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.2021年3月;21(3):217.
doi:10.3892/ol.2021.12478。 Epub 2021年1月20日。

缺氧增加人骨肉瘤细胞干细胞标志物的表达

附属公司

缺氧增加人骨肉瘤细胞中干细胞标记物的表达

林金銮等。 Oncol Lett公司. 2021年3月.

摘要

骨肉瘤是最常见的原发性骨恶性肿瘤。骨肉瘤细胞具有缺氧微环境是一种常见现象。缺氧可以使几种恶性肿瘤细胞脱分化为干细胞样表型。然而,缺氧在人骨肉瘤细胞中诱导干细胞生成和肿瘤干细胞(CSC)标记物表达中的作用尚未见报道。本研究检测了缺氧对人骨肉瘤MNNG/HOS细胞中干细胞样细胞的影响。在1%氧气培养下,MNNG/HOS细胞中CSCs标记物(Oct-4、Nanog和CD133)的表达增加。此外,在缺氧条件下培养的MNNG/HOS细胞更有可能增殖成球形,并导致更大的异种移植瘤。低氧还增加了低氧诱导因子-1α的mRNA和蛋白水平。然后使用雷帕霉素来抑制缺氧反应,这表明雷帕霉素可以降低HIF-1α蛋白水平。雷帕霉素抑制MNNG/HOS细胞中HIF-1α蛋白和CSCs标记物(Oct4、Nanog和CD133)的表达。此外,雷帕霉素预处理降低了MNNG/HOS细胞形成球形和异种移植瘤的效率。结果表明,低氧(1%氧气)可使部分MNNG/HOS细胞脱分化为干细胞样表型,mTOR信号通路通过调节HIF-1α蛋白的表达参与这一过程。

关键词:肿瘤干细胞;缺氧;mTOR;骨肉瘤细胞。

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数字

图1。
图1。
由MNNG/HOS细胞形成的球状星团。(A) MNNG/HOS细胞在不同条件下(放大倍数×400)在超低附着6孔板中培养3天后形成球形簇。(B) 培养3天后的球体数量(直径>100µm)。(C) 培养3天后,球体的直径(>100µm)*P<0.05和#P> 0.05与对照组。
图2。
图2。
MNNG/HOS细胞的肿瘤增殖体内(A)不同组裸鼠皮下注射MNNG/HOS细胞的肿瘤生长曲线。(B) 不同组异种移植瘤的大小。(C) 不同组处死后切除肿瘤重量。(D) 各组处死后切除肿瘤体积*P<0.05和#P> 0.05与对照组。
图3。
图3。
肿瘤干细胞标记物表达的变化。(A) CD133型+采用流式细胞术分析不同组的MNNG/HOS细胞。(Aa)显示不同MNNG/HOS细胞组中CD133+细胞表达率的代表性图像。(Ab)不同MNNG/HOS细胞组CD133+细胞表达水平的变化。(B) 使用逆转录定量PCR分析不同组中(Ba)OCT4和(Bb)Nanog的mRNA水平。数据被规范化为GAPDH,并表示为相对表达式(相对于对照)。(C) 用western blotting分析不同组培养的MNNG/HOS细胞中OCT4、Nanog和CD133蛋白的表达。β-actin作为内部对照*P<0.05和#P> 0.05与对照组相比。
图4。
图4。
HIF-1α、p-P70S6K、t-P70S6K、p-mTOR、t-mTOR表达的变化。(A) 用逆转录定量PCR分析HIF-1αmRNA水平。所有数据均归一化为GAPDH,并表示为相对表达式(相对于对照)。(B) 不同组MNNG/HOS细胞HIF-1α、p-mTOR、t-mTOR,p-P70S6K和t-P70S6K表达的代表性图像。(C) 量化不同组MNNG/HOS细胞中HIF-1α、p-mTOR、t-mTOR,p-P70S6k和t-P70S6k的表达水平。β-actin作为负荷对照*P<0.05和#P> 0.05与对照组。缺氧诱导因子1α;p-,磷酸化;t-,总计。

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