跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2021年3月25日：11:654411。
doi:10.3389/fonc.20216.54411。 eCollection 2021年。

miR-181d/RBP2/NF-κB p65反馈调节促进慢性髓系白血病爆发危机

周敏然 1, 尹晓林 1, 郑立新 2, 岳父 1, 王悦（Yue Wang） 2, 崔泽龙 1, 高振兴 1, 王晓明 3, 陶晃 1, 贾继辉 2, 陈春燕 1
附属公司

miR-181d/RBP2/NF-κB p65反馈调节促进慢性髓系白血病爆发危机

周敏然等。 前Oncol. .

摘要

背景：慢性粒细胞白血病（CML）是一种恶性克隆性增殖性疾病。一旦进入爆炸危机阶段（CML-BP），疗效较差，病死率极高。因此，迫切需要探索冲击波危象的分子机制，寻找新的治疗靶点。

方法：检测42例新诊断的CML-CP患者和15例CML-BP患者miR-181d、RBP2和NF-κB p65的表达水平。定量实时PCR、Western blots和细胞增殖试验用于表征miR-181d、RBP2或p65过度表达或抑制引起的变化。通过荧光素酶报告子分析和ChIP分析建立miR-181d、RBP2和p65之间的功能关联。miR-181d表达的抑制及其在肿瘤生长中的后果已得到证实体内模型。

结果：我们发现，miR-181d在CML-BP中过度表达，从而促进白血病细胞增殖。组蛋白脱甲基酶RBP2被确定为miR-181d的直接靶点，其下调RBP2的表达。此外，RBP2通过结合其启动子和去甲基化p65启动子位点中的三/二甲基化H3K4区域来抑制NF-κB亚单位p65的转录表达。反过来，p65直接与miR-181d启动子结合并上调其表达。因此，miR-181d过度表达导致的RBP2抑制导致p65上调，从而进一步促进miR-181 d的表达。这种miR-181d/RBP2/p65反馈调节导致持续的NF-κB激活，这有助于CML-BP的发展。

结论：综上所述，miR-181d/RBP2/p65反馈调节促进CML-BP和miR-181d可能是CML-BP的潜在治疗靶点。

关键词：CML爆炸危机；RBP2；细胞增殖；miR-181d；第65页。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明，该研究是在没有任何可能被解释为潜在利益冲突的商业或金融关系的情况下进行的。

