Exosomes derived from retinoblastoma cells enhance tumour deterioration by infiltrating the microenvironment

doi:10.3892/or.2020.7858

.2021年1月；45(1):278-290.

doi:10.3892/或.2020.7858。 Epub 2020年11月18日。

来自视网膜母细胞瘤细胞的外显子通过渗透微环境增强肿瘤恶化

陈水莲^#¹, 席晨^#¹, 金秋¹, 裴晨¹, 韩晓坤¹, 吴一辉¹, 壮杰杰¹, 孟阳¹, 吴传格兰¹, 吴南丹¹, 杨莹¹, Jian Ge公司¹, 余克明（Keming Yu）¹, 景庄¹

附属公司

采购管理信息： 33416154
预防性维修识别码： PMC7716702号
内政部： 10.3892/或.2020.7858

来自视网膜母细胞瘤细胞的外显子通过渗透微环境增强肿瘤恶化

陈水莲等。及国际医学权威期刊. 2021年1月.

.2021年1月；45(1):278-290.

doi:10.3892/或.2020.7858。 Epub 2020年11月18日。

作者

陈水莲^#¹, 席晨^#¹, 金秋¹, 裴晨¹, 韩晓坤¹, 吴一辉¹, 壮族杰杰¹, 孟阳¹, 吴传格兰¹, 吴南丹¹, 杨莹¹, Jian Ge公司¹, 余克明（Keming Yu）¹, 井庄¹

附属

¹中山大学中山眼科中心眼科国家重点实验室，广东广州510000。

^#贡献均等。

采购管理信息： 33416154
预防性维修识别码： PMC7716702号
内政部： 10.3892/或.2020.7858

摘要

患有恶性视网膜母细胞瘤的幼儿（5岁以下）的生存率仍然很低，迫切需要澄清肿瘤发生的机制。本研究旨在揭示视网膜母细胞瘤细胞外泌体（EXO）在肿瘤发展中的作用。体外数据表明，来自WERI‑Rb1细胞的EXO显著抑制巨噬细胞的抗肿瘤活性，并通过增加单核细胞趋化蛋白1（也称为C‑C基序趋化因子配体2）水平诱导骨髓间充质干细胞促进肿瘤生长。异种移植模型的体内数据还显示，EXO渗入脾脏，导致白细胞和自然杀伤（NK）细胞减少。因此，与对照组相比，注射EXO的肿瘤中肿瘤相关巨噬细胞的比例增加，NK细胞的比例降低。EXO被Kupffer细胞吸收，在肝脏中观察到更多的转移。因此，这些结果表明，来自视网膜母细胞瘤的EXO通过浸润微环境促进肿瘤进展。此外，在EXO中可检测到微小RNA（miR），包括miR‑92a、miR‑20a、miR‑129a和miR‑17，以及C‑X‑C趋化因子受体4型和血小板反应蛋白-1，这可能是EXO介导的肿瘤恶化的原因。

关键词：外泌体；视网膜母细胞瘤；巨噬细胞；肿瘤微环境；转移。

PubMed免责声明

数字

**图1。**
来自WERI-Rb1细胞的EXO略微增加细胞活力。（A） WERI-Rb1细胞松散的葡萄状簇。比例尺，100µm。（B） WERI-Rb1 EXO的典型透射电镜图像。囊泡的直径在30到100纳米之间。比例尺，100 nm。（C）纳米流式细胞术追踪分析表明，WERI-Rb1细胞产生的EXO的大小分布和数量范围为50至150 nm，平均大小约为77 nm。（D） Western blot分析WERI-Rb1细胞EXO的不同蛋白标记物（HSP70、CD9、TSG101和CD63）。（E）用PKH26标记的EXO被WERI-Rb1细胞吞噬。比例尺，20µm。（F）将PBS或EXO添加到WERI-Rb1细胞中，并使用细胞计数试剂盒-8（红色，PKH26；蓝色，DAPI）测定WERI-Rb1细胞的活性。（G）逆转录定量PCR显示PBS组和EXO组VEGF、PCNA和CXCR4的mRNA水平没有显著差异。数据来自三个独立的实验*P<0.05。EXO，外显体；ns，无显著性；HSP70、热休克70kDa蛋白1A；增殖细胞核抗原；CXCR4，C-X-C趋化因子受体4型；RB，视网膜母细胞瘤。

