Response and resistance to CDK12 inhibition in aggressive B-cell lymphomas

doi:10.3324/haematol.2021.278743

.2022年5月1日；107(5):1119-1130.

doi:10.3324/haematol.2021.278743。

侵袭性B细胞淋巴瘤对CDK12抑制的反应和耐药性

附属公司

¹化学生物学和分子医学项目，H.Lee Moffitt癌症中心和研究所，佛罗里达州坦帕，33612。
²乔治华盛顿大学癌症中心，华盛顿特区，20052。
^三佛罗里达州坦帕市H.Lee Moffitt癌症中心和研究所恶性血液科，邮编：33612。
⁴佛罗里达州坦帕市H.Lee Moffitt癌症中心和研究所血液病理学和实验室医学部，邮编：33612。Jianguo.Tao@moffitt.org。

PMID： 34162179
预防性维修识别码：项目经理9052927
内政部： 10.3324/公顷。2021.278743

侵袭性B细胞淋巴瘤对CDK12抑制的反应和耐药性

京高等。血液学. 2022.

.2022年5月1日；107(5):1119-1130.

doi:10.3324/haematol.2021.278743。

附属公司

¹化学生物学和分子医学项目，H.Lee Moffitt癌症中心和研究所，佛罗里达州坦帕，33612。
²乔治华盛顿大学癌症中心，华盛顿特区，20052。
^三佛罗里达州坦帕市H.Lee Moffitt癌症中心和研究所恶性血液科，33612。
⁴佛罗里达州坦帕市H.Lee Moffitt癌症中心和研究所血液病理学和实验室医学部，邮编：33612。Jianguo.Tao@moffitt.org。

PMID： 34162179
预防性维修识别码：项目经理9052927
内政部： 10.3324/血液.2021.278743

摘要

尽管弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）和套细胞淋巴瘤（MCL）患者的治疗取得了显著进展，但由于耐药性的出现和随后的疾病进展，复发性疾病患者的预后仍然很差。迫切需要确定这些疾病的新靶点和治疗策略。在这里，我们报道了MCL和DLBCL对转录靶向药物都非常敏感，特别是THZ531，一种细胞周期蛋白依赖性激酶12（CDK12）的共价抑制剂。通过实施药物基因组学和基于细胞的药物筛选，我们发现THZ531导致癌基因转录程序的抑制，特别是DNA损伤反应途径、MYC靶基因和mTOR-4EBP1-MCL-1轴，有助于显著抑制淋巴瘤在体外我们还通过过度激活MEK-ERK和PI3K-AKT-mTOR通路和上调多药耐药-1（MDR1）蛋白，重新鉴定并建立了获得性THZ531耐药淋巴瘤细胞。值得注意的是，EZH2抑制剂通过竞争性抑制MDR1逆转了对THZ531的耐药性，并与THZ53l结合，协同抑制MCL和DLBCL的体外生长。我们的研究表明，CDK12抑制剂单独或与EZH2抑制剂一起，有望成为治疗难治性DLBCL和MCL的新的有效方法。

PubMed免责声明

数字

**图1。**
**地幔细胞淋巴瘤和其他B细胞淋巴瘤细胞系和原始样本对THZ531抑制CDK12的作用非常敏感，无论其遗传背景和耐药状态如何。**（A）原木条形图₁₀50%抑制浓度（IC₅₀)THZ531治疗B细胞淋巴瘤细胞株72小时（B）MCL-1（左）或磷酸4EBP1蛋白水平（右）与THZ531IC的相关性₅₀在B细胞淋巴瘤细胞系中。（C）原发性套细胞淋巴瘤标本的基于图像的细胞活性分析；3x10像素⁶细胞接种在含有细胞外基质和淋巴瘤基质细胞的384孔板中。将五种连续稀释浓度的THZ531加入培养基中，每30分钟对平板连续成像144小时。使用数字成像分析算法分析所有图像，以基于膜运动检测细胞活力，并通过曲线下面积（AUC）量化活力的变化。（D） MCL-1（左）、ATM（中）和ATR（右）基因表达的相关性（log₂TPM）与CDK12基因表达（log₂TPM）。（A）中显示的数据代表了至少三个独立实验。TPM：每千基百万的成绩单。

