主要功能和细节
重组生产(无动物),实现高批次一致性和长期供应安全 兔单克隆[EPR3506]到HMGB1 适用于:Flow Cyt(Intra)、WB、IHC-P 淘汰验证 反应:老鼠,人类
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相关共轭物和制剂
概述
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产品名称 -
描述 兔单克隆[EPR3506]到HMGB1 -
寄主物种 兔子 -
经过测试的应用程序 -
物种反应性 反应: 老鼠,人类 预计用于: 老鼠 -
免疫原 人HMGB1 aa 50-150内的合成肽。 确切的顺序是专有的。 数据库链接: P09429号 -
阳性对照 WB:SKBR3、Hap1、HeLa、Jurkat、Molt4细胞裂解物。 ICC/IF:人体肝组织。 流式细胞仪(内部):HeLa细胞。
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一般注意事项
属性
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表格 液体 -
储存说明 在4°C下装运。 交付后,将等分样品储存在-20°C下。 避免重复冷冻/解冻循环。 -
存储缓冲区 pH值:7.20 防腐剂:0.01%叠氮化钠 成分:9%PBS、40%甘油(甘油、甘油)、0.05%BSA、50%组织培养上清液 -
浓度信息加载。。。 -
纯度 蛋白质A纯化 -
克隆性 单克隆的 -
克隆编号 EPR3506型 -
同位素 免疫球蛋白G -
研究领域
相关产品
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替代版本 -
兼容的辅助设备 -
同种型对照 -
KO细胞系 -
KO细胞裂解物 -
重组蛋白
应用
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目标
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功能 多功能氧化还原敏感蛋白,在不同的细胞隔室中具有不同的作用。 细胞核中是主要的染色质相关非组蛋白之一,作为DNA伴侣参与复制、转录、染色质重塑、V(D)J重组、DNA修复和基因组稳定性。 建议成为一种通用的核酸生物传感器。 促进宿主对无菌和感染信号的炎症反应,并参与先天和适应性免疫反应的协调和整合。 细胞质中作为免疫原核酸的传感器和/或伴侣,涉及TLR9介导的免疫反应的激活,并介导自噬。 作为危险相关分子模式(DAMP)分子,在组织损伤期间增强免疫反应。 释放到细胞外环境可以结合DNA、核小体、IL-1β、CXCL12、AGER亚型2/sRAGE、脂多糖(LPS)和脂磷壁酸(LTA),并通过多种表面受体的参与激活细胞。 在细胞外室中,完全减少的HMGB1(由坏死释放)作为趋化因子,二硫键HMGB1作为细胞因子(积极分泌),磺酰HMGB1则(由凋亡细胞释放)促进免疫耐受(PubMed:23519706,PubMed:33446148,PubMet:23994764,PubMer:25048472)。 具有促血管生成活性(根据相似性)。 可能参与血小板活化(根据相似性)。 与磷脂酰丝氨酸和磷脂酰乙醇酰胺结合(通过相似性)。 与RAGE结合介导神经元生长信号(通过相似性)。 可能在扩大聚谷氨酰胺(polyQ)蛋白质的积累中起作用,例如亨廷顿蛋白(HTT)或TBP(PubMed:23303669,PubMed:25549101)。 核功能归因于HGMB1的完全降低。 与染色质结合并结合DNA,优先选择非标准DNA结构,如单链DNA、含DNA的十字形或弯曲结构、超螺旋DNA和ZDNA。 可以弯曲DNA并通过环化增强DNA的灵活性,从而通过增强转录因子结合和/或使远程调控序列接近,提供一种机制来促进各种基因启动子的活性(PubMed:20123072)。 可能在核苷酸切除修复(NER)中具有增强作用(通过相似性)。 然而,使用体外系统在NER中的效果却有矛盾的报道(PubMed:19446504,PubMed:19360789)。 