翻译后修饰
  • 需要进行密码子使用优化
小麦胚芽
  • 已建立的系统
  • 在真核生物无细胞系统中产量通常最高
  • 可溶性表达率高
  • 适合合成大蛋白(~200 kDa)
  • 提取物制备耗时,成本相对较高
  • 蛋白质质谱研究中观察到一些背景磷酸化
  • 无糖基化
昆虫细胞裂解液
  • 适合合成大蛋白
  • Cap独立翻译
  • N-糖基化可能
  • 二硫键的形成
  • 相对较新的系统
  • 蛋白质产量低于大肠杆菌或小麦胚芽系统
  • 成本相对较高
兔网状内皮细胞溶解物
  • 已建立的系统
  • 哺乳动物系统
  • Cap独立翻译
  • 经常用于研究
  • 对添加剂敏感
  • 无糖基化
  • 观察到脱靶蛋白的共表达
  • 血红蛋白含有90%的蛋白质
人细胞裂解液
  • 一些蛋白质修饰
  • 低收益率
  • 对添加剂敏感

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