**图2。**
**CDK12通过MYC和mTOR-4EBP1-MCL-1轴在套细胞淋巴瘤和MYC相关B细胞淋巴瘤中的转录激活维持细胞生长和生存。**（A） Western blot分析THZ531敏感细胞系和在不同时间点用指示剂量的THZ53l治疗的套细胞淋巴瘤原始样本中Ser2、5和7、RNAPII、裂解PARP、磷-p70S6K、p70S6K，磷-4EBP1、4EBP1，MCL-1、BCL-XL、BCL-2和MYC的RNAPII磷酸化。（B） Western blot分析HBL-2细胞中MCL-1、MYC、磷-4EBP1和4EBP1蛋白水平，含和不含强力霉素诱导的4EBP过度表达。（C） Western blot分析在HBL-2细胞中使用和不使用强力霉素诱导4EBP1过度表达的情况下，用指定剂量的THZ531处理24小时，对裂解的PARP、MCL-1、BCL-XL、BCL-2、MYC和4EBP1-蛋白表达进行分析。电池（1x10⁶)接种在含有细胞外基质的384孔板中。将THZ531以五种系列稀释浓度添加到培养基中，每30分钟对板连续成像96小时。使用数字成像分析算法对所有图像进行分析，以基于膜运动检测细胞活力，通过曲线下的面积量化存活率的变化。（E）用指定剂量的THZ531处理24小时的具有和不具有MCL-1过表达的HBL-2细胞中裂解的PARP、MYC、MCL-1和BCL-XL的蛋白质印迹分析。DOX：多西环素；DMSO：二甲基亚砜。

**图3。**
**THZ531敏感细胞的转录组分析。**（A）用THZ531处理6小时（左）和24小时（右）后Z138和Jeko-1细胞中常见的转录组变化。红色：上调基因，黑色：下调基因。LFC:日志₂原木折变截止线₂(1.5),*P（P）*-值截断为0.05。三个生物独立样本。（B）根据基因集富集分析（GSEA），标记通路的点图在24小时后用THZ531处理的Z138和Jeko-1细胞系中均呈负富集。较大的点大小表示更负的富集分数。色阶代表重要性。基因根据治疗后的表达倍数变化进行排序。NES：归一化富集分数；FDR：错误发现率。（C） THZ531处理后，KEGG途径的GSEA富集曲线在Z138和Jeko-1中均呈负富集。（D）药物敏感性显示为根据Z138、Jeko-1、DOHH2和Val细胞系中细胞活力测定获得的剂量-反应曲线计算的曲线下面积的热图（AUC），用于给药72小时（E）药物敏感性显示为AUC的热图，该热图是根据基于图像的细胞活性分析获得的剂量-反应曲线计算得出的，该分析是在治疗72小时后，对每个指示药物的MCL-1过度表达和不过度表达的HBL-2细胞进行的。（F）用500 nM THZ531治疗12小时的套细胞淋巴瘤原发患者样本中显著负富集GSEA标志基因集（NES<0，FDR<0.25）的文氏图列出了所有四个样本中共同负富集的途径。（D和E）中显示的数据代表了至少三个独立实验。

**图4。**
**MDR1上调导致套细胞淋巴瘤和其他侵袭性B细胞淋巴瘤对THZ531产生耐药性。**（A）用THZ531治疗72小时后Z138、Jeko-1和REC-1细胞系的剂量-反应曲线。数据显示为每个细胞系三个技术复制的平均值±标准偏差（SD）。（B） Western blot分析在不同时间点用指示剂量的THZ531处理的REC-1细胞中Ser2、5和7、RNAPII、裂解PARP、p70S6K、p70S6K、4EBP1、MCL-1、BCLXL、BCL-2和MYC蛋白表达的RNAPII磷酸化。（C）火山图显示，与二甲基亚砜（DMSO）处理REC-1细胞相比，THZ531处理24小时后，其mRNA水平没有变化。红色：上调基因，黑色：下调基因。LFC：日志₂原木褶皱变化截止₂(1.5),*P（P）*-值截断为0.05。三个生物独立样本。（D） THZ531耐药细胞株REC-1中药物泵基因差异表达条形图与THZ531敏感细胞株Z138和Jeko-1。条形长度表示对数₂折叠变化。颜色代表表达变化的方向，其中红色代表带有对数的基因₂折叠变化大于1.5，蓝色代表log基因₂折叠变化小于1.5。（E）不同剂量的THZ531、塔里基达或THZ531+塔里基达尔治疗72小时后REC-1细胞的剂量反应曲线。数据显示为每个细胞系三个技术复制的平均值±SD。（F）不同剂量的THZ531、塔里基达或THZ531+塔里基达尔治疗72小时后KARPAS-422-THZ-R和Maver-1-THZ-R细胞系的剂量-反应曲线。数据显示为每个细胞系的三个技术重复的平均值±标准差。（A、E和F）中显示的数据代表了至少三个独立实验。

