主要功能和细节
小鼠单克隆[HJ1]到ABCA1 适用于:WB、Flow Cyt、IHC-P 敲除已验证 反应对象:小鼠、大鼠、人类 同位素:IgG2b
概述
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产品名称 -
描述 小鼠单克隆抗体 [HJ1]至ABCA1 -
宿主 鼠标 -
经测试应用 -
种属反应性 与反应: 老鼠、老鼠、人 -
免疫原 与ABCA1(N端)相对应的重组片段。 ABCA1的50 kDa N端细胞外环 数据库链接: O95477号 -
阳性对照 IHC-P:肝实质和肝组织。 流动:HepG2细胞。 WB:Hap1、未处理的THP-1、THP-1首先用100ng/ml PAM处理72小时,然后用100ngg/ml LPS替换5小时,然后再添加300ng/ml BFA额外3小时全细胞裂解液,未处理的HepG2、用20uM T0901317处理HepG216小时全细胞分解液,以及U-87 MG全细胞裂解物。
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常规说明 这种针对ABCA1的单克隆抗体已通过Western blot的敲除验证。 在野生型细胞中观察到预期的ABCA1条带,在敲除细胞中没有看到该条带,但也观察到其他非特异性条带。 数据显示在本数据表中。 该抗体克隆由Abcam制造。 如果您需要为您的实验定制缓冲配方或共轭物,请联系 orders@abcam.com . 多年来,生命科学行业一直面临着再现性危机。 Abcam正在通过我们的一系列重组单克隆抗体和用于金标准验证的敲除编辑细胞系引领解决这一问题。 购买前请检查此产品是否满足您的需求。 如果您有任何问题、特殊要求或疑虑,请在购买之前向我们发送查询和/或联系我们的支持团队。 以下是本产品的推荐替代品,以及出版物、客户评论和问答
性能
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形式 液体 -
存放说明 在4°C下装运。 交付后,将等分试样储存在-20°C或-80°C下。 避免重复冷冻/解冻循环。 -
存储溶液 pH值:7.40 防腐剂:0.02%叠氮化钠 成分:PBS,6.97%L-精氨酸 一些批次含有6.97%的L-精氨酸作为稳定剂。 有关批次特定缓冲区的信息,请联系我们的科学支持团队。 -
浓度信息加载。。。 -
纯度 蛋白质G纯化 -
克隆 单克隆 -
克隆编号 HJ1型 -
同种型 IgG2b -
轻链类型 卡帕 -
研究领域
相关产品
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备选版本 -
兼容的辅助设备 -
同位素控制 -
重组蛋白
应用
靶标
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功能 cAMP依赖性和磺酰脲敏感性阴离子转运蛋白。 影响细胞内胆固醇转运的关键看门人。 -
组织特异性 广泛表达,但在巨噬细胞中最丰富。 -
疾病相关 ABCA1缺陷是1型高密度脂蛋白缺乏症(HDLD1)的原因[MIM:205400]; 也称为无精蛋白血症或丹吉尔病(TGD)。 HDLD1是一种隐性疾病,其特征是血浆中缺乏高密度脂蛋白(HDL)胆固醇、胆固醇酯积聚、早发冠心病(CAD)、肝脾肿大、复发性周围神经病变以及进行性肌肉萎缩和虚弱。 ABCA1缺陷是2型高密度脂蛋白缺乏症(HDLD2)的原因[MIM:604091]; 也称为家族性低α脂蛋白血症(FHA)。 HDLD2为常染色体显性遗传。 其特点是适度低HDL胆固醇,易患早发冠心病(CAD),细胞胆固醇流出减少。 -
序列相似性 属于ABC运输器超家族。 ABCA家族。 包含2个ABC转运蛋白域。 -
结构域 具有两个同源半体的多功能多肽,每个半体包含一个疏水性膜锚定域和一个ATP结合盒(ABC)域。 -
翻译后修饰 Ser-2054上的磷酸化调节磷脂流出。 DHHC8的棕榈酰化对膜定位至关重要。 -
细胞定位 膜。 -
UniProt提供的信息 -
数据库链接 -
别名 ABC 1抗体 ABC转运蛋白1抗体 ABC-1抗体
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图片
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通道1:野生型HAP1全细胞裂解物(20µg) 车道2:空 通道3:ABCA1敲除(KO)HAP1全细胞裂解物(20µg) 1-3号车道:合并信号灯(红色和绿色)。 绿色-在240 kDa时观察到ab66217。 红色负载控制, 约176560 ,在50 kDa下观察到。 ab66217在野生型HAP1细胞中检测到ABCA1的预期带,而在ABCA1基因敲除的HAP1电池中未发现该带,尽管还发现了其他非特异性带。 对野生型和ABCA1基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。 Ab66217和 约176560 (兔抗α-管蛋白负荷对照)分别在4℃、1µg/ml和1/10000稀释液下培养过夜。 用山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床 约216772 和山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床 ab216777号 二级抗体在成像前在室温下以1/10000稀释1小时。 -
