概述
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产品名称 -
产品概述 CRISPR/Cas9实现的敲除细胞裂解物。 -
亲代细胞系 希拉牌手表 -
有机体 人类 -
突变描述 通过使用CRISPR/Cas9实现基因敲除,外显子2插入1 bp,第2外显子缺失2 bp。 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 Sanger测序,Western Blot(WB) -
重组说明 为了用作白细胞对照,将冻干液重新悬浮在50µL LDS*样品缓冲液中,使最终浓度达到2 mg/ml。对于还原条件,我们建议最终浓度为0.1 M DTT。 *不建议将SDS样品缓冲液用于这些冻干溶血物。 -
说明 裂解液制备: 我们的裂解物是使用RIPA缓冲液制备的,我们在其中加入蛋白酶抑制剂混合物和磷酸酶抑制剂混合物(比例:300:100:10)。 这意味着感兴趣的蛋白质变性了。 如果您需要天然形式的蛋白质,请使用活细胞版本-找到 在这里 。有关如何制备裂解物的更多详细信息,请参阅我们的裂解方案。 用户存储说明: 冻干物可在4°C下储存。 复原后,在-20°C下短期保存或-80°C下长期保存。 获取数千种由常用癌症细胞系产生的敲除细胞裂解物。 有关敲除细胞裂解物的更多信息,请参阅此处。 Abcam没有也不打算申请客户使用含有欧洲授权清单(附件十四)物质的产品的REACH授权。 我们的客户有责任检查REACH授权和任何其他相关授权在其预期用途中应用的必要性。 本产品受The Broad Institute、ERS Genomics limited和Sigma-Aldrich Co.LLC的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关许可证和专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . -
试验
性能
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存放说明 储存于-80°C。 请参阅协议。 -
组件 1套 ab261252-人IRF9敲除HeLa细胞裂解物 1 x 100微克 ab255929-人类野生型HeLa细胞裂解物 1 x 100微克 -
研究领域 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
STR分析 釉原蛋白X D5S818:11、12 D13S317:12、13.3 D7S820:8、12 D16S539:9、10 vWA:16、18 TH01:7型 TPOX:8、12 CSF1PO:9、10
靶标
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功能 通过I型干扰素(IFN-α和IFN-β)调节信号传导的转录调节因子。 在I型干扰素与细胞表面受体结合后,Jak激酶(TYK2和JAK1)被激活,导致STAT1和STAT2的酪氨酸磷酸化。 磷酸化的STAT二聚化,与IRF9/ISGF3G结合形成一种称为ISGF3转录因子的复合物,进入细胞核。 ISGF3与干扰素刺激反应元件(ISRE)结合,激活干扰素激发基因的转录,从而使细胞处于抗病毒状态。 -
序列相似性 属于IRF家族。 包含1个IRF色氨酸五重复DNA结合域。 -
细胞定位 细胞质。 核心。 通过IFN-α/β激活后转移到细胞核中。 -
UniProt提供的信息 -
别名 干扰素α应答转录因子亚单位 IFN-α应答转录因子亚单位 干扰素调节因子9
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产品
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KO细胞系
应用
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图片