可能参与错配修复(MMR)和基底切除修复(BER)通路(PubMed:15014079,PubMed:16143102,PubMet:17803946)。 可能参与双绞线断裂修复,如非同源端接(NHEJ)(通过相似性)。 通过充当RAG复合物的辅因子参与V(D)J重组:通过刺激切割和RAG蛋白在保守重组信号序列(RSS)的23bp间隔区结合起作用(通过相似性)。 体外可以从高度弯曲的DNA中置换组蛋白H1(根据相似性)。 可以重组标准核小体,导致转录因子结合的结构约束放松(通过相似性)。 增强固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)(如SREBF1)与其同源DNA序列的结合,并增加其转录活性(通过相似性)。 促进TP53与DNA的结合(PubMed:23063560)。 建议以与HSPB1相关的转录依赖方式参与线粒体质量控制和自噬; 然而,这一功能受到了质疑(通过相似性)。 可以调节端粒酶复合体的活性,并可能参与端粒的维持。 在细胞质中,建议通过与BECN1的竞争性相互作用分离BECN1:BCL2复合物,导致自噬激活(PubMed:20819940)。 参与氧化应激介导的自噬(PubMed:21395369)。 可以保护BECN1和ATG5免受钙蛋白酶介导的分裂,从而控制其促自噬和促凋亡功能,并调节炎症相关细胞损伤的程度和严重程度(通过相似性)。 在髓系细胞中,通过促进自噬对内毒素血症和细菌感染具有保护作用(通过相似性)。 参与巨噬细胞对CpG-DNA的反应中TLR9的内体移位和激活。 细胞外室(主动分泌或被动释放后)参与炎症反应的调节。 完全降低的HGMB1(释放后会被氧化)与CXCL12相关,在组织损伤的初始阶段介导炎症细胞的募集; CXCL12:HMGB1复合物触发CXCR4同二聚化(PubMed:22370717)。 诱导单核细胞衍生的未成熟树突状细胞的迁移,并似乎调节与AGER/RAGE和ITGAM相关的中性粒细胞的粘附和迁移功能(通过相似性)。 可结合各种类型的DNA和RNA,包括微生物非甲基化CpG-DNA,以增强对核酸的先天免疫反应。 建议在混杂的DNA/RNA传感中发挥作用,该传感与特定模式识别受体随后的区分传感相配合(通过相似性)。 促进与AGER/RAGE相关的细胞外DNA诱导的AIM2炎症小体激活(PubMed:24971542)。 二硫HMGB1与跨膜受体结合,如AGER/RAGE、TLR2、TLR4和可能的TREM1,从而激活其信号转导途径。 介导细胞因子/趋化因子的释放,如TNF、IL-1、IL-6、IL-8、CCL2、CCL3、CCL4和CXCL10(PubMed:122765338,PubMed:18354232,PubMed:19264983,PubMed:20547845,PubMed:224474694)。 促进巨噬细胞刺激的自然杀伤(NK)细胞与其他细胞因子如IL-2或IL-12协同分泌干扰素-γ(PubMed:15607795)。 TLR4被认为是促进巨噬细胞活化的主要受体,通过TLR4进行信号传递似乎与LY96/MD-2有关(PubMed:20547845)。 在细菌LPS或LTA介导的炎症反应中,炎症反应与内毒素结合,并将其转移到CD14,以向相应的TLR4:LY96和TLR2复合物发出信号(PubMed:18354232,PubMed:21660935,PubMet:25660311)。 通过与ACER/RAGE的关联促进肿瘤增殖(通过相似性)。 可通过IL1R1:IL1RAP受体复合物结合IL1-beta和信号(PubMed:18250463)。 与A类CpG结合可激活与TLR9、MYD88和AGER/RAGE相关的浆细胞样树突状细胞中的细胞因子生成,并可激活自身反应性B细胞。 通过含HMGB1的染色质免疫复合物,还可以通过B细胞受体(BCR)依赖性和ACER/RAGE依赖性机制(通过相似性)促进B细胞对内源性TLR9配体的反应。 抑制巨噬细胞吞噬凋亡细胞; 该功能依赖于多聚腺苷二磷酸核糖化,并与凋亡细胞细胞表面的磷脂酰丝氨酸结合(根据相似性)。 适应性免疫可能通过激活效应T细胞和抑制调节性T(TReg)细胞来增强免疫(PubMed:15944249,PubMed:22473704)。 相反,在不涉及效应或调节性T细胞的情况下,表达淋巴毒素LTA:LTB异源三聚体的T细胞需要肿瘤浸润和激活,从而促进肿瘤恶性进展(通过相似性)。 也有报道限制T细胞增殖(根据相似性)。 释放的HMGB1:细胞凋亡过程中形成的核小体复合物可以通过TLR2发出信号,诱导细胞因子的产生(PubMed:19064698)。 参与凋亡细胞诱导免疫耐受; 当凋亡细胞释放其促炎活性时,活性氧物种(ROS)依赖的氧化作用(特别是Cys-106)可中和其促炎作用(PubMed:18631454)。 在巨噬细胞活化过程中,活化的淋巴细胞衍生的自凋亡DNA(ALD-DNA)促进ALD-DNA向内体的募集。 -
