概述
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产品名称 -
亲代细胞系 A549型 -
有机体 人类 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 西部印迹(WB) -
经测试应用 -
生物安全水平 1 -
常规说明 虽然我们的目标是为客户提供纯合克隆,但可行性将取决于蛋白质的生物学特性。 如果只实现了杂合编辑,您将收到结果通知,并被要求确认细胞系是否可接受。 所有克隆都将附带DNA测序数据和突变描述。 建议控制: 人野生型A549细胞系( 约288558 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 冷冻保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: F-12K+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞沉淀重新悬浮在5mL预热的培养基中,并使用血细胞仪或替代细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 三 -1x10个 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为6x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。 不要超过7x10 4 细胞/厘米 2 。
本产品受The Broad Institute和ERS Genomics limited的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 。 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 肺 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 癌 -
性别 男性 -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 参与碱基切除修复(BER)途径,通过催化参与染色质结构和DNA代谢的有限数量受体蛋白的聚(ADP-核糖基)化。 这种修饰是在DNA损伤后发生的,是导致DNA链断裂修复的检测/信号通路中的一个必要步骤。 介导APLF和CHFR的聚(ADP-核糖基)化。 积极调节MTUS1的转录,消极调节MTUS2/TIP150的转录。 -
序列相似性 包含1个BRCT域。 包含1个PARP字母数字域。 包含1个PARP催化域。 包含2个PARP型锌指。 -
翻译后修饰 通过PRKDC进行磷酸化。 DNA损伤后发生磷酸化,可能是ATM或ATR引起的。 PARP2核糖基化的聚ADP。 多聚ADP-核糖基化介导CHD1L向DNA损伤位点的募集。 S-亚硝基化,导致抑制转录调节活性。 -
细胞定位 核心。 -
UniProt提供的信息
应用
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图片
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所有车道: 抗PARP1抗体[EPR18461]( 约191217 )稀释度为1/1000 车道1: 20µg野生型A549对照星形孢菌素(0μM,72小时)细胞裂解物 车道2: 野生型A549处理的staurosporine(3 uM,24 h)细胞裂解液(20µg) 3号车道: 20µg PARP1敲除物A549对照staurosporine(0 uM,72 h)细胞裂解液 车道4: 20µg的PARP1敲除A549处理的staurosporine(3 uM,24 h)细胞裂解液 车道5: 20µg的空细胞裂解液 车道6: HAP1处理的Staurosporine(2uM,4h)细胞裂解液,20µg 7号车道: HAP1车辆控制Staurosporine(0uM,4h)细胞裂解液(10µg) 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 125千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot:抗PARP1抗体[EPR18461]( 约191217 )以1/1000稀释度染色,以绿色显示; 小鼠抗α-管蛋白[DM1A]( 约7291 )以1/20000稀释度加载控制染色,以洋红色显示。 在Western blot中, 约191217 显示为与PARP1特异结合。 在野生型A549细胞裂解液中观察到125 kDa的条带,在PARP1敲除细胞系ab276094(敲除细胞裂解液Abcam Pools)中未观察到该大小的信号。 为了生成此图像,分析了野生型和PARP1敲除A549细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中5%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L 800CW和山羊抗小鼠IgG H&L 680RD,稀释度为1/2000。 -
所有车道: 抗PARP1抗体[E102]( ab32138型 )稀释度为1/1000 车道1: 20µg野生型A549对照星形孢菌素(0μM,72小时)细胞裂解物 车道2: 野生型A549处理的staurosporine(3 uM,24 h)细胞裂解液(20µg) 3号车道: 20µg PARP1敲除物A549对照staurosporine(0 uM,72 h)细胞裂解液 车道4: 20µg的PARP1敲除A549处理的staurosporine(3 uM,24 h)细胞裂解液 车道5: 20µg的空细胞裂解液 车道6: HAP1处理的Staurosporine(2uM,4h)细胞裂解液,20µg 7号车道: HAP1车辆控制Staurosporine(0uM,4h)细胞裂解液(10µg) 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 125千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot:抗PARP1抗体[E102]( ab32138型 )以1/1000稀释度染色,以绿色显示; 小鼠抗α-管蛋白[DM1A]( 约7291 )以1/20000稀释度加载控制染色,以洋红色显示。 在Western blot中, ab32138型 显示为与PARP1特异结合。 在野生型A549细胞裂解液中观察到125 kDa的条带,在PARP1敲除细胞系ab276094(敲除细胞裂解液Abcam Pools)中未观察到该大小的信号。 为了生成此图像,分析了野生型和PARP1敲除A549细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温中5%牛奶中的膜被堵塞 ® 20(TBS-T),然后在4°C下与一级抗体孵育过夜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L 800CW和山羊抗小鼠IgG H&L 680RD,稀释度为1/2000。 -
所有车道: 抗分离PARP1抗体[SP276]( 约225715 )稀释度为1/100 车道1: 野生型A549对照staurosporine(0 uM,72 h)细胞裂解物 车道2: 野生型A549处理的staurosporine(3 uM,24 h)细胞裂解物 3号车道: PARP1敲除A549对照星形孢菌素(0μM,72小时)细胞裂解物 车道4: PARP1敲除A549处理的staurosporine(3 uM,24 h)细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 使用ECL技术开发。 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 125.27千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot:抗PARP1抗体[SP276]( 约225715 )以1/100稀释度染色,以绿色显示; 小鼠抗α-管蛋白[DM1A]( 约7291 )以1/20000稀释度加载控制染色,以洋红色显示。 在Western blot中, 约225715 显示为与PARP1特异结合。 在野生型A549细胞裂解液中观察到27/125 kDa的条带,在PARP1敲除细胞系中未观察到该大小的信号。 为了生成此图像,分析了野生型和PARP1敲除A549细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 在4°C下与一级抗体孵育过夜之前,在荧光蛋白印迹(基于TBS)封闭溶液中封闭膜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L 800CW和山羊抗小鼠IgG H&L 680RD,稀释度为1/2000。 -
所有车道: 抗分离PARP1抗体[E51]( ab32064年 )稀释度为1/10000 车道1: 野生型A549对照staurosporine(0 uM,72 h)细胞裂解物 车道2: 野生型A549处理的staurosporine(3 uM,24 h)细胞裂解物 3号车道: 野生型A549对照staurosporine(3 uM,72 h)细胞裂解物 车道4: PARP1敲除A549处理的staurosporine(3 uM,24 h)细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 使用ECL技术开发。 在还原条件下进行。 观察到的频带大小: 27千帕 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot:抗PARP1抗体[E51]( ab32064年 )以1/10000稀释度染色,以绿色显示; 小鼠抗α-管蛋白[DM1A]( 约7291 )以1/20000稀释度加载控制染色,以洋红色显示。 在Western blot中, 约32064 显示为与PARP1特异结合。 在野生型A549细胞裂解液中观察到27kDa的条带,在PARP1敲除细胞系中未观察到该大小的信号。 为了生成此图像,分析了野生型和PARP1敲除A549细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 在与一级抗体在4°C下孵育过夜之前,将膜封闭在TBS-0.1%Tween®20(TBS-T)中的3%牛奶中。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L 800CW和山羊抗小鼠IgG H&L 680RD,稀释度为1/2000。 -
WT蛋白第310个AA后56bp缺失
数据表及文件
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