数字

图1
图1
miR-181d在CML-BP中过度表达并促进白血病细胞增殖。（A）CML-CP和CML-BP患者成熟miR-181d的qRT-PCR分析。人CML-CP和BP细胞取自患者骨髓。（B、C）miR-181d模拟物或抑制剂转染K562和HL60细胞后的EDU。结果得到了3个独立实验的证实*第页< 0.05, **第页< 0.01.
图2
图2
miR-181d直接调节RBP2的表达。（A、B）miR-181d模拟物或抑制剂转染后RBP2 mRNA和蛋白水平的qRT-PCR和Western blot分析。（C）RBP2 3′-UTR中预测的miR-181d结合位点的示意图。（D–G）miR-181d模拟/抑制剂转染HL60和HEK-293细胞后RBP2野生型3′UTR及其突变活性。在48小时时测定荧光素酶活性，并用Renilla荧光素酶活性进行标准化。结果来自3个独立的实验*第页< 0.05, **第页< 0.01, ***第页<0.001，ns，无统计学意义。
图3
图3
p65被RBP2直接表观下调。（A、B）用RBP2野生型或RBP2-突变（脱甲基酶活性缺陷，RBP2 H483A）质粒转染K562和HL60细胞后RBP2和p65 mRNA水平的qRT-PCR。（C）用RBP2野生型或RBP2 H483A质粒转染K562和HL60细胞后RBP2和p65蛋白表达水平的Western blot分析。（D）p65启动子中预测的RBP2结合位点的示意图。（E、F）RBP2对p65野生型启动子的调节，包括第一个RBP2结合位点（p65-pro1）和第二个RBP2-结合位点（p65-pro2）。用p65野生型报告子和RBP2表达质粒转染HL60和HEK-293细胞，然后在转染48小时后进行荧光素酶活性评估。（G、H）p65野生型pro1及其在RBP2野生型质粒转染HL60和HEK-293细胞后的突变活性。（I，J）K562和HL60细胞中RBP2与p65启动子结合的ChIP检测。（K，L）RBP2质粒转染K562和HL60细胞后，RBP2和H3K4me3/2与p65启动子的结合。结果来自3个独立的实验*第页< 0.05, **第页< 0.01, ***第页<0.001，ns，无统计学意义。
图4
图4
p65在CML-BP中过度表达并促进白血病细胞增殖。（A、B）CML-CP和CML-BP患者骨髓样本p65 mRNA和蛋白水平的qRT-PCR和免疫染色分析。（C、D）用p65质粒或siRNA转染K562和HL60细胞后的EDU。结果由3个独立实验证实*第页< 0.05, **第页< 0.01.
图5
图5
miR-181d被p65直接上调。（A、B）用p65质粒或siRNA转染K562和HL60细胞后，对p65 mRNA和成熟miR-181d水平进行qRT-PCR。（C）用p65质粒或siRNA转染K562和HL60细胞后p65蛋白表达水平的Western blot分析。（D）miR-181d启动子中预测的p65结合位点的示意图。（东-西）p65对miR-181d野生型启动子的调节，包括第一个p65结合位点（miR-181d-pro1）和第二个p65连接位点（miR-181d-pro2）。用miR-181d野生型报告子和p65质粒/siRNA转染HL60和HEK-293细胞，并在转染后48小时或72小时评估荧光素酶活性。（I–L）miR-181d野生型pro1及其在HL60和HEK-293细胞中用p65质粒或siRNA转染后的突变形式活性。（M，N）K562和HL60细胞中p65与miR-181d启动子结合的ChIP检测。结果来自3个独立的实验*P（P）< 0.05, **第页< 0.01, ***第页<0.001，ns，无统计学意义。
图6
图6
抑制miR-181d抑制白血病细胞增殖体内试验。 （A）NOD/SCID雄性小鼠异种移植模型。miR-181d安替戈米尔给药实验的时间表。原发肿瘤外观（B）和肿瘤生长曲线（C）和平均肿瘤重量（D）miR-181d安替戈米尔或对照治疗的异种移植模型。（E）RT-PCR分析显示各组miR-181d安替戈米尔的疗效。（F–I）对显示的肿瘤进行IHC染色和RBP2、p65和Ki67的相对IHC评分。在三个独立的实验中获得了类似的结果。（J）调查结果摘要。CML-BP发病机制中的一种新的表观遗传机制：在CML进展中，miR-181d的过度表达直接抑制RBP2的表达，低水平的RBP2不能抑制p65的表达，从而增加miR-181的表达并刺激细胞增殖*第页< 0.05, **第页< 0.01, ***第页< 0.001.
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. 貌似JF。慢性髓系白血病。《柳叶刀》（2015）385（9976）：1447–59。10.1016/S0140-6736（13）62120-0-内政部-公共医学
    1. Perrotti D、Jamieson C、Goldman J、Skorski T。慢性髓性白血病：Blastic转化机制。临床投资杂志（2010）120（7）：2254–64。10.1172/JCI41246号-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Hehlmann R.我如何处理中情局爆炸危机。《血液》（2012）120（4）：737–47。10.1182/血液-2012-03-380147-内政部-公共医学
    1. 博斯科维奇A，Rando OJ。跨代表观遗传。《基因年鉴》（2018）52:21–41。10.1146/anurev-genet-120417-031404-内政部-公共医学
    1. Wagner KW、Alam H、Dhar SS、Giri U、Li N、Wei Y等。Kdm2a通过表观增强Erk1/2信号传导促进肺肿瘤发生。临床投资杂志（2013）123（12）：5231–46。10.1172/JCI68642-内政部-项目管理咨询公司-公共医学