概述
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产品名称 用于IP检测的VeriBlot®(HRP) -
偶联物 人力资源计划 -
经测试应用 -
常规说明 IP检测试剂的VeriBlot是免疫印迹试剂,能够无故障检测免疫印迹目标蛋白带,而不受变性IgG的干扰。 这允许检测(协同)免疫沉淀蛋白,而无需使用IgG重链(50kDa)和轻链(25kDa”)进行掩蔽。 一般来说,这种干扰往往源于二级抗体,二级抗体识别免疫沉淀过程中与抗原一起释放的一级抗体或来自裂解物本身的内源性IgG。 IP检测试剂的VeriBlot只识别天然(非还原)抗体,因此,如果免疫沉淀物完全还原,重链和轻链的检测将被高度最小化。 斑点数量: 至少20 (基于5 ml牛奶中1:200的稀释度)。 重要协议注释(此信息以中文提供 在这里 ) 1.IP检测试剂VeriBlot(HRP)检测以下IgG多克隆和单克隆抗体: 物种 单克隆同位素 牛 IgG抗体 2 山羊 IgG抗体 2 人类 IgG抗体 1 ,IgG 2 ,IgG 4 鼠标 IgG抗体 2a个 ,IgG 2亿 ,IgG 3 注: 如果使用鼠标IgG 1 ,进行斑点杂交以确定兼容性。 IP检测试剂VeriBlot(HRP)可能无法检测到小鼠IgG 1 . 老鼠 IgG抗体 2摄氏度 兔子 总IgG 绵羊 IgG抗体 2 2.用于IP检测试剂的VeriBlot(HRP)优先检测非还原形式,而非还原、SDS改性形式。 3.将IP样品完全还原/变性后,再加载到western blot上。 将样品在SDS样品缓冲液中煮沸5-10分钟,必要时增加SDS量。 4.牛奶应作为免疫印迹的阻断蛋白。 注: 如果没有清楚地检测到变性和印迹的IgG,可以使用以下步骤来增加样品中变性IgG的量: -增加还原剂浓度 -煮沸样品以帮助减少IgG二硫键 -使用齿状电泳条件 提供了完整的故障排除指南 在这里 .
应用
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图片
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ab128874年 人HEK293全细胞裂解液中的免疫沉淀Brd4。 将1000µg细胞裂解液与一级抗体(50 mM Tris中的1µg/mg)和基质(蛋白g)在4°C下孵育16小时。 对于western blotting,使用HRP-共轭Veriblot For IP检测试剂(ab131366)(1/10000)确认免疫沉淀成功。 -
ab32371号 人HCT116 p53全细胞裂解物中的免疫沉淀Bak。 将100µg细胞裂解液与一级抗体(1/100)和基质(蛋白A/g)在4°C下孵育4小时。 对于western blotting,使用HRP-共轭Veriblot For IP检测试剂(ab131366)(1/2000)确认免疫沉淀成功。 -
约6148 人HEK293全细胞裂解液中免疫沉淀IRAK2。 将1000µg细胞裂解液与一级抗体(1µg/mg)和基质(蛋白g)在4°C下孵育16小时。 对于western blotting,使用HRP-共轭Veriblot For IP检测试剂(ab131366)(1/10000)确认免疫沉淀成功。 -
IP样品制备: 使用0.5mg Hela全细胞提取物、5µg兔多克隆组蛋白H3(单甲基K9)和50µl蛋白g磁珠(+)免疫沉淀组蛋白H3。 对照组(-)未添加抗体。 将抗体与蛋白G珠搅拌培养10分钟,将在RIPA缓冲液中稀释的Hela全细胞提取液裂解液添加到每个样品中,并在搅拌下再培养10分钟。 通过添加40µl SDS负载缓冲液洗脱蛋白质,并在70℃下培养10分钟 o个 C类; Western blot条件: 在SDS-PAGE凝胶上分离10µl每个样品,转移到硝化纤维素膜上,用5%BSA封闭,并用 约9045 . 检测: 用于IP检测试剂(HRP)(ab131366)的VeriBlot,稀释度为1/1000。
数据表及文件
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数据表下载
文献 (81)
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