流式细胞术重叠直方图显示Hep G2细胞经ab66217染色(红线)。 用80%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%PBS-Triton X-100渗透15分钟。细胞在含有10%的1x PBS中培养; 正常山羊血清阻止抗体(ab66217)(1x10)与非特异性蛋白相互作用 6 100µl,5.0µg/ml(1/0)),在22°C下放置30分钟。 将二级抗体山羊抗鼠IgG H&L(Alexa Fluor®488)预吸附液在1/4000的温度下于22°C孵育30分钟 同位素对照抗体(黑线)为小鼠IgG2b、kappa单克隆抗体[7E10G10]-在与一级抗体相同的浓度和条件下使用的同位素对照。 未标记样本(蓝线)也用作对照。 使用50 mW蓝光激光器(488nm)和525/40带通滤波器采集了超过5000个事件。 -
所有车道: 抗-ABCA1抗体[HJ1](ab66217),浓度为1µg/ml 车道1: 脑(小鼠)组织裂解物 车道2: 脑(大鼠)组织裂解物 3号车道: HepG2(人肝癌细胞系)全细胞裂解物 车道4: 肝(小鼠)组织裂解物 车道5: 肝(大鼠)组织裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 小鼠IgG-H&L(HRP)山羊多克隆次级抗体,1/5000稀释预吸附 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 254千帕 观察到的频带大小: 254千帕 其他波段位于: 70千Da。 我们不确定这些额外波段的身份。 暴露时间: 4分钟 Abcam建议使用牛奶作为阻塞剂。 该印迹是在TA缓冲系统下使用3-8%醋酸三钠凝胶产生的。 凝胶在150V下运行60分钟,然后在30V下转移到硝化纤维膜上70分钟。 然后使用3%牛奶将膜封闭一小时,然后在4°C下与ab66217孵育过夜。 使用与HRP结合的抗鼠抗体检测抗体结合,并使用ECL显影液进行可视化。 -
使用自动化系统(DAKO Autostainer Plus)对人类肝脏中的ABCA1进行ab66217(4µg/ml)染色。 使用该方案,整个肝实质都有适度的细胞膜染色。 在Dako-PT连接中,用Dako 3在pH 9.0的1 AR缓冲液EDTA中对切片进行复水,并回收抗原。 将载玻片在3%过氧化氢中甲醇中过氧化物酶封闭10分钟。 然后用Dako蛋白块将其封闭10分钟(PBS中含有0.25%酪蛋白),然后与一级抗体孵育20分钟,并用Dako-Envision Flex扩增试剂盒检测30分钟。 用二氨基联苯胺进行5分钟的比色检测。 用血红素对载玻片进行复染,盖玻片置于DePeX下。 请注意,对于手动染色,建议优化一级抗体浓度和孵育时间。 可能需要信号放大。 -
在Leica Bond上进行的人肝福尔马林固定石蜡包埋组织切片中ABCA1染色的IHC图像 TM公司 系统使用标准方案F。使用柠檬酸钠缓冲液(pH6,表位检索溶液1)热介导抗原检索对切片进行预处理20分钟。 然后在室温下将切片与0.2µg/ml的ab66217孵育15分钟,并使用HRP共轭紧凑聚合物系统进行检测。 DAB被用作显色剂。 然后用苏木精对切片进行复染,并用DPX固定。 对于其他IHC染色系统(自动化和非自动化),客户应优化可变参数,如抗原回收条件、初级抗体浓度和抗体孵育时间。 -
所有车道: 稀释1/1000的抗-ABCA1抗体[HJ1](ab66217) 车道1: 未经处理的THP-1(人单核细胞白血病单核细胞)全细胞裂解物 车道2: THP-1首先用100ng/ml PAM处理72小时,然后用100ng/ml LPS替换5小时,然后再添加300ng/ml BFA再进行3小时的全细胞裂解液 3号车道: 未经处理的HepG2(人肝癌上皮细胞)全细胞裂解物 车道4: 用20uM T0901117处理HepG2 16小时全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 1/5000稀释度的过氧化物酶结合山羊抗鼠IgG(H+L) 预测的带宽大小: 254千帕 观察到的频带大小: 254400千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? 暴露时间: 20秒 封闭和稀释缓冲液: 5%NFDM/TBST。 ab129002号 用作1/10000稀释度的负荷控制,然后是二级抗体 ab97051型 稀释1/20000。 较高的谱带可能是糖基化形式(PMID:16873719)。 -
所有车道: 稀释1/1000的抗-ABCA1抗体[HJ1](ab66217) 车道1: U-87 MG(人胶质母细胞瘤-星形细胞瘤上皮细胞)全细胞裂解物 车道2: 293T(人胚胎肾上皮细胞)全细胞裂解物 3号车道: SH-SY5Y(人神经母细胞瘤上皮细胞)全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 次要 所有车道: 1/5000稀释度的过氧化物酶结合山羊抗鼠IgG(H+L) 预测的带宽大小: 254千帕 观察到的频带大小: 254千帕 暴露时间: 10秒
实验方案
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载
文献 (21)
梁C 等。 白藜芦醇通过调节SIRT1-FoxO1途径介导的胆固醇代谢改善骨关节炎的进展。 调解人炎症 2023:2936236 (2023). 公共医学:36643587 郑YK 等。 MiR-122-5p通过靶向非小细胞肺癌中的p53调节甲羟戊酸途径。 细胞死亡病 14:234 (2023). 公共医学:37005437 吴A 等。 ABCA1转运体通过调节人黑色素瘤细胞的质膜组织来促进其运动。 生物研究 56:32 (2023). 公共医学:37312227 王X 等。 胆固醇和饱和脂肪酸协同促进前列腺癌的恶性进展。 肿瘤形成 24:86-97 (2022). 公共医学:34954451 吕Q 等。 通过磁电刺激选择性激活V1中ABCA1/ApoA1信号,通过调节突触可塑性改善抑郁症。 i科学 25:104201 (2022). 公共医学:35479414