组织特异性 无处不在。 以血小板表达(PubMed:11154118)。 -
序列相似性 属于HMGB家族。 包含2个HMG盒DNA绑定域。 -
域 HMG盒2介导促炎细胞因子刺激活性并与TLR4结合(PubMed:12765338,PubMed:20547845)。 然而,在凋亡诱导免疫耐受的背景下,不参与介导免疫原活性(PubMed:24474694)。 酸性C末端结构域形成一个柔性结构,可以与HMG盒在分子内可逆地相互作用,并调节与DNA和其他蛋白质的结合(PubMed:23063560)。 -
翻译后 修改 丝氨酸残基磷酸化。 NLS两个区域的磷酸化是细胞质易位和分泌所必需的(PubMed:17114460)。 LPS刺激后在多个部位乙酰化(PubMed:22801494)。 核定位信号(NLS1和NLS2)中赖氨酸残基的乙酰化导致细胞质定位和随后的分泌(通过相似性)。 Lys-3上的乙酰化导致优先结合DNA末端并削弱DNA弯曲活性。 半胱氨酸残基Cys-23、Cys-45和Cys-106的还原/氧化,以及可能的分子内二硫键,包括Cys-23和Cys-46,在不同的细胞隔室中产生具有特定功能活性的不同氧化还原形式:1-完全还原HMGB1(HMGB1C23hC45hC106h),2-二硫基HMGB1 和3-磺酰基HMGB1(HMGB1C23soC45soC106so)。 LPS刺激后分泌的PARP1可使多聚ADP-核糖化。 CASP1的体外裂解释放出一种含有HMG盒1的肽,该肽可能介导免疫原性活性; 该肽拮抗凋亡诱导的免疫耐受(PubMed:24474694)。 可被凝血酶水解:血栓调节蛋白复合物; 减少与肝素的结合和促炎活性。 -
手机定位 核心。 染色体。 细胞质。 保密。 细胞膜。 内体。 内质网高尔基体中间隔室。 基态主要为核。 在细胞质和细胞核之间穿梭(PubMed:12231511,PubMed:17114460)。 在自噬刺激下从细胞核转移到细胞质(PubMed:20819940)。 巨噬细胞在细胞外环境中的释放需要激活NLRC4或NLRP3炎性体(根据相似性)。 通过扩散将坏死细胞被动释放至细胞外环境,包括完全还原的HGMB1,随后被氧化(PubMed:19811284)。 也由凋亡细胞释放(PubMed:16855214,PubMed:18631454)。 各种免疫细胞和非免疫细胞(如巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞、树突状细胞和自然杀伤细胞)对各种刺激(如脂多糖和细胞因子)的主动分泌涉及通过分泌溶酶体的非常规分泌过程(PubMed:12231511,PubMed:14532127,PubMet:15944249)。 血浆细胞对LPS的反应而分泌(通过相似性)。 发现于活化血小板表面(PubMed:11154118)。 -
UniProt提供的信息 -
数据库链接 Entrez基因: 3146 人类 Entrez基因: 100862258 鼠标 Entrez基因: 15289 鼠标 Entrez基因: 25459 老鼠 Omim公司: 163905 人类 瑞士保护银行: P09429号 人类 瑞士保护银行: 第63158页 鼠标 瑞士保护银行: 第63159页 老鼠
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备选名称 两性霉素抗体 染色体蛋白、非组蛋白、HMG1抗体 DKFZp686A04236抗体
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图像
