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.2021年3月；21(3):218.
doi:10.3892/etm.2021.9650。 Epub 2021年1月15日。

miR-155促进MCF-7细胞增殖和上皮-间质转化

刘晓燕 1, 李勇军 2, 卓丽 三, 田厚 4
附属公司

miR-155促进MCF-7细胞增殖和上皮-间质转化

刘晓燕等。 实验治疗学. 2021年3月.

摘要

乳腺癌是全世界女性癌症相关死亡的第二大原因。越来越多的证据表明，microRNAs（miRNAs）在改善BC的诊断和治疗方面显示出巨大潜力。在本研究中，使用逆转录定量（RT-q）PCR在人类BC组织中检测到miRNA-155。采用RT-qPCR和western blot分析人BC组织中转化生长因子β受体Ⅱ型（TGFBR2）的水平。培养MCF-7细胞并用miR-155抑制剂处理，然后进行MTT分析，以确定miR-15对MCF-7增殖的作用。随后，使用RT-qPCR和蛋白质印迹分析法分析TGFBR2和上皮-间充质转化（EMT）相关分子。使用双荧光素酶分析验证miR-155与TGFBR2的直接结合。与配对正常组织相比，人类BC组织中miR-155表达水平较高，TGFBR2表达水平较低。此外，miR-155的表达水平与肿瘤大小、TNM分期和BC的转移状态有关。用miR-155抑制剂转染MCF-7细胞导致细胞增殖减少，EMT过程受到抑制，其特征是上皮标记物E-cadherin和CK18表达上调，间充质标记物纤维连接蛋白和平滑肌肌动蛋白α表达下调。转染miR-155抑制剂还导致TGFBR2表达增加，miR-155-可能通过直接结合TGFBR2的3'非翻译区来调节TGFBR2，这是通过双核糖核酸酶分析确定的。根据本研究结果，miR-155可能是BC患者的一种新的诊断生物标志物和治疗靶点。

关键词：MCF-7；乳腺癌；上皮-间质转化；miR-155；增殖。

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数字

图1
图1
miR-155在BC组织样本中表达上调，并与TGFBR2表达呈负相关。（A） 人类乳腺癌组织和正常对照样品中miR-155和TGFBR2 mRNA表达水平的逆转录定量PCR分析。结果是相对于赋值为1的正常对照组的值来表示的。该行表示平均表达式值。**P<0.01。（B） 典型的蛋白质印迹显示TGFBR2蛋白在人类BC组织和正常对照中的表达。GAPDH被用作负荷控制。BC，乳腺癌；TGFBR2，转化生长因子β受体Ⅱ型；miR-155，microRNA-155。
图2
图2
miR-155抑制剂降低miR-155.的表达。与对照组和NC组相比，miR-155抑制剂转染后，miR-15的表达显著降低。**与对照组相比，P<0.01。miR-155，microRNA-155。
图3
图3
miR-155抑制剂抑制MCF-7细胞的增殖。采用MTT法检测各组（对照组、NC组、miR-155抑制剂组）的细胞增殖情况。数据表示在490 nm处测量的光密度，并表示为三个单独实验的平均值±标准偏差。**与对照组相比，P<0.01。miR-155，microRNA-155。
图4
图4
miR-155抑制剂增强TGFBR2的表达并介导EMT相关分子的表达。miR-155抑制剂对（A）TGFBR2、（B）CK18、（C）E-cadherin、（D）FN和（E）α-SMA表达影响的反转录定量PCR分析。结果是相对于赋值为1的控件的值来表示的。**与对照组相比，P<0.01。（F） 典型的western blot显示每个细胞组TGFBR2、CK18、E-cadherin、FN和α-SMA的表达。GAPDH被用作负荷控制。miR-155，microRNA-155；TGFBR2，转化生长因子β受体Ⅱ型；上皮-间充质转化；纤维连接蛋白；SMA-α，平滑肌肌动蛋白α。
图5
图5
TGFBR2是miR-155的直接靶点。（A） 采用逆转录定量PCR检测miR-155模拟物转染细胞中miR-155的表达水平。**与对照组相比，P<0.01。（B） 序列比对显示了TGFBR2和突变核苷酸3'UTR中miR-155结合位点的相对位置。序列用于构建荧光素酶报告质粒。（C） 每个报告构建物（p-TGFBR2-wt或p-TGFBR-2-mut）在293T细胞中与miR-155模拟物或NC共转染，24小时后进行双荧光素酶分析。荧光素素酶活性归一化为Renilla，并表示为相对于NC的活性，NC任意设置为1。数据表示为三个独立实验的平均值±标准偏差。##P<0.01。miR-155，microRNA-155；TGFBR2，转化生长因子β受体Ⅱ型；UTR，非翻译区；NC阴性对照；NC:miR-NC模拟。
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