主要功能和细节
重组生产(无动物),实现高批次一致性和长期供应安全 兔单克隆抗体[EPR24770-16]至TGN46 适用于:IHC-P、IP、流式细胞仪(内部)、ICC/IF、WB 敲除已验证 反应对象:人类
相关共轭物和制剂
概述
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产品名称 -
描述 兔单克隆抗体[EPR24770-16]至TGN46 -
寄主物种 兔子 -
经过测试的应用程序 -
物种反应性 与以下物质反应: 人类 -
免疫原 合成肽。 此信息为Abcam和/或其供应商专有。 -
阳性对照 WB:野生型A549,HepG2全细胞裂解物。 IHC-P:人类大脑、人类肾脏、人类结肠和人类肺癌组织。 ICC/IF:HepG2细胞。 流式细胞内:HepG2细胞,A549细胞。 IP:HepG2全细胞裂解物。
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一般注意事项
属性
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表格 液体 -
储存说明 在4°C下装运。 短期储存在+4°C下(1-2周)。 交付时,等分。 储存于-20°C。 避免冷冻/解冻循环。 -
存储缓冲区 pH值:7.2 防腐剂:0.01%叠氮化钠 成分:59.94%PBS、40%甘油(甘油、甘油)、0.05%BSA -
浓度信息加载。。。 -
纯度 纯化蛋白A -
克隆性 单克隆 -
克隆编号 EPR24770-16型 -
同位素 免疫球蛋白G -
研究领域
相关产品
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兼容的辅助设备 -
同位素控制 -
KO细胞裂解物
应用
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目标
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功能 可能参与调节进出跨高尔基网络的膜流量。 -
组织特异性 等位基因TGN46广泛表达。 TGN51异构体在胎儿肺和肾中更为丰富。 同型TGN48在胚胎肾脏和早幼粒细胞中几乎不表达。 -
手机定位 细胞膜。 高尔基体>反高尔基网络膜。 主要在转高尔基体网络中。转高尔基网络和细胞表面之间的循环通过内体返回。 -
UniProt提供的信息 -
数据库链接 -
替代名称 TGN 46抗体 TGN 51抗体 TGN38抗体
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图像
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流式细胞术叠加直方图显示用ab271183染色的野生型A549(绿线)和TGOLN2敲除A549(红线)。 用80%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%PBS-Triton X-100渗透15分钟。然后将细胞培养在含有10%正常山羊血清的1x PBS中,以阻止非特异性蛋白-蛋白质相互作用,随后使用抗体(ab271183)(1x 10 6 100μl,1.0μg/ml(1/1980)),22°C,30分钟。 将二级抗体山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor®488)预吸附液在1/4000的温度下于22°C孵育30分钟 同位素对照抗体重组兔IgG,单克隆[EPR25A]-同位素对照在与一级抗体相同的浓度和条件下使用(野生型A549-黑线,TGOLN2敲除A549-灰线)。 未标记样本也用作对照(为了简单起见,未显示此行)。 使用50 mW蓝光激光器(488nm)和525/40带通滤波器采集了超过5000个事件。 在相同条件下,该抗体在用4%甲醛固定的A549(10分钟)/用0.1%PBS-Triton X-100渗透15分钟后发出阳性信号。 -
所有车道: 稀释1/1000的抗TGN46抗体[EPR24770-16](ab271183) 车道1: 野生型A549(人肺癌上皮细胞)全细胞裂解液(40µg) 车道2: TGOLN2(TGN46)敲除A549(人肺癌上皮细胞)全细胞裂解液(40µg) 3号车道: HepG2(人肝癌上皮细胞)全细胞裂解液(20µg) 次要 所有车道: 山羊抗狂犬病IgG H&L(IRDye®800CW)( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye®680RD)( 约216776 )以1/10000稀释。 预测的带宽大小: 51千Da 观察到的频带大小: 80-100千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 封闭稀释缓冲液和浓度:3%NFDM/TBST。 1-3车道 :合并信号(红色和绿色)。 绿色:在80-100 kDa时观察到ab271183。 红色:装载控制 约8245 (小鼠单克隆[6C5]到GAPDH)在36 kDa时观察到。 1-2车道 Western blot显示ab271183与野生型A549细胞中的TGN46反应,TGN46敲除细胞系中观察到信号丢失 约269510 (敲除细胞裂解物 约269672 ). 对野生型A549和TGN46敲除细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 ab271183和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别以1/1000稀释度和1/20000稀释度在4°C下培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸附液开发印迹( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye®680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1/10000稀释1小时。 -
