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.1998年2月;274(2):H728-41。
doi:10.1152/ajpheart.1998.274.2.H728。

用铑2荧光法测定兔心脏灌流后的钙瞬变

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用铑2荧光法测定兔心脏灌流后的钙瞬变

P J德尔尼多等。 美国生理学杂志. 1998年2月.

摘要

由于许多常用的钙指示剂需要使用紫外线激发光,心脏跳动的表面荧光光谱法测量胞浆钙受到了限制。心脏中的紫外线产生高水平的背景荧光,被高度吸收,限制了组织的渗透。可见波长荧光染料,如铑2可用;然而,由于缺乏钙结合的光谱偏移,无法使用比值技术来解释细胞溶质染料浓度的变化。我们开发了一种体内定量细胞溶质罗德2浓度的方法,该方法与钙依赖性荧光测量相结合,可以估算灌注兔心脏中的细胞溶质钙水平。将装载到心肌中的rhd2对激发光的反射吸光度用作染料浓度的指标,并将荧光强度与吸光度的比率用作胞浆钙浓度的测量。发现rhod 2的内皮细胞负载量最小(<5%),染料从胞浆中泄漏的速度较慢,在染料负载后10至30分钟内,染料荧光损失约5%。通过锰淬火测定,Rhod 2进入亚细胞隔室的负荷也很小(<5%)。体外测定rhod 2对钙的离解常数为500 nM,在存在0.5 mM肌红蛋白的情况下,该值增加到710 nM。根据该值和体内荧光测量,发现兔心脏中的胞浆钙浓度在舒张末期为229+/-90nM,在收缩期峰值为930+/-130nM,峰值荧光比峰值心室压早约40ms。这项技术应有助于对整个心脏的钙瞬变进行详细分析。

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