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.2021年2月8日；7(1):28.
doi:10.1038/s41420-021-00409-z。

HMGB1通过TRIM30α调节调节癌细胞STING介导的衰老

李杰中（Je-Jung Lee） 1 2, In Ho公园 2 三, 民政事务总署署长 1 2, 吴宗烈（Woo Joong Rhee） 1, Songhee H Kim（宋熙·H·金） 1 2, Jeon-Soo Shin先生 4 5 6 7 8
附属公司

HMGB1通过TRIM30α调节调节癌细胞STING介导的衰老

李杰中（Je-Jung Lee）等。 细胞死亡发现. .

摘要

尽管细胞衰老已成为癌症的一个新的治疗概念，但其潜在机制尚不清楚。高迁移率族蛋白B1（HMGB1）和干扰素基因刺激物（STING）参与衰老。然而，它们在衰老中的相互作用尚未见报道。因此，在本研究中，我们研究了HMGB1和STING在癌症和其他细胞衰老中的关系。在小鼠黑色素瘤细胞和其他几种细胞系中，阿霉素治疗以HMGB1依赖的方式诱导衰老。这些反应由STING介导，STING的这种功能由E3连接酶三分基序蛋白30α（TRIM30α）负调控。我们还发现HMGB1与TRIM30α启动子结合，然后通过抑制其转录来抑制其表达，从而增强STING诱导的衰老。信号转导子和转录激活子6（STAT6）和p21进一步介导了这一机制。总的来说，我们的研究结果表明HMGB1通过调节TRIM30α作为另一种抗癌机制来调控STING-STAT6-p21介导的衰老。

PubMed免责声明

利益冲突声明

提交人声明他们没有利益冲突。

数字

图1
图1。STING诱导的衰老。
A类–C类用空载体转染B16-F10细胞(C类)或STING质粒24 Dox治疗前h，持续3天。拍摄了细胞(A类)，SA-β-GAL阳性细胞(B类)被计算在内(C类). 在Dox治疗前，用不同浓度的空载体（EV）或STING质粒转染B16-F10细胞，以及相对细胞数(D类)p21的western blots(E类). 在24小时前用Si C或STING转染B16-F10细胞 在第3天评估h to Dox治疗和组蛋白3赖氨酸9三甲基化（H3K9me3）表达(F类).G公司–K（K）J774细胞转染100 nM Si C（对照）或Si STING 24 100次治疗前h ng/ml剂量。Dox治疗后第3天，对细胞进行拍照(G公司)和SA-β-GAL阳性细胞(小时)被计算在内(我). 然后量化相对细胞数(J型)进行western blotting(K（K）). 定量数据表示为平均值 ± S.D.公司*P（P） ≤ 0.05, **P（P） ≤ 0.01, ***P（P） ≤ 0.001,n个 = 3个独立试验标尺，50 微米。
图2
图2。HMGB1在衰老过程中调节STING。
B16-F10细胞转染100 nM Si C或Si HMGB1 24 100次治疗前h 纳克/毫升Dox，在Dox治疗后第3天进行western印迹(A类). J774和HEK293T细胞转染100 nM硅HMGB1 24 100次治疗前h 纳克/毫升Dox，在Dox治疗后第3天进行western印迹(B类,C类). 在用100 ng/mL剂量。然后在Dox治疗后第3天进行蛋白质印迹(D类). HMGB1-WT vs.-KO MEF用Dox处理，并进行western blotting(E类). 用STING质粒24转染HMGB1-KO MEFs Dox治疗前h，然后发生形态学变化(F类)Dox治疗后第3天评估相对细胞数(G公司). 通过将B16-F10细胞植入C57BL/6小鼠体内，产生肿瘤。然后向小鼠注射9 mg Dox/kg体重，第10天。Dox治疗后第0、3和8天收集肿瘤(小时)Dox治疗后第8天，用SA-β-GAL染色液对肿瘤进行染色(我)然后进行western blotting(J型).
图3
图3。TRIM30α靶向通过STING诱导衰老。
A类–C类用Si C或Si TRIM30α24转染B16细胞 Dox治疗前h，持续3天。拍摄了细胞(A类)，和SA-β-GAL阳性细胞(B类)被计算在内(C类). 用不同浓度的Si TRIM30α转染B16细胞，并在Dox治疗后第3天进行western blotting(D类).E类,F类通过将B16-F10细胞植入小鼠体内产生肿瘤。植入后第14天，将肿瘤暴露于IR。3小时后，收集肿瘤并进行western blotting分析。G公司–K（K）采用TRIM30αWT和KO小鼠BMDMs分析TRIM30对衰老的影响。使用TRIM30α-WT和-KO BMDM对TRIM30 a进行实时PCR(G公司). TRIM30α-WT和-KO BMDM用100 ng/mL Dox和形态变化(小时：左，放大图像：右），图像(我)、和计数(J型)β-GAL阳性细胞在治疗后第3天进行评估。在100次治疗后的指定时间进行蛋白质印迹 纳克/毫升Dox(K（K）).
图4
图4。HMGB1调节TRIM30α诱导衰老。
HMGB1-WT和-KO MEF用100 ng/ml剂量持续3天，然后进行western印迹(A类)和qPCR(B类)进行TRIM30α表达评估。用Si C或Si HMGB1 24转染细胞 Dox治疗B16-F10细胞3天后，用HMGB1抗体进行免疫沉淀。PCR使用TRIM30α启动子特异性引物进行ChIP分析(C类)，并量化结合水平(D类). 在Dox治疗后第3天，通过荧光素酶分析测定TRIM30α启动子活性(E类). 以浓度依赖性的方式将Si HMGB1转染细胞2天，并进行western blotting(F类). 用HMGB1质粒转染细胞(G公司)或Si HMGB1(小时)连续2天，进行western印迹。HMGB1-KO MEF转染100个 nM Si C或Si TRIM30α持续3天。拍摄形态学变化(我)，蛋白质表达通过western blotting进行评估(J型)，并通过qPCR评估mRNA表达(K（K）). 定量数据表示为平均值 ± S.D.公司*P（P） ≤ 0.05时**P（P） ≤ 0.01, ***P（P） ≤ 0.001,n个 = 3个独立试验标尺，50 微米。
图5
图5。STAT6介导的HMGB1依赖性衰老。
B16-F10细胞用Dox以时间依赖的方式处理，并用指示的抗体进行蛋白质印迹(A类). 用Si C或Si STING 24转染B16-F10细胞 在Dox治疗前h进行指定时间的免疫印迹试验(B类). 在指定时间评估磷酸IRF3表达水平(C类). 用Si STAT6 24转染B16-F10细胞 Dox治疗前h的指定时间，并在Dox治疗后第3天评估western blot(D类). 在Si STAT6转染后第3天评估IL-6和IL-8的相对mRNA表达水平(E类). 定量数据表示为平均值 ± S.D.公司*P（P） ≤ 0.05, **P（P） ≤ 0.01, ***P（P） ≤ 0.001,n个 = 3个独立试验标尺，50 微米。
图6
图6。提出HMGB1介导遗传毒性应激诱导衰老的机制。
虚线框显示了我们在当前研究中的主要发现。
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