**图2。**
WERI-Rb1细胞产生的EXO影响巨噬细胞和BMSCs的抗肿瘤活性*在体外*（A）用PKH26标记的EXO被RAW264.7细胞吞噬。（绿色，CD68；红色，PKH26）。比例尺，20µm。（B） EXO处理后RAW264.7细胞的形态学变化。比例尺，50µm。（C） RT-qPCR分析IL-6、MCP-1和TNF-α在RAW264.7细胞与WERI-Rb1细胞衍生的EXO孵育24小时后的表达。（E） WERI-Rb1细胞与BMSCs共培养系统，PBS或EXO处理的BMSCs与WERI-Rb1细胞共培养24 h。（F）RT-qPCR分析共培养系统中BMSCs中IL-6、MCP-1和TNF-α的表达。（G）来自共培养系统的WERI-Rb1细胞和BMSCs的细胞活力。数据来自三个独立的实验*与PBS组相比，P<0.05。EXO，外显体；ns，无显著性；RT-qPCR、逆转录定量PCR；骨髓间充质干细胞；MCP-1，单核细胞趋化蛋白-1；RB，视网膜母细胞瘤。

**图3。**
来自WERI-Rb1细胞的EXO被肿瘤细胞吞噬，并促进视网膜母细胞瘤的生长。（A） PKH26标记的EXO（红色）在EXO注射后2或10天被肿瘤组织的细胞内吞。DAPI染色细胞核。比例尺，50或20µm。（B）注射WERI-Rb1细胞后15天异种移植模型的典型宏观外观。EXO注射小鼠的肿瘤比PBS注射小鼠的大。比例尺，1 cm。（C）异种移植模型中的肿瘤体积变化。与注射PBS组相比，注射EXO后10天，注射组的肿瘤体积显著增加，而在治疗后15天，肿瘤体积无显著性差异（n=10）。（D） PCNA蛋白的代表性蛋白质印迹图像和半定量数据显示，EXO增加了肿瘤中PCNA的表达（n=7）。（E） Bcl-2、Bax、总半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3和裂解半胱氨酸蛋白酶-3蛋白的代表性western blot图像和半定量数据表明，EXO增加了肿瘤中的Bcl-2与Bax的比率，EXO降低了裂解半胱酶-3与总半胱酶3的比率（n=8）*与PBS组相比，P<0.05。EXO，外显体；增殖细胞核抗原。

**图4。**
WERI-Rb1细胞来源的EXO可促进视网膜母细胞瘤的恶性化。（A）用免疫荧光标记波形蛋白（绿色）和Ki-67（红色）。比例尺，150µm。（B）定量数据显示肿瘤中波形蛋白和Ki-67的相对阳性区域（n=5）。（C） Western blotting显示PBS注射组和EXO注射组的肿瘤中CXCR4和MMP2蛋白表达。（D）肿瘤中CXCR4和MMP2表达的半定量（n=5）。（E） PBS注射和EXO注射肿瘤中CD68（绿色）染色。比例尺，2 mm或100µm。（F）定量数据显示，EXO注射增加了CD68阳性细胞（n=6）。（G） PBS注射和EXO注射肿瘤中CD49b（红色）的染色。比例尺，50µm。（H）定量数据显示CD49b阳性细胞减少（n=5）*P<0.05和***P<0.001。EXO，外显体；CXCR4，C-X-C趋化因子受体4型。