所有车道: 稀释1/1000的抗TGN46抗体[EPR24770-16](ab271183) 车道1: HepG2(人肝癌上皮细胞)全细胞裂解物 车道2: A549(人肺癌上皮细胞)全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗狂犬病IgG H&L(HRP)( ab97051型 )稀释1/50000 预测的带宽大小: 51千Da 观察到的频带大小: 80-100千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 封闭和稀释缓冲液和浓度:5%NFDM/TBST。 观察到的分子量与文献中描述的一致(PMID:15616480;PMID:22909819)。 新鲜制备裂解液并立即用于WB中,以尽量减少蛋白质降解。 曝光时间:第1道:26秒; 第二车道:125秒。 -
石蜡包埋的人类大脑组织的免疫组织化学分析,以1/2000(0.297 ug/ml)的ab271183标记TGN46,然后使用现成的LeicaDS9800(Bond™Polymer Refine Detection)。 人脑阳性染色。 该切片在室温下与ab271183孵育30分钟。 在莱卡生物系统BOND®RX仪器上进行免疫染色,苏木精对其进行复染。 仅限二级抗体对照:二级抗体是现成的LeicaDS9800(Bond™Polymer Refine Detection)。 使用Tris-EDTA缓冲液(pH 9.0,表位检索溶液2)进行20分钟的热介导抗原检索。 -
石蜡包埋人肾组织标记TGN46的免疫组织化学分析,在1/2000(0.297 ug/ml)时使用ab271183,然后使用现成的LeicaDS9800(Bond™Polymer Refine Detection)。 人肾脏呈阳性染色。 该切片在室温下与ab271183孵育30分钟。 在莱卡生物系统BOND®RX仪器上进行免疫染色,苏木精对其进行复染。 仅限二级抗体对照:二级抗体是现成的LeicaDS9800(Bond™Polymer Refine Detection)。 使用Tris-EDTA缓冲液(pH 9.0,表位检索溶液2)进行20分钟的热介导抗原检索。 -
石蜡包埋人结肠组织标记TGN46的免疫组织化学分析,在1/2000(0.297 ug/ml)时使用ab271183,然后使用现成的LeicaDS9800(Bond™Polymer Refine Detection)。 人结肠阳性染色。 该切片在室温下与ab271183孵育30分钟。 在莱卡生物系统BOND®RX仪器上进行免疫染色,苏木精对其进行复染。 仅限二级抗体对照:二级抗体是现成的LeicaDS9800(Bond™Polymer Refine Detection)。 使用Tris-EDTA缓冲液(pH 9.0,表位检索溶液2)进行20分钟的热介导抗原检索。 -
石蜡包埋人肺癌组织标记TGN46的免疫组织化学分析,在1/2000(0.297 ug/ml)时使用ab271183,然后使用现成的LeicaDS9800(Bond™Polymer Refine Detection)。 人肺癌的阳性染色。 该切片在室温下与ab271183孵育30分钟。 在莱卡生物系统BOND®RX仪器上进行免疫染色,苏木精对其进行复染。 仅限二级抗体对照:二级抗体是现成的LeicaDS9800(Bond™Polymer Refine Detection)。 使用Tris-EDTA缓冲液(pH 9.0,表位检索溶液2)进行20分钟的热介导抗原检索。 -
4%对甲醛固定、0.1%TritonX-100渗透HepG2细胞的免疫荧光分析,在1/50(11.88µg/mL)稀释度下用ab271183标记TGN46,然后 约150081 羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor®488)预吸附抗体,稀释度为1/1000(2µg/mL)(绿色)。 共聚焦图像显示HepG2细胞中的高尔基标记共定位染色。 公元169276年 使用抗-GM130小鼠多克隆抗体-顺高尔基标记物在1/200(5µg/mL)稀释度下对微管蛋白进行反染(红色)。 核染色为DAPI(蓝色)。 阴性对照1 :仅二级抗体对照: 约150081 山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor®488)以1/1000(2µg/mL)稀释度预吸附。 阴性对照2 : 公元169276年 抗GM130小鼠多克隆抗体-顺高尔基标记1/200(5μg/ml)和二级抗体 约150081 山羊抗狂犬病IgG H&L(Alexa Fluor®488)以1/1000(2µg/mL)稀释度预吸附。 -
TGN46从0.35 mg HepG2(人肝癌上皮细胞)全细胞裂解液10 ug中用ab271183以1/30稀释(0.35 mg裂解液中2 ug)免疫沉淀。 使用ab271183在1/1000稀释度下对免疫沉淀进行Western blot。 用于IP二级抗体(HRP)的VeriBlot( 阿布131366 )以1/5000稀释度使用。 车道1 :HepG2(人肝癌上皮细胞)全细胞裂解液10μg 2号车道 :HepG2全细胞裂解物 3号车道 :兔单克隆IgG( 约172730 )代替HepG2全细胞裂解液中的ab271183 阻塞和稀释缓冲液和浓度:5%NFDM/TBST。 曝光时间:50秒 新鲜制备裂解液并立即用于IP中,以尽量减少蛋白质降解。 根据WB结果,在通道2中观察到的较低波段可能是由孵化期间的降解引起的。
协议
数据表和文件
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