**图5。**
**EZH2抑制剂通过与THZ531竞争MDR1，在THZ531-耐药细胞中恢复了对THZ531.的敏感性。**（A） ●●●●。在REC-1细胞中对每种指示药物单独或与500 nM THZ531联合进行高通量小分子药物筛选，得到药物反应曲线曲线下归一化区域（AUC）的Z分数。与THZ531结合后具有更有效作用的选定化合物以红色突出显示。（B）左图：REC-1细胞在不同剂量THZ53l、GSK343或THZ531+GSK342治疗72小时后的剂量-反应曲线。右：不同剂量的THZ531、UNC1999或THZ531+UNC1999治疗72小时后REC-1细胞的剂量-反应曲线。数据显示为每个细胞系三个技术复制品的平均值±标准偏差。（C）用二甲基亚砜（DMSO）或指定剂量的THZ531和/或GSK343处理24小时后，对REC-1细胞中Ser2、RNAPII、裂解PARP、磷-p70S6K、p70S6K，磷-4EBP1、4EBP1，MCL-1、BCL-XL、BCL-2和MYC蛋白表达的RNAPII磷酸化进行Western blot分析。（D）在不同时间点用二甲基亚砜或指示剂量的THZ531和/或GSK343处理后，对REC-1（左）和Maver-1-THZ-R（右）细胞系中MDR1和裂解PARP蛋白表达进行Western blot分析。（E）用不同的药物以指示的剂量处理REC-1（左）、KARPAS-422-THZ-R（中）和Maver-1-THZ_R（右）细胞12小时。使用荧光MDR分析试剂盒测定P-gp活性。P-gp抑制剂维拉帕米（30μM）作为阳性对照。结果表示为平均值±平均值标准误差。（B）中显示的数据代表了至少三个独立实验。

**图6。**
**MEK-ERK和PI3K-AKT-mTOR通路的激活有助于THZ531耐药细胞中MDR1的上调。**（A）初级MCL样品、细胞（3x10）的基于图像的细胞活性分析⁶)细胞接种在含有细胞外基质和淋巴瘤基质细胞的384孔板中。将五种系列稀释浓度的THZ531和GSK343添加到培养基中，每隔30分钟对平板连续成像144小时。使用数字成像分析算法对所有图像进行分析，以基于膜运动检测细胞活力，并通过曲线下面积（AUC）量化活力的变化。（B）用二甲基亚砜或指定剂量的THZ531和/或AZD8055、BEZ235或曲美替尼处理24小时或48小时后，对REC-1细胞中MDR1和裂解PARP蛋白表达进行Western blot。（C）不同剂量的THZ531和/或AZD8055、BEZ235和曲美替尼处理REC-1细胞72 h后的剂量-反应曲线。数据显示为每个细胞系三个技术复制品的平均值±标准偏差。（C）中显示的数据代表了至少三个独立实验。

请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

PF-04691502是一种双重PI3K/mTOR抑制剂，通过诱导侵袭性B细胞非霍奇金淋巴瘤的凋亡和G1细胞周期阻滞，具有强大的临床前活性。
陈德，毛C，周毅，苏毅，刘斯，齐伟强。 Chen D等。国际癌症杂志。2016年1月；48(1):253-60. doi:10.3892/ijo.2015.3231。Epub 2015年11月5日。国际癌症杂志。2016 PMID：26549638
克服侵袭性B细胞淋巴瘤Venetoclax耐药性的战略性治疗靶向。
Pham LV、Huang S、Zhang H、ZhangJ、Bell T、Zhou S、Pogue E、Ding Z、Lam L、Westin J、Davis RE、Young KH、Medeiros LJ、Ford RJ、Nomie K、Zhang-L、Wang M。 Pham LV等人。《临床癌症研究》2018年8月15日；24(16):3967-3980. doi:10.1158/1078-0432.CCR-17-3004。Epub 2018年4月17日。《临床癌症研究》，2018。 PMID：29666304
布鲁顿酪氨酸激酶（BTK）抑制剂PCI-32765在对硼替佐米敏感或耐药的弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）和套细胞淋巴瘤（MCL）细胞中协同增加蛋白酶体抑制剂活性。
Dasmahapatra G、Patel H、Dent P、Fisher RI、Friedberg J、Grant S。 Dasmahapatra G等人。英国血液学杂志。2013年4月；161(1):43-56. doi:10.1111/bjh.12206。Epub 2013年1月30日。英国血液学杂志。2013 PMID：23360303 免费PMC文章。
弥漫性大B细胞淋巴瘤中PI3K/Akt/mTOR信号通路的抑制：当前知识和临床意义。
Majchrzak A、Witkowska M、Smolewski P。 Majchrzak A等人。分子。2014年9月11日；19(9):14304-15. doi:10.3390/分子190914304。分子。2014 PMID：25215588 免费PMC文章。审查。
靶向代谢以克服癌症耐药性：弥漫性大B细胞淋巴瘤的一种有希望的治疗策略。
Pi M、Kuang H、Yue C、Yang Q、Wu A、Li Y、Assaraf YG、Yang DH、Wu S。 Pi M等人。抗药性更新。2022年3月；61:100822。doi:10.1016/j.drup.2022.100822。Epub 2022年3月4日。抗药性更新。2022 PMID：35257981 审查。