**图5。**
来自WERI-Rb1细胞的EXO抑制先天免疫体内PKH26 EXO（红色）在EXO注射后2天或10天被来自脾脏组织（A）的细胞内化。比例尺，50或20µm。（C） PKH26标记的EXO被脾脏中CD68阳性巨噬细胞吞噬（绿色，CD68；红色，PKH26；蓝色，DAPI）。比例尺，5µm。（D）通过PBS注射组或EXO注射组脾脏中的免疫荧光标记Ki-67（红色）和CD45（绿色）。比例尺，200或50µm。（E）定量数据显示，PBS注射组和EXO注射组（n=5）脾脏中的CD45阳性细胞。（F） PBS注射组和EXO注射组脾脏中CD45和Ki-67双阳性细胞的定量（n=5）。（G） Sham（正常小鼠）、PBS注射组和EXO注射组脾脏CD49b（红色）染色。比例尺，50µm。（H） Sham组（n=3）、PBS注射组（n=5）和EXO注射组（n=5）脾脏中CD49b阳性细胞的定量*P<0.05，**P<0.01和***P<0.001。EXO，外显子。

**图6。**
来自WERI-Rb1细胞的EXO加速视网膜母细胞瘤转移。PKH26标记的EXO（红色）在EXO注射后第2天或第10天被来自肝组织（A）或（B）的CD68阳性Kupffer细胞（绿色）内化。DAPI染色细胞核，CD68（绿色）标记巨噬细胞。比例尺，50或10µm。（C） PBS注射组和EXO注射组的肝脏宏观外观（白色箭头，转移性肝结节；绿色箭头，肝硬化）。（D） PBS注射组和EXO注射组的肝脏中Ki-67（红色）染色。比例尺，200µm。（E）定量数据显示，通过EXO注射（n=5），Ki-67阳性面积（%）增加**P<0.01。EXO，外显子。

**图7。**
WERI-Rb1细胞衍生EXO的构成。（A） WERI-Rb1细胞EXO中与肿瘤恶化相关的miRNAs选择的逆转录定量PCR分析。（B） Western blot图像显示CXCR4和TSP-1蛋白在WERI-Rb1细胞和来自WERI-Rb细胞的EXO中的表达。EXO，外显体；CXCR4，C-X-C趋化因子受体4型；TSP-1、血小板反应蛋白-1；miR/miRNA，microRNA；+，阳性表达；-，否定表达。

**图8。**
WERI-Rb1细胞产生的EXO在视网膜母细胞瘤中的作用。体外来自RB细胞的EXO可通过激活BMSCs促进细胞生长，并抑制巨噬细胞的抗肿瘤作用。体内来自RB细胞的EXO可以促进肿瘤生长，抑制脾脏中的免疫细胞，促进肝转移。EXO，外显体；视网膜母细胞瘤；骨髓间充质干细胞；NK，自然杀手；TAM，肿瘤相关巨噬细胞。

请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

缺氧间充质干细胞衍生的外泌体通过转移miR-126促进骨折愈合。
刘伟、李莉、荣毅、钱德、陈杰、周Z、罗毅、蒋德、程莉、赵S、孔菲、王杰、周Z、徐T、龚F、黄毅、顾C、赵X、白J、王菲、赵W、张莉、李X、殷G、樊J、蔡伟。刘伟等。生物学报。2020年2月；103:196-212. doi:10.1016/j.actbio.2019.12.020。Epub 2019年12月17日。生物学报。2020 采购管理信息：31857259
来自γδ-T细胞的外显子与放射治疗协同作用，并在免疫抑制微环境中对鼻咽癌保持抗肿瘤活性。
Wang X，Zhang Y，Mu X，Tu CR，Chung Y，Tsao SW，Chan GC，Leung WH，Lau YL，Liu Y，Tu W。王X等。免疫疗法癌症杂志。2022年2月；10（2）：e003832。doi:10.1136/jitc-2021-003832。免疫疗法癌症杂志。2022 采购管理信息：35105688 免费PMC文章。
DLBCL衍生的EXO在淋巴瘤中的双重作用可提高体外DC疫苗的效力，同时有利于体内肿瘤的发生。
陈Z、游L、王L、黄X、刘H、魏JY、朱L、钱伟。 Chen Z等。《实验临床癌症研究杂志》2018年8月13日；37(1):190. doi:10.1186/s13046-018-0863-7。 2018年实验临床癌症研究杂志。采购管理信息：30103789 免费PMC文章。
肿瘤衍生的外源性microRNA在肿瘤微环境中塑造免疫系统：最新技术。
Fanini F，Fabbri M。 Fanini F等人。精液细胞开发生物学。2017年7月；67:23-28. doi:10.1016/j.semcdb2016.12.004。Epub 2016年12月9日。精液细胞开发生物学。2017 采购管理信息：27956165 免费PMC文章。审查。
外体和外体microRNA在肝细胞癌中的作用：诊断和抗肿瘤治疗的潜力（综述）。
潘建华、周浩、赵XX、丁浩、李伟、秦磊、潘玉龙。潘建华等。国际分子医学杂志，2018年4月；41(4):1809-1816. doi:10.3892/ijmm.2018.3383。Epub 2018年1月11日。国际分子医学杂志，2018年。采购管理信息：29328436 免费PMC文章。审查。

