概述
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产品名称 -
亲代细胞系 希拉牌手表 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现基因敲除,第9外显子14 bp缺失,第9外显子2 bp缺失 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 免疫细胞化学(ICC)、Sanger测序、Western Blot(WB) -
经过测试的应用程序 -
生物安全水平 2 -
一般注意事项 建议控制: 人野生型HeLa细胞系( 约255928 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞沉淀重新悬浮在5mL预热的培养基中,并使用血细胞仪或替代细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化准则: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute和ERS Genomics limited的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
属性
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/暂停 粘附剂 -
组织 子宫颈 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:11、12 D13S317:12、13.3 D7S820:8、12 D16S539:9、10 vWA:16、18 TH01:7型 TPOX:8、12 CSF1PO:9、10 -
抗生素耐药性 嘌呤霉素1.00µg/ml -
无支原体 是的 -
存储说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储缓冲区 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
目标
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功能 调节有机阴离子和药物从细胞质的输出。 介导谷胱甘肽和谷胱甘苷结合物、白三烯C4、雌二醇-17-β-o-葡萄糖醛酸苷、甲氨蝶呤、抗病毒药物和其他外源性药物的ATP依赖性转运。 对抗癌药物产生耐药性。 水解ATP效率低。 -
组织特异性 肺、睾丸和外周血单个核细胞。 -
序列相似性 属于ABC运输器超家族。 ABCC系列。 共轭转运体(TC 3.A.1.208)亚家族。 包含2个ABC跨膜1型结构域。 包含2个ABC转运蛋白域。 -
细胞定位 细胞膜。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图像
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所有车道: 抗MRP1抗体[EPR21062]( 约233383 )稀释1/1000 车道1: 野生型HeLa(人宫颈腺癌上皮细胞系)全细胞裂解物 车道2: MRP1敲除HeLa(宫颈腺癌人上皮细胞系)全细胞裂解物 车道3: 野生型A549(人肺癌细胞系)全细胞裂解物 车道4: MRP1敲除A549(人肺癌细胞系)全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 山羊抗兔IgG H&L(IRDye®800CW)预吸附( ab216773号 )稀释1/20000 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 171千Da 观察到的频带大小: 250千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约233383 在250 kDa时观察到。 红色-加载控制 约7291 在50 kDa时观察到。 ab233383年 抗MRP1抗体[EPR21062]显示与野生型HeLa细胞中的MRP1特异性反应。 敲除细胞系ab265256(敲除细胞裂解物 ab257242号 )被使用。 对野生型和MRP1基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 约233383 和抗α-管蛋白抗体[DM1A]-负荷控制( 约7291 )分别在4°C下以1/1000稀释度和1/20000稀释度培养过夜。 用山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸附床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸附床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
约233383 野生型HeLa细胞中MRP1染色(顶面)和ABCC1敲除HeLa的细胞(ab265256)(底面)。 用4%多聚甲醛固定细胞(10分钟),然后用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞与 约233383 稀释度为1/100 约7291 (鼠抗α-管蛋白单克隆抗体)在4°C下以1/1000稀释过夜,然后在室温下用山羊抗兔IgG二级抗体(Alexa Fluor ® 488) ( 约150081 )以2μg/ml(绿色显示)和山羊对小鼠IgG的二级抗体(Alexa Fluor ® 594) ( ab150120型 )浓度为2μg/ml(以红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems TCS SP8)拍摄图像。 -
流式细胞术重叠直方图显示野生型HeLa(绿线)和ABCC1基因敲除HeLa细胞(ab265256) 约260038 (红线)。 用80%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1% PBS-Triton X-100渗透15分钟。然后将细胞培养在含有10%正常山羊血清的1x PBS中,以阻断非特异性蛋白-蛋白质相互作用,然后再接种抗体( 约260038 )(1x10个 6 在22°C下,在100μl(0.2μg/ml)中放置30分钟。 二级抗体山羊抗兔IgG H&L(Alexa Fluor ® 488,预吸附)( 约150081 )于2000年1月在22°C下使用30分钟。 同型对照抗体为兔IgG(单克隆)( 约172730 )在与主要抗体相同的浓度和条件下使用(野生型HeLa-黑线ABCC1敲除HeLa-灰线)。 未标记样本也用作对照(为了简单起见,未显示此行)。 使用50mW蓝色激光器(488nm)和525/40带通滤波器收集了>5000个事件的采集。 -
等位基因1:第9外显子14 bp缺失。 -
等位基因2:第9外显子2 bp缺失。 -
ABCC1敲除HeLa细胞、低汇合和高汇合示例(左上和右上)以及野生型HeLa电池的代表性图像,低汇合与高汇合(左下和右下)显示典型的粘附上皮样形态。 使用EVOS XL Core显微镜以10倍放大率拍摄图像。
数据表和文件
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SDS下载 -
数据表下载