查看所有类似文章

引用人

小管特异性细胞周期素依赖性激酶12敲除通过转录延伸缺陷增强肾脏损伤。
Zhang YL、Tang TT、Ni WJ、Li ZT、Jiang LY、Wang Y、Zhou X、Cao JY、Yin Q、Jiang-W、Zhao YJ、Gan WH、Zhang AQ、Li ZL、Wen Y、Lv LL、Liu BC、Wang B。 Zhang YL等。国际生物科学杂志。2024年2月12日；20(5):1669-1687. doi:10.7150/ijbs.90872。eCollection 2024年。国际生物科学杂志。2024 PMID：38481813 免费PMC文章。
贝叶斯推断通过整合体外药物反应分析和药物蛋白分析来确定肿瘤特异性癌症依赖性。
Xing H，Yau C。 Xing H等人。 BMC生物信息学。2024年3月8日；25(1):104. doi:10.1186/s12859-024-05682-0。 BMC生物信息学。2024 PMID：38459430 免费PMC文章。

工具书类

1. 尼尔森JA，克利夫兰JL。Myc途径引发细胞自杀和癌症。致癌物。2003;22(56):9007-9021.-公共医学
1. Dave SS、Fu K、Wright GW等。伯基特淋巴瘤的分子诊断。《新英格兰医学杂志》2006；354（23）：2431-2442。-公共医学
1. Hartmann EM、Ott G、Rosenwald A.淋巴瘤的分子生物学和遗传学。北美血液肿瘤临床杂志2008；22(5):807-823-公共医学
1. Slack GW、Gascoyne RD.MYC和侵袭性B细胞淋巴瘤。高级病理学。2011;8(3):219-228.-公共医学
1. 任毅、毕C、赵X等。PLK1在侵袭性B细胞淋巴瘤中稳定MYC依赖性激酶网络。临床投资杂志。2018;128(12):5517-5530.-项目管理咨询公司-公共医学

MeSH术语

行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动

物质

行动
行动
行动

赠款和资金

[1] 尼尔森JA，克利夫兰JL。Myc途径引发细胞自杀和癌症。致癌物。2003;22(56):9007-9021.-公共医学

[2] 尼尔森JA，克利夫兰JL。Myc途径引发细胞自杀和癌症。致癌物。2003;22(56):9007-9021.-公共医学

[3] Dave SS、Fu K、Wright GW等。伯基特淋巴瘤的分子诊断。《新英格兰医学杂志》2006；354（23）：2431-2442。-公共医学

[4] Dave SS、Fu K、Wright GW等。伯基特淋巴瘤的分子诊断。《新英格兰医学杂志》2006；354（23）：2431-2442。-公共医学

[5] Hartmann EM、Ott G、Rosenwald A.淋巴瘤的分子生物学和遗传学。北美血液肿瘤临床杂志2008；22(5):807-823-公共医学

[6] Hartmann EM、Ott G、Rosenwald A.淋巴瘤的分子生物学和遗传学。北美血液肿瘤临床杂志2008；22(5):807-823-公共医学

[7] Slack GW、Gascoyne RD.MYC和侵袭性B细胞淋巴瘤。高级病理学。2011;8(3):219-228.-公共医学

[8] Slack GW、Gascoyne RD.MYC和侵袭性B细胞淋巴瘤。高级病理学。2011;8(3):219-228.-公共医学

[9] 任毅、毕C、赵X等。PLK1在侵袭性B细胞淋巴瘤中稳定MYC依赖性激酶网络。临床投资杂志。2018;128(12):5517-5530.-项目管理咨询公司-公共医学

[10] 任毅、毕C、赵X等。PLK1在侵袭性B细胞淋巴瘤中稳定MYC依赖性激酶网络。临床投资杂志。2018;128(12):5517-5530.-项目管理咨询公司-公共医学

将引文保存到文件

电子邮件引文

添加到集合

添加到我的书目

您保存的搜索

为外部引文管理软件创建文件

您的RSS源

侵袭性B细胞淋巴瘤对CDK12抑制的反应和耐药性

附属公司

侵袭性B细胞淋巴瘤对CDK12抑制的反应和耐药性

作者

附属公司

摘要

数字

类似文章

引用人

工具书类

MeSH术语

物质

赠款和资金

摘要

数字

类似文章

引用人

工具书类

MeSH术语

物质

相关信息

赠款和资金