概述
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产品名称 人ANPEP(CD13)敲除THP-1细胞系 -
亲代细胞系 THP-1型 -
有机体 人类 -
突变描述 通过使用CRISPR/Cas9实现的敲除,纯合:外显子2中的2个碱基缺失 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 免疫细胞化学(ICC)、Sanger测序、Western Blot(WB) -
经过测试的应用程序 -
生物安全等级 1 -
一般注意事项 建议控制: 人野生型THP-1细胞系( 约275477 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: RPMI+10%FBS+0.05 mMβ-巯基乙醇 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2-4x10的适当细胞培养瓶中 5 细胞/mL。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行缩放。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 5.THP-1细胞从冷冻保存中恢复缓慢,因此可能在数天内无法进行继代培养。 在此期间,应尽可能多地保留细胞,仅在细胞密度达到8x10时进行传代培养 5 细胞/mL。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 细胞应在2-4x10处播种 5 细胞/mL,达到8x10时传代 5 细胞/mL。不建议细胞密度超过1x10 6 细胞/mL。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute和ERS Genomics limited的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
属性
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 暂停 -
组织 血液 -
单元格类型 急性单核细胞白血病 -
疾病 急性单核细胞白血病 -
性别 男性 -
无支原体 是的 -
储存说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储缓冲区 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
目标
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功能 广泛特异性氨肽酶。 在胃和胰腺蛋白酶水解蛋白质产生的肽的最终消化中发挥作用。 可能在胆固醇结石病的发病机制中起关键作用。 可能参与多种细胞类型调节肽的代谢,包括小肠和肾小管上皮细胞、巨噬细胞、粒细胞和中枢神经系统突触膜。 发现能切割与呈递细胞的主要组织相容性复合体II类分子结合的抗原肽,并降解突触连接处的神经递质。 也被认为是子宫内膜中IL-8生物利用度的调节器,因此可能有助于血管生成的调节。 用作急性髓细胞白血病的标记物,并在肿瘤侵袭中发挥作用。 在人类冠状病毒229E(HCoV-229E)感染的情况下,充当HCoV-299E尖峰糖蛋白的受体。 也可介导人巨细胞病毒(HCMV)感染。 -
组织特异性 在肾、肠和呼吸道的上皮细胞中表达; 粒细胞、单核细胞、成纤维细胞、内皮细胞、血脑屏障的脑周细胞、中枢神经系统细胞的突触膜。 也在子宫内膜基质细胞中表达,但在子宫内膜腺细胞中不表达。 发现于血管生成组织的血管系统、恶性胶质瘤和多种肿瘤类型的淋巴结转移中,但不存在于正常组织的血管中。 在血浆中发现了一种可溶形式。 在癌症患者的血浆和渗出液中发现其升高。 -
序列相似性 属于肽酶M1家族。 -
域 氨基酸260-353对于介导HCoV-229E感染易感性(在猪/人嵌合研究中)和更具体的氨基酸288-295(诱变研究)至关重要。 -
翻译后 修改 硫酸盐。 N-和O-糖基化。 可能经历蛋白质水解并产生可溶性形式。 -
手机定位 细胞膜。 细胞质>胞浆。 还检测到可溶性形式。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
相关产品 抗CD13抗体[EPR4058]( 约108310 ) 抗CD13抗体[EPR4059]( 约108382 ) 抗CD13抗体[EPR4059]-BSA和无叠氮化合物( 约196576 ) 抗CD13抗体[22A5]( 大约2013年6月 ) 抗CD13抗体[EPR4058]-低内毒素,无叠氮( ab227111号 ) 抗CD13抗体[SP187]( 约227663 ) 抗CD13抗体[SP187]-BSA和无叠氮化合物( 约245741 ) 抗CD13抗体[WM15]-BSA和无叠氮化合物( ab252261 ) 抗CD13抗体[EPR4058]-BSA和无叠氮化合物( 约271872 ) 抗CD13抗体[WM15]( 约7417 )
应用
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图像
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流式细胞术重叠直方图显示野生型THP1(绿线)和ANPEP敲除的THP1细胞(ab273759) 2013年6月 (红线)。 细胞在含有10μg/ml人IgG和10%正常山羊血清的1x PBS中孵育,以阻断FC受体和非特异性蛋白-蛋白质相互作用,随后抗体( 大约2013年6月 )(1x10个 6 100μl,1μg/ml),在4°C下保持30分钟。 二级抗体山羊抗鼠IgG H&L(Alexa Fluor ® 488,预吸附)( ab150117号 )于2000年1月在4°C下使用30分钟。 同种对照抗体为小鼠IgG2aκ( 约18413年 )在与主要抗体相同的浓度和条件下使用(野生型THP1细胞-黑线;ANPEP敲除THP1的细胞ab273759-灰线)。 未标记样本也用作对照(为了简单起见,未显示此行)。 使用50 mW蓝光激光器(488nm)和525/40带通滤波器采集了超过5000个事件。 -
约227663 野生型THP-1细胞(顶面板)和ANPEP敲除THP-1的细胞(底面板)中CD13染色(ab273759)。 用4%多聚甲醛固定细胞(10分钟),然后用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞与 约227663 浓度为1μg/ml 约7291 (鼠抗α-管蛋白单克隆抗体)在4°C下以1/1000稀释过夜,然后在室温下用山羊抗兔IgG二级抗体(Alexa Fluor ® 488) ( 约150081 )以2μg/ml(绿色显示)和山羊对小鼠IgG的二级抗体(Alexa Fluor ® 594) ( ab150120型 )浓度为2μg/ml(以红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共聚焦显微镜(Leica Microsystems TCS SP8)拍摄图像。 -
所有车道: 抗CD13抗体[SP187]( 约227663 )稀释1/400 车道1: 野生型THP-1细胞裂解物 车道2: ANPEP敲除THP-1细胞裂解物 3号车道: PANC-1细胞裂解物 车道4: HEK-293细胞裂解物 每个泳道30µg的裂解物/蛋白质。 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 160千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约227663 在160 kDa时观察到。 红色-加载控制 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])。 约227663 western blot显示与野生型THP-1细胞中的CD13反应,ANPEP敲除细胞系ab273759(敲除细胞裂解物 约275505 ). 对野生型和ANPEP敲除的THP-1细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 TBS-T(0.1%吐温)中3%牛奶中的膜被堵塞 ® )孵育前 约227663 和 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])在4°C下过夜,分别以1/400和1/20000稀释。 印迹与山羊抗兔IgG H&L(IRDye)孵育 ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( ab216776年 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
