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.2021年11月5日:2021:3672112。
doi:10.1155/2021/3672112。 eCollection 2021年。

质子激活的Cl-通道TMEM206下调抑制人骨肉瘤细胞的恶性特性

附属公司

质子激活的Cl-通道TMEM206下调抑制人骨肉瘤细胞的恶性特性

费鹏等。 氧化介质细胞Longev. .

摘要

跨膜蛋白206(TMEM206)是一种质子激活的氯离子通道,与包括骨代谢在内的各种生化过程有关,并已成为多种肿瘤类型中的一种新型癌症相关蛋白。然而,其在原发性恶性骨肿瘤,尤其是骨肉瘤(OS)中的作用尚不清楚。本研究旨在探讨TMEM206基因沉默对人类OS细胞增殖、迁移、侵袭和转移的影响体外体内使用shRNA-击倒策略。我们发现TMEM206经常过度表达,并且高水平的TMME206与OS患者的临床分期和肺转移相关。我们提供证据表明,TMEM206诱导的OS癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降体外。从机械方面,我们确定β-连环蛋白,Wnt的关键成员/β-catenin信号传导,作为TMEM206的下游效应器。TMEM206静音抑制Wnt/β-表达拯救实验中的连环蛋白信号通路,证实TMEM206沉默至少部分通过β-连环蛋白介导Wnt下调/β-catenin信号。更重要的是,在OS细胞肺转移受到抑制的异种移植裸鼠模型中复制了TMEM206敲除相关的表型变化。总之,我们的结果表明,沉默TMEM206对Wnt具有负向调节作用/β-catenin信号通路β-catenin抑制OS致癌过程中的增殖、迁移、侵袭和转移,提示TMEM206是潜在的致癌生物标志物和OS治疗的潜在靶点。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明,他们没有相互竞争的利益。

数字

图1
图1
TMEM206在OC组织和细胞系中过度表达。(a) 采用WB法检测TMEM206在骨肉瘤组织和配对癌旁组织中的蛋白表达(n个= 10). (b,c)IHC和WB结果表明,晚期患者TMEM206的表达显著升高(P(P)< 0.05,∗∗P(P)< 0.01,∗∗∗P(P)分别与癌旁组织组相比<0.001)。(d) TMEM206在骨肉瘤细胞系中的表达与hFOB 1.19的表达对比(∗∗∗P(P)<0.001,与hFOB 1.19组相比,##P(P)与SAOS2组相比,<0.01)。GAPDH被用作内部控制。在(a,c)中,数据表示为平均值±SEM,在(d)中表示为平均数±SD。
图2
图2
TMEM206下调抑制OS细胞增殖。(a) 荧光染色法检测TMEM206在U2OS细胞系中的表达。比例尺:20μm.(b)通过western blot分析检测TMEM206在U2OS和MG63细胞中的表达(∗∗∗P(P)分别与SC-shRNA组相比<0.001)。(c) 采用EdU染色法测定TMEM206-shRNA-转染的U2OS和MG63细胞的生长情况(∗∗P(P)< 0.01,∗∗∗P(P)与SC shRNA组相比,分别<0.001)。(d) CCK-8分析表明,TMEM206的下调影响了U2OS和MG63细胞在转染后1、2、3和4天的增殖率(∗∗∗P(P)分别与SC-shRNA组相比<0.001)。(e) 集落形成实验表明,敲除TMEM206抑制细胞集落形成(∗∗∗P(P)分别与SC-shRNA组相比<0.001)。GAPDH被用作内部控制。数据表示为3个重复实验的平均值±SD。
图3
图3
TMEM206与OS细胞迁移和侵袭有关。(a) 转移患者与无转移患者OS组织中TMEM206的相对表达(∗∗P(P)< 0.01,n个=8对)。(b) 通过TMEM206沉默后的伤口愈合试验分析细胞迁移。比例尺:200μm.(c,d)24小时无或有Matrigel涂层的Transwell室中迁移或侵袭细胞的代表性图像和相对数量小时(∗∗∗P(P)分别与SC-shRNA组相比<0.001)。比例尺:100μm.GAPDH被用作内部控制。在(a)中,数据表示为平均值±SEM,在(c,d)中表示为平均数±SD。
图4
图4
TMEM206上调促进β-连环蛋白。(A) 表达的IHC结果β-骨肉瘤组织和配对副肿瘤组织中的连环蛋白。比例尺:50μm.(b)WB结果显示β-晚期患者catenin表达显著升高(P(P)< 0.05,∗∗P(P)< 0.01,∗∗∗P(P)分别与癌旁组织组相比<0.001)。(c) U2OS和MG63细胞采用萤火虫荧光素酶报告分析进行,每个样品的萤火虫萤光素酶活性归一化为Renilla荧光素酶活性(∗∗P(P)分别与pcDNA-Con组相比<0.001)。(d) TMEM206的上调增强了β-MG63细胞的连环蛋白染色强度。比例尺:50μm.(e)TMEM206的上调增强了β-连环蛋白。GAPDH被用作内部控制。在(b)中,数据表示为平均值±SEM,在(c)中表示为平均数±SD。
图5
图5
TMEM206击倒减弱Wnt/β-catenin信号通路。Wnt(重量)/β-在TMEM206-shRNA-转染的U2OS和MG63细胞中,连环蛋白信号通路蛋白水平显著降低(∗∗∗P(P)分别与SC-shRNA组相比<0.001)。GAPDH被用作内部控制。数据表示为(b–f)中的平均值±SD。
图6
图6
Wnt(重量)/β-catenin信号通路参与TMEM206介导的OS代谢特性。(a) Wnt治疗/β-连环蛋白信号激活剂LiCl恢复TMEM206-shRNA在OS细胞迁移和侵袭中的作用(∗∗∗P(P)与SC-shRNA相比<0.001,###P(P)分别与TMEM206-shRNA相比<0.001)。比例尺:100μm.(b)Wnt处理/β-连环蛋白信号通路抑制剂IWP-2逆转TMEM206-过度表达介导的迁移和侵袭促进(∗∗∗P(P)与pcDNA-Con相比<0.001,###P(P)分别与pcDNA-TMEM206相比<0.001)。比例尺:100μm.数据表示为3个重复实验的平均值±SD。
图7
图7
沉默TMEM206对OS体内转移的影响。(a,b)沉默TMEM206抑制异种移植裸鼠的肿瘤生长。裸鼠皮下注射经慢病毒感染转染TMEM206-shRNA的MG63细胞。每7天测量一次肿瘤大小,并在第21天处死小鼠,切除肿瘤进行分析(n个= 6,∗∗∗P(P)分别与SC-shRNA组相比<0.001)。(c) 用TMEM206和β-异种移植瘤的连环蛋白抗体。比例尺:50μm.(d)接种MG63细胞的裸鼠全肺代表性图像,统计分析显示肺转移灶(∗∗∗P(P)分别与SC-shRNA组相比<0.001)。黑色箭头表示肺部的转移灶。(e) TMEM206调节OS的机构示意图。数据表示为来自3个重复实验的平均值±SEM。

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