查看所有类似文章

引用人

健康与疾病中的唾液外显子：眼睛的未来展望。
Liu A、Hefley B、Escandon P、Nicholas SE、Karamichos D。刘安等。国际分子科学杂志。2023年3月28日；24(7):6363. doi:10.3390/ijms24076363。国际分子科学杂志。2023 采购管理信息：37047335 免费PMC文章。审查。
细胞外囊泡作为炎症性眼病诊断和治疗的新视野：文献综述。
Habibi A、Zarei-Behjani Z、Falamarzi K、Malekpour M、Ebrahimi F、Soleimani M、Nejabat M、Khosravi A、Moayedfard Z、Pakbaz S、Dehdari Ebrahimin N、Azarpira N。 Habibi A等人。前免疫。2023年3月9日；14:1097456. doi:10.3389/fimmu.2023.1097456。eCollection 2023年。前免疫。2023 采购管理信息：36969177 免费PMC文章。审查。
Piperlongumine直接或通过细胞外小泡抑制化疗耐药转移性视网膜母细胞瘤细胞的增殖和致癌MYCN表达。
Shi C、Huang K、Soto J、Sankaran R、Kalia V、Onwumere O、Young M、Einbond L、Redenti S。史C等。生物药物治疗。2023年5月；161:114554. doi:10.1016/j.biopha.2023.114554。Epub 2023年3月20日。生物药物治疗。2023 采购管理信息：36940616 免费PMC文章。
非编码RNA和外体非编码RNA在视网膜母细胞瘤进展中的作用。
Ahangar Davoodi N、Najafi S、Naderi Ghale-Noie Z、Piranviseh A、Mollazadeh S、Ahmadi Asouri S、Asemi Z、Morshedi M、Tamehri Zadeh SS、Hamblin MR、Sheida A、Mirzaei H。 Ahangar Davoodi N等人。前细胞发育生物学。2022年12月23日；10:1065837. doi:10.3389/fcell.2022.1065837。eCollection 2022年。前细胞发育生物学。2022 采购管理信息：36619866 免费PMC文章。审查。
细胞外囊泡的分子对接和细胞内转运以实现高效药物传递。
松坂义郎。 Matsuzaka Y等人。国际分子科学杂志。2022年10月26日；23(21):12971. doi:10.3390/ijms232112971。国际分子科学杂志。2022 采购管理信息：36361760 免费PMC文章。审查。

查看所有“被引用”文章

工具书类

1. 亚洲的Jain M、Rojanaporn D、Chawla B、Sundar G、Gopal L、Khetan V视网膜母细胞瘤。Eye（Lond）2019年；33:87–96. doi:10.1038/s41433-018-0244-7。-内政部-项目管理委员会-公共医学
1. Francis JH、Roosipu N、Levin AM、Brodie SE、Dunkel IJ、Gobin YP、Abramson DH。双侧视网膜母细胞瘤的当前治疗：动脉内和玻璃体内化疗的影响。肿瘤。2018;20:757–763。doi:10.1016/j.neo.2018.05.007。-内政部-项目管理委员会-公共医学
1. Abramson DH、Shields CL、Munier FL、Chantada GL。2015年视网膜母细胞瘤的治疗：同意与反对。JAMA眼科。2015;133:1341–1347. doi:10.1001/jamaephtholol.2015.3108。-内政部-公共医学
1. Xu L，Li W，Shi Q，Wang M，Li H，Yang X，Zhang J.MicroRNA-936通过直接靶向HDAC9和阻断PI3K/AKT通路抑制视网膜母细胞瘤的恶性表型。Oncol Rep.2020；43:635–645.-项目管理委员会-公共医学
1. 鹌鹑DF，Joyce JA。肿瘤进展和转移的微环境调控。《国家医学》2013；19:1423–1437. doi:10.1038/nm.3394。-内政部-项目管理委员会-公共医学