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所有车道: 稀释1/1000的抗-HMGB1抗体[EPR3506](ab92310) 车道1: 野生型HeLa细胞裂解物 车道2: HMGB1 CRISPR/Cas9编辑的HeLa细胞裂解物 每条泳道20µg的裂解物/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 25千Da 观察到的频带大小: 30千Da 为什么实际频带大小与预测的不同? 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色-在30 kDa下观察到ab92310。 红色-抗GAPDH抗体[6C5]-负载控制( 约8245 )在37 kDa时观察到。 western blot显示ab92310与野生型HeLa细胞中的HMGB1反应。 当CRISPR/Cas9编辑细胞系时,观察到预期大小的信号丢失 约255395 (CRISPR/Cas9编辑的细胞裂解物 约263782 )已使用。 在25kDa以下的通道2中观察到的带可能代表截断形式和劈开碎片。 对野生型HeLa和HMGB1 CRISPR/Cas9编辑的HeLa细胞裂解液进行SDS-PAGE分析。 在室温下,将膜在0.1%的TBST和3%的脱脂奶粉中封闭1小时。 ab92310和抗-GAPDH抗体[6C5]-负荷控制( 约8245 )分别以1/1000稀释度和1/2000稀释度在4°C下过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
用细胞内流式细胞术ab92310染色人宫颈癌细胞系HeLa中的HMGB1。 用4%多聚甲醛固定细胞,用90%甲醇渗透,样品与一级抗体以1/20的稀释度孵育。 山羊抗兔IgG(Alexa Fluor ® 488)以1/2000的稀释度作为次级抗体。 同型对照:兔单克隆IgG(黑色) 未标记对照:未与第一抗体和第二抗体孵育的细胞(蓝色) -
所有车道: 稀释1/1000的抗-HMGB1抗体[EPR3506](ab92310) 车道1: 野生型HAP1全细胞裂解物 车道2: HMGB1敲除HAP1全细胞裂解物 3号车道: Jurkat全细胞裂解物 车道4: HeLa全细胞裂解物 每条泳道20µg的裂解物/蛋白质。 预测的带宽大小: 25千Da 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色-在30kDa下观察到ab92310。 红色-装载控制, 约9484 ,在37 kDa下观察到。 ab92310在野生型HAP1细胞中识别HMGB1,因为HMGB1敲除细胞在预期MW时信号丢失。 在野生型和敲除型细胞中观察到额外的交叉反应带。 对野生型和HMGB1敲除的样品进行SDS-PAGE。 ab92310和 约9484 (小鼠抗GAPDH负荷对照)分别在4°C下以1/1000稀释度和1/20000稀释度孵育过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床 ab216773号 和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床 约216776 二级抗体在成像前在室温下以1/20000稀释1小时。 -
所有车道: 稀释1/1000的抗-HMGB1抗体[EPR3506](ab92310) 车道1: SKBR3细胞裂解物 车道2: HeLa细胞裂解物 3号车道: Molt4细胞裂解物 每车道10µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 羊抗兔HRP 1/2000稀释 预测的带宽大小: 25千Da 观察到的频带大小: 25千Da -
ab92310以1/100稀释度对HMGB1在人肝脏中进行免疫组织化学染色,石蜡包埋组织。 二级抗体建议使用HRP/AP聚合抗体。 在开始IHC染色方案之前,执行热介导抗原检索。
数据表和文件
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SDS下载 -
数据表下载
工具书类 (10)
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