流式细胞术重叠直方图显示野生型THP1(绿线)和ANPEP敲除的THP1细胞(ab273759) 约7417 (红线)。 细胞在含有10μg/ml人IgG和10%正常山羊血清的1x PBS中孵育,以阻断FC受体和非特异性蛋白-蛋白质相互作用,随后抗体( 约7417 )(1x10 6 100μl,1μg/ml),在4°C下保持30分钟。 二级抗体山羊抗鼠IgG H&L(Alexa Fluor ® 488,预吸附)( ab150117号 )于2000年1月在4°C下使用30分钟。 同种对照抗体为小鼠IgG1κ( 约170190 )在与主要抗体相同的浓度和条件下使用(野生型THP1细胞-黑线;ANPEP敲除THP1的细胞ab273759-灰线)。 未标记样本也用作对照(为了简单起见,未显示此行)。 使用50 mW蓝光激光器(488nm)和525/40带通滤波器采集了超过5000个事件。 -
约108382 野生型THP-1细胞(顶面板)和ANPEP敲除THP-1的细胞(底面板)中CD13染色(ab273759)。 用100%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞与 约108382 稀释度为1/1000 约7291 (鼠抗α-管蛋白单克隆抗体)在4°C下以1/1000稀释过夜,然后在室温下用山羊抗兔IgG二级抗体(Alexa Fluor ® 488) ( 约150081 )以2μg/ml(绿色显示)和山羊对小鼠IgG的二级抗体(Alexa Fluor ® 594) ( ab150120型 )浓度为2μg/ml(以红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共聚焦显微镜(Leica Microsystems TCS SP8)拍摄图像。 -
约108310 野生型THP-1细胞(顶面板)和ANPEP敲除THP-1的细胞(底面板)中CD13染色(ab273759)。 用4%多聚甲醛固定细胞(10分钟),然后用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞与 约108310 稀释1/500 约7291 (鼠抗α-管蛋白单克隆抗体)在4°C下以1/1000稀释过夜,然后在室温下用山羊抗兔IgG二级抗体(Alexa Fluor ® 488) ( 约150081 )以2μg/ml(绿色显示)和山羊对小鼠IgG的二级抗体(Alexa Fluor ® 594) ( ab150120型 )浓度为2μg/ml(以红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共聚焦显微镜(Leica Microsystems TCS SP8)拍摄图像。 -
约7417 野生型THP-1细胞(顶面板)和ANPEP敲除THP-1的细胞(底面板)中CD13染色(ab273759)。 用4%多聚甲醛固定细胞(10分钟),然后用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞与 约7417 浓度为2.5μg/ml 约6046 (兔多克隆到β-管蛋白)在4°C下以1/1000稀释过夜,然后在室温下用山羊抗小鼠IgG二级抗体(Alexa Fluor ® 488) ( ab150117号 )以2μg/ml(绿色显示)和山羊对兔IgG的二级抗体(Alexa Fluor ® 594) ( 约150080 )浓度为2μg/ml(以红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共聚焦显微镜(Leica Microsystems TCS SP8)拍摄图像。 -
所有车道: 抗CD13抗体[EPR4059]( 约108382 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型THP-1细胞裂解物 车道2: ANPEP敲除THP-1细胞裂解物 3号车道: PANC-1细胞裂解物 车道4: HEK-293细胞裂解物 每个泳道30µg的裂解物/蛋白质。 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 160千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约108382 在160 kDa时观察到。 红色-加载控制 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])。 约108382 western blot显示与野生型THP-1细胞中的CD13反应,ANPEP敲除细胞系ab273759(敲除细胞裂解物 约275505 ). 对野生型和ANPEP敲除的THP-1细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 TBS-T(0.1%吐温)中3%牛奶中的膜被堵塞 ® )孵育前 约108382 和 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])在4°C下过夜,稀释率分别为1/1000和1/20000。 印迹与山羊抗兔IgG H&L(IRDye)孵育 ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( ab216776年 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗CD13抗体[EPR4058]( 约108310 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型THP-1细胞裂解物 车道2: ANPEP敲除THP-1细胞裂解物 3号车道: PANC-1细胞裂解物 车道4: HEK-293细胞裂解物 每个泳道30µg的裂解物/蛋白质。 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 160千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约108310 在160 kDa时观察到。 红色-加载控制 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])。 约108310 western blot显示与野生型THP-1细胞中的CD13反应,ANPEP敲除细胞系ab273759(敲除细胞裂解物 约275505 ). 对野生型和ANPEP敲除的THP-1细胞裂解物进行SDS-PAGE。 用荧光蛋白印迹(TBS)封闭溶液封闭膜,然后用 约108310 和 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])在4°C下过夜,稀释率分别为1/1000和1/20000。 印迹与山羊抗兔IgG H&L(IRDye)孵育 ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( ab216776年 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
纯合子:外显子2中2 bp缺失
数据表和文件
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SDS下载 -
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