概述
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产品名称 -
亲代细胞系 A549型 -
有机体 人类 -
突变描述 利用CRISPR/Cas9实现敲除,纯合子:外显子3 97 bp缺失 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
经测试应用 -
生物安全水平 1 -
规则说明 建议控制: 人野生型A549细胞系( 约275463 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 冷冻保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: F-12K+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬浮液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)洗涤小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 三 -1x10个 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为6x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。 不要超过7x10 4 细胞/厘米 2 .
本产品受The Broad Institute和ERS Genomics limited的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
性能
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 肺 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 癌 -
性别 男性 -
无支原体 是的 -
存放说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储溶液 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
靶标
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功能 具有多种生物功能的细胞因子。 它是急性期反应的有效诱导剂。 在B细胞最终分化为分泌Ig的细胞中发挥重要作用,参与淋巴细胞和单核细胞的分化。 它诱导骨髓瘤和浆细胞瘤生长,并诱导神经细胞分化作用于B细胞、T细胞、肝细胞、造血祖细胞和CNS细胞。 也可作为肌细胞因子。 它在肌肉收缩后排入血液,起到增加脂肪分解和改善胰岛素抵抗的作用。 -
疾病相关 IL6的遗传变异与幼年型类风湿关节炎(RASJ)易感性相关[MIM:604302]。 一种炎症性关节疾病,在16岁之前开始全身性发作。 它代表与严重关节外特征和偶尔致命并发症相关的青少年关节炎亚组。 在疾病活跃期,患者表现出典型的每日高烧、消逝性黄斑疹、淋巴结病、肝脾肿大、浆膜炎、肌痛和关节炎。 注:IL6启动子多态性与HIV感染男性发生卡波西肉瘤的终生风险相关。 -
序列相似性 属于IL-6超家族。 -
翻译后修饰 N-和O-糖基化。 -
细胞定位 保密。 -
UniProt提供的信息
相关产品
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生物化学制品 -
KO细胞裂解物 -
重组蛋白 -
相关产品
应用
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图片
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所有车道: 抗IL-6抗体[EPR22565-204]( ab233551型 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型A549车辆控制IL-1b(0 ng/mL,24 h),布雷费尔丁A(5 ug/mL,最后6 h)细胞裂解物 车道2: 野生型A549处理的IL-1b(20 ng/mL,24 h)、Brefeldin A(5 ug/mL,最后6 h)细胞裂解物 3号车道: IL-6敲除物A549车辆控制IL-1b(0 ng/mL,24 h),布雷费尔丁A(5 ug/mL,最后6 h)细胞裂解物 车道4: IL-6敲除A549处理的IL-1b(20 ng/mL,24 h)、Brefeldin A(5 ug/mL,最后6 h)细胞裂解物 每车道30µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 23千帕 观察到的频带大小: 25千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? Western blot假彩色图像:抗IL-6抗体[EPR22565-204]在1/1000稀释度下染色,以绿色显示; 小鼠抗α-管蛋白[DM1A]( 约7291 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, ab233551型 显示与IL-6特异性结合。 在野生型A549细胞裂解液中25 kDa处观察到一条带,在IL6敲除细胞系ab273751(敲除细胞裂解液 ab275501号 ). 为了生成该图像,分析野生型和IL6敲除的A549细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 在4°C下与一级抗体孵育过夜之前,在荧光蛋白印迹(基于TBS)封闭溶液中封闭膜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )稀释1/20000。 -
所有车道: 抗IL-6抗体[EPR21711]( ab233706型 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型A549 Brefeldin A( 约120299 )-处理过的(5ug/ml,4h)细胞裂解物 车道2: 野生型A549 IL-1ß( ab259387号 )(20 ng/ml,24小时)和Brefeldin A( 约120299 )-处理(最后4h为5 ug/ml)细胞裂解物 3号车道: IL-6基因敲除物A549 Brefeldin A( 约120299 )-处理过的(5ug/ml,4h)细胞裂解物 车道4: IL-6敲除物A549 IL-1ß( ab259387号 )(20 ng/ml,24小时)和Brefeldin A( 约120299 )-处理(最后4h为5 ug/ml)细胞裂解物 每车道30µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 23千帕 观察到的频带大小: 25千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 其他波段位于: 40 kDa(可能的非特异性结合) 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- ab233706型 在25 kDa时观察到。 红色-加载控制 约7291 (在55kDa下观察到小鼠抗α-管蛋白[DM1A]。 ab233706型 western blot显示与野生型A549细胞中的IL-6反应,在IL-6敲除细胞系ab273751(敲除细胞裂解物 ab275501号 ). 对野生型和IL-6敲除A549细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 用荧光蛋白印迹(TBS)封闭溶液封闭膜,然后用 ab233706型 和 约7291 (小鼠抗α-微管蛋白[DM1A]在4°C下过夜,稀释度分别为1/1000和1/2000。将印迹与山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗IL-6抗体[EPR20653]( 约214429 )稀释度为1/1000 车道1: 野生型A549 Brefeldin A( 约120299 )-处理过的(5ug/ml,4h)细胞裂解物 车道2: 野生型A549 IL-1ß( ab259387号 )(20 ng/ml,24小时)和Brefeldin A( 约120299 )-处理(最后4h为5 ug/ml)细胞裂解物 3号车道: IL-6基因敲除物A549 Brefeldin A( 约120299 )-处理过的(5ug/ml,4h)细胞裂解物 车道4: IL-6敲除物A549 IL-1ß( ab259387号 )(20 ng/ml,24小时)和Brefeldin A( 约120299 )-处理(最后4h为5 ug/ml)细胞裂解物 每车道30µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 预测的带宽大小: 23千帕 观察到的频带大小: 25千Da 为什么实际的频带大小与预测的不同? 其他波段位于: 35kDa(可能的非特异性结合) 1-4车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约214429 在25 kDa时观察到。 红色-加载控制 约7291 (在55kDa下观察到小鼠抗α-管蛋白[DM1A]。 约214429 western blot显示与野生型A549细胞中的IL-6反应,在IL-6敲除细胞系ab273751(敲除细胞裂解物 ab275501号 ). 对野生型A549和IL-6敲除细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 用荧光蛋白印迹(TBS)封闭溶液封闭膜,然后用 约214429 和 约7291 (小鼠抗α-微管蛋白[DM1A]在4°C下过夜,稀释度分别为1/1000和1/2000。将印迹与山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
等位基因1:第3外显子97 bp缺失。
数据表及文件
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SDS下载 -
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