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.2021年7月；24(1):503.
doi:10.3892/mmr.2021.12142。 Epub 2021年5月13日。

lncRNA NEAT1通过miR‑500a‑3p/XBP‑1轴调控胃癌细胞增殖、侵袭和凋亡

周云 # 1, Zhenghong Sha公司 # 2, 杨勇 三, 吴水梅 三, 洪晨（音） 1
附属公司

lncRNA NEAT1通过miR‑500a‑3p/XBP‑1轴调控胃癌细胞增殖、侵袭和凋亡

周云等。 分子医学代表. 2021年7月.

摘要

胃癌是一种严重的恶性肿瘤。尽管近年来胃癌的研究取得了进展，但该病发病机制的具体分子机制尚不完全清楚。长非编码RNA（lncRNA）核副啄组装转录物1（NEAT1）影响结直肠癌和乳腺癌多种肿瘤细胞的增殖和转移，但其在胃癌中的特殊作用尚需进一步研究。本研究的目的是分析NEAT1在胃癌中的作用。采用western blotting分析胃癌组织和细胞系内质网应激标记蛋白和凋亡相关蛋白的表达。使用双荧光素酶报告物分析NEAT1和miR‑500a‑3p的靶向关系。细胞增殖采用CCK8分析和集落形成分析，细胞侵袭采用Transwell分析。TUNEL染色检测细胞凋亡，免疫荧光染色检测LC3表达。结果表明，建立了lncRNA NEAT1‑过表达胃癌细胞，以确定其对细胞增殖、侵袭、凋亡、自噬和内质网应激的影响。随后，microRNA（miR）‑500a在lncRNA NEAT1‑过表达细胞中过度表达。与载体组相比，lncRNA NEAT1过表达显著抑制胃癌细胞增殖和侵袭，但显著促进细胞凋亡。此外，结果表明，lncRNA NEAT1靶向并下调了miR‑500a‑3p和miR-500a−3p靶向X‑box结合蛋白‑1（XBP‑1）的表达mRNA。miR‑500a‑3p过表达可显著逆转lncRNA NEAT1过表达介导的胃癌细胞增殖和侵袭抑制。此外，与载体组相比，lncRNA NEAT1过度表达显著上调了内质网应激相关蛋白（XBP-1S/XBP-1U比率和78-kDa葡萄糖调节蛋白）和凋亡相关蛋白（Bax和裂解caspase‑3）的表达水平；然而，miR‑500a‑3p过表达逆转了lncRNA NEAT1过表达介导的对蛋白质表达的影响。本研究表明，lncRNA NEAT1通过调节miR‑500a‑3p/XBP‑1轴抑制胃癌细胞增殖和侵袭，并促进凋亡。