MeSH术语

行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动

物质

行动
行动
行动

LinkOut-更多资源

[1] 亚洲的Jain M、Rojanaporn D、Chawla B、Sundar G、Gopal L、Khetan V视网膜母细胞瘤。Eye（Lond）2019年；33:87–96. doi:10.1038/s41433-018-0244-7。-内政部-项目管理委员会-公共医学

[2] 亚洲的Jain M、Rojanaporn D、Chawla B、Sundar G、Gopal L、Khetan V视网膜母细胞瘤。Eye（Lond）2019年；33:87–96. doi:10.1038/s41433-018-0244-7。-内政部-项目管理委员会-公共医学

[3] Francis JH、Roosipu N、Levin AM、Brodie SE、Dunkel IJ、Gobin YP、Abramson DH。双侧视网膜母细胞瘤的当前治疗：动脉内和玻璃体内化疗的影响。肿瘤。2018;20:757–763。doi:10.1016/j.neo.2018.05.007。-内政部-项目管理委员会-公共医学

[4] Francis JH、Roosipu N、Levin AM、Brodie SE、Dunkel IJ、Gobin YP、Abramson DH。双侧视网膜母细胞瘤的当前治疗：动脉内和玻璃体内化疗的影响。肿瘤。2018;20:757–763。doi:10.1016/j.neo.2018.05.007。-内政部-项目管理委员会-公共医学

[5] Abramson DH、Shields CL、Munier FL、Chantada GL。2015年视网膜母细胞瘤的治疗：同意与反对。JAMA眼科。2015;133:1341–1347. doi:10.1001/jamaephtholol.2015.3108。-内政部-公共医学

[6] Abramson DH、Shields CL、Munier FL、Chantada GL。2015年视网膜母细胞瘤的治疗：同意与反对。JAMA眼科。2015;133:1341–1347. doi:10.1001/jamaephtholol.2015.3108。-内政部-公共医学

[7] Xu L，Li W，Shi Q，Wang M，Li H，Yang X，Zhang J.MicroRNA-936通过直接靶向HDAC9和阻断PI3K/AKT通路抑制视网膜母细胞瘤的恶性表型。Oncol Rep.2020；43:635–645.-项目管理委员会-公共医学

[8] Xu L，Li W，Shi Q，Wang M，Li H，Yang X，Zhang J.MicroRNA-936通过直接靶向HDAC9和阻断PI3K/AKT通路抑制视网膜母细胞瘤的恶性表型。Oncol Rep.2020；43:635–645.-项目管理委员会-公共医学

[9] 鹌鹑DF，Joyce JA。肿瘤进展和转移的微环境调控。《国家医学》2013；19:1423–1437. doi:10.1038/nm.3394。-内政部-项目管理委员会-公共医学

[10] 鹌鹑DF，Joyce JA。肿瘤进展和转移的微环境调控。《国家医学》2013；19:1423–1437. doi:10.1038/nm.3394。-内政部-项目管理委员会-公共医学

将引文保存到文件

电子邮件引文

添加到集合

添加到我的书目

您保存的搜索

为外部引文管理软件创建文件

你的RSS订阅源

来自视网膜母细胞瘤细胞的外显子通过渗透微环境增强肿瘤恶化

附属

来自视网膜母细胞瘤细胞的外显子通过渗透微环境增强肿瘤恶化

作者

附属

摘要

数字

类似文章

引用人

工具书类

MeSH术语

物质

LinkOut-更多资源

全文源

医疗

研究材料

其他

摘要

数字

类似文章

引用人

工具书类

MeSH术语

物质

相关信息

LinkOut-更多资源

全文源

医疗

研究材料

其他