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车道1: 野生型HeLa处理的干扰素α1(hIFN-alpha1)(10 ng/ml,16 h)细胞裂解物20 ug 车道2: IRF9敲除HeLa处理:hIFN-alpha1(10 ng/ml,16 h)细胞裂解物20 ug 3号车道: 野生型HeLa控制干扰素α1(hIFN-alpha1)(0 ng/ml,16 h)细胞裂解物20 ug 车道4: IRF9敲除HeLa载体对照:hIFN-alpha1(0 ng/ml,16 h)细胞裂解物20 ug 车道5: THP-1细胞裂解物20 ug 车道6: ACHN细胞裂解物20 ug Western blot假彩色图像:抗干扰素调节因子9/IRF-9抗体[EPR24260-55]在1/1000稀释度下染色,以绿色显示; 小鼠抗GAPDH抗体[6C5]( 约8245 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, 约271043 显示与干扰素调节因子9/IRF-9特异性结合。 在处理过的野生型HeLa细胞裂解液中,在48 kDa处观察到一条带,在IRF9敲除细胞系中,在该大小处未观察到信号 约266051 (敲除细胞裂解物ab258472)。 在48kDa以下的敲除裂解物通道中观察到的条带可能代表干扰素调节因子9/IRF-9的截断形式。 这还没有进一步研究,基因产物的功能特性也没有确定。 为了生成该图像,分析野生型和IRF9敲除的HeLa细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 在4°C下与一级抗体孵育过夜之前,在荧光蛋白印迹(基于TBS)封闭溶液中封闭膜。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )稀释1/20000。 -
通道1:野生型HeLa处理的hIFN-a1(10 ng/ml,16 h)细胞裂解液20μg 通道2:IRF9敲除HeLa处理的hIFN-a1(10 ng/ml,16 h)细胞裂解物20μg 车道3:野生型HeLa车辆控制hIFN-a1(0 ng/ml,16 h)细胞裂解物20μg 泳道4:IRF9敲除HeLa载体对照hIFN-1(0 ng/ml,16小时)细胞裂解物20μg Western blot假彩色图像:抗干扰素调节因子9/IRF-9抗体[14HCLC]以2μg/ml染色,以绿色显示; 小鼠抗GAPDH抗体[6C5]( 约8245 )以1/20000稀释度进行负荷控制染色,以红色显示。在Western blot中, ab277803型 显示与干扰素调节因子9/IRF-9特异性结合。 在处理过的野生型HeLa细胞裂解液中,在48 kDa处观察到一条带,在IRF9敲除细胞系中,在该大小处未观察到信号 约266051 (敲除细胞裂解物ab258472)。 在48kDa以下的敲除裂解物通道中观察到的条带可能代表干扰素调节因子9/IRF-9的截断形式。 这还没有进一步研究,基因产物的功能特性也没有确定。 为了生成该图像,分析野生型和IRF9敲除的HeLa细胞裂解物。 首先,样品在SDS-PAGE凝胶上运行,然后转移到硝化纤维素膜上。 TBS-0.1%吐温®20(TBS-T)中3%牛奶中的膜被堵塞 在4°C下与初级抗体孵育过夜之前。 在TBS-T中清洗四次斑点,在室温下与二级抗体孵育1小时,再次清洗四次,然后成像。 使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L(IRDye^®^800CW)预吸收抗体( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye^®^680RD)预吸收( 约216776 )稀释1/20000。 -
车道1: 野生型HeLa细胞裂解物20μg 车道2: IRF9敲除HeLa细胞裂解物20μg 3号车道: THP-1细胞裂解物20μg 车道4: ACHN细胞裂解液20μg 1-4车道 :合并信号(红色和绿色)。 绿色-在48 kDa时观察到抗IRF9抗体。 红色-装载控制, 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])。 western blot显示抗IRF9抗体与野生型HeLa细胞中的IRF-9反应。 IRF9敲除细胞系中观察到的条带 约266051 低于48 kDa的(IRF9敲除细胞裂解物ab258472)可能代表截断形式和裂解碎片。 尚未对此进行进一步调查。 对HeLa野生型和IRF9敲除细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 TBS-T(0.1%吐温)中3%牛奶中的膜被堵塞 ® )与抗IRF9抗体孵育前 约8245 (小鼠抗GAPDH抗体[6C5])在4时过夜 ° C,稀释度分别为1000分之一和20000分之一。 印迹与山羊抗兔IgG H&L(IRDye)孵育 ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
等位基因-1:1 bp插入外显子2 -
等位基因2:外显子2中2 bp缺失
实验方案
数据表及文件
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SDS下载 -
数据表下载