关键词：细胞凋亡；入侵；长非编码RNA核副啄组装转录本1；microRNA‑500A/X‑box结合蛋白‑1；增殖。

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数字

图1。
图1。
胃癌组织中lncRNA NEAT1表达上调。通过RT-qPCR和western blotting检测胃癌组织中（A）内质网应激蛋白、（B）凋亡蛋白和自噬相关蛋白的表达水平。（C） 通过RT-qPCR检测胃癌组织中lncRNA NEAT1和miR-500a的表达水平***P<0.001。lncRNA，长非编码RNA；NEAT1，核旁啄组装转录物1；RT-qPCR、逆转录定量PCR；miR，microRNA；GRP78，78-kDa葡萄糖调节蛋白；XBP-1，X-box结合蛋白-1；Atg5，自噬相关基因5；STAD，胃癌组织。
图2。
图2。
胃癌组织中内质网应激相关蛋白表达水平与lncRNA NEAT1表达呈负相关。（A） 进行线性回归以检测内质网应激、自噬和凋亡相关蛋白表达水平与lncRNA NEAT1表达水平之间的相关性。（B） 进行线性回归以检测内质网应激、自噬和凋亡相关蛋白表达水平与miR-500a表达水平之间的相关性。lncRNA，长非编码RNA；NEAT1，核副啄组装转录本1；miR，microRNA；GRP78，78-kDa葡萄糖调节蛋白；XBP-1，X-box结合蛋白-1；Atg5，自噬相关基因5；内质网应激。
图3。
图3。
胃癌细胞内质网应激相关蛋白表达水平与lncRNA NEAT1表达呈负相关。（A） 通过逆转录定量PCR检测胃癌细胞中lncRNA NEAT1和miR-500a的表达水平。（B） 通过western blotting检测胃癌细胞中GRP78、XBP-1S和XBP-1U蛋白的表达水平。（C） 采用线性回归方法检测胃癌细胞中lncRNA NEAT1表达与内质网应激相关蛋白表达水平的相关性。（D） 采用线性回归方法检测miR-500a表达与胃癌细胞内质网应激相关蛋白表达水平之间的相关性*与GES1相比，P<0.05和***P<0.001。lncRNA，长非编码RNA；NEAT1，核副啄组装转录本1；miR，microRNA；GRP78，78-kDa葡萄糖调节蛋白；XBP-1，X-box结合蛋白-1。
图4。
图4。
lncRNA NEAT1靶向胃癌细胞中的miR-500a。（A） 通过逆转录定量PCR测定OverExp-NEAT-1、OverExp-NEAT-2、miR-500a-3p mimic-1和miR-500a-3p-2的转染效率***P<0.001 vs.矢量；###P<0.001 vs.矢量；∆∆∆P<0.001与过度Exp-NEAT-1比较。@@@与模拟NC相比，P＜0.001；&&与模拟NC相比P<0.01；$$$与miR-500a-3p mimic-1相比，P<0.001。进行荧光素酶报告分析以评估miR-500a和（B）lncRNA NEAT1之间的相互作用，*P<0.05 vs.NEAT1+模拟NC或XBP1+模拟数控或（C）XBP-1，*P<0.05 vs.XBP1+模拟NC。（D）进行细胞计数Kit-8分析以评估lncRNA NEAT1过度表达对胃癌细胞增殖的影响***与载体相比P＜0.001；###P<0.001 vs.OverExp-NEAT1+模拟NC。（E）进行集落形成分析，以评估lncRNA NEAT1过度表达对胃癌细胞增殖的影响。lncRNA，长非编码RNA；NEAT1，核副啄组装转录本1；miR，microRNA；过度表达；NC，阴性对照；XBP-1、X-盒结合蛋白-1；OD，光密度；WT，野生型；哑巴，突变体。
图5。
图5。
lncRNA NEAT1抑制胃癌细胞侵袭，但促进凋亡。lncRNA NEAT1过度表达对细胞侵袭的影响（A）通过Transwell分析进行评估，（B）量化。通过流式细胞术（C）测定lncRNA NEAT1过度表达对细胞凋亡的影响，并（D）量化***P<0.001 vs.矢量；###P<0.001 vs.OverExp-NEAT1+模拟NC.lncRNA，长非编码RNA；NEAT1，核副啄组装转录本1；过度表达；miR，microRNA；NC，阴性对照。
图6。
图6。
lncRNA NEAT1抑制胃癌细胞的自噬过程。免疫荧光法检测LC3II/I在胃癌细胞中的表达，放大×200。lncRNA，长非编码RNA；NEAT1，核副啄组装转录本1；过度表达；NC，阴性对照；miR，microRNA。
图7。
图7。
lncRNA NEAT1下调内质网应激相关蛋白的表达水平。通过western blotting检测内质网应激、（A和B）凋亡和自噬相关蛋白的表达水平。（C） 通过逆转录定量PCR测定lncRNA NEAT1和miR-500a的表达水平*与向量相比，P<0.05、**P<0.01和***P<0.001；###与OverExp-NEAT1+模拟NC.lncRNA，长非编码RNA相比，P＜0.001；NEAT1，核副啄组装转录本1；过度表达；miR，microRNA；NC，阴性对照；GRP78，78-kDa葡萄糖调节蛋白；XBP-1，X-box结合蛋白-1；CHOP、C/EBP同源蛋白；Atg5，自噬相关基因5。
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