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.2021年3月;23(3):169.
doi:10.3892/mmr.20.11808。 Epub 2021年1月5日。

lncRNA HOTAIR对心肌缺血再灌注损伤诱导细胞凋亡的影响

附属公司

lncRNA HOTAIR对心肌缺血再灌注损伤诱导细胞凋亡的影响

Jijing Fang公司等。 分子医学代表. 2021年3月.

摘要

本研究旨在研究长非编码核糖核酸(lncRNA)HOX转录物反义基因间RNA(HOTAIR)对缺血再灌注损伤诱导的细胞凋亡的影响。通过lncRNA微阵列筛选心肌缺血大鼠中的差异lncRNA,并使用逆转录定量聚合酶链反应分析缺氧诱导的心肌细胞中lncRNA HOTAIR和微小RNA(miR)‑130a-3p的表达水平。使用细胞转染、lncRNA敲除、细胞计数试剂盒‑8、流式细胞术、western印迹、双荧光素酶报告分析和RNA免疫沉淀研究lncRNA HOTAIR在心脏毒性中的机制。大鼠缺血心肌中lncRNA HOTAIR的表达水平显著下调。HOTAIR在H9c2(大鼠心肌细胞系)细胞中的过度表达可抑制H2O2诱导的细胞凋亡。HOTAIR与miR‑130a‑3p之间存在直接相互作用,小鼠双分钟4(MDM4)也被发现是miR‑的潜在靶点。转染miR‑130a‑3p的H9c2细胞中MDM4的过度表达模拟了细胞凋亡的增加,而miR−130a−3p靶向抑制MDM4可促进H2O2诱导的H9c 2细胞凋亡。总之,HOTAIR通过miR‑130a‑3p/MDM4轴抑制H2O2诱导的H9c2细胞凋亡。

关键词:长非编码RNA;HOX转录物反义基因间RNA;微RNA‑130a‑3p;小鼠双分4;心肌缺血再灌注损伤。

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数字

图1。
图1。
HOTAIR在小鼠缺血心肌组织和H2O(运行)2-处理的H9c2细胞。(A) 采用lncRNA微阵列筛选心肌梗死大鼠的差异lncRNA。(B) 用100µM H处理H9c2细胞2O(运行)2在不同时间点(0、3、6和12 h),用RT-qPCR检测HOTAIR表达水平。(C) 用0–100µM H处理H9c2细胞后2O(运行)2连续12h,RT-qPCR检测HOTAIR的表达。(D) 大鼠心肌梗死后(0、30、60、120和180 min),采用RT-qPCR检测心肌组织HOTAIR的表达*与对照组相比,P<0.05、**P<0.01和***P<0.001。心肌缺血;lncRNA,长非编码RNA;RT-qPCR;逆转录定量PCR;HOTAIR,HOX转录物反义基因间RNA。
图2。
图2。
HOTAIR禁止H2O(运行)2-诱导心肌细胞凋亡。(A) 将HOTAIR过表达质粒和对照质粒转染H9c2细胞48 h,用逆转录定量PCR检测HOTAIR表达水平。(B) 将HOTAIR过表达质粒和对照质粒转染H9c2细胞48 h,用h2O(运行)2持续12 h,并使用细胞计数试剂盒-8检测细胞活力。(C) 将HOTAIR过表达质粒和对照质粒转染H9c2细胞48 h,用h2O(运行)2连续12h,流式细胞仪检测细胞凋亡比例。(D) 将HOTIAR过表达质粒和对照质粒转染H9c2细胞48小时,用h处理H9c2心肌细胞2O(运行)212 h后,用western blotting检测Bcl-2和Bax蛋白的表达*与矢量组或所示组相比,P<0.05、**P<0.01和***P<0.001。HOTAIR,HOX转录物反义基因间RNA。
图3。
图3。
HOTAIR下调miR-130a-3p表达水平。(A) 利用生物信息学分析预测HOTAIR与miR-130a-3p的结合位点。(B) 根据制造商的说明,将HOTAIR-WT或-MT报告质粒与scramb或miR-130a-3模拟物共转染48小时后,使用荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶活性。(C) 收集H9c2细胞,用含有Ago2或IgG抗体的磁珠进行裂解和培养,用RT-qPCR检测HOTAIR和miR-130a-3p的表达水平。(D) 将HOTAIR过表达质粒或对照质粒转染H9c2细胞,通过RT-qPCR检测miR-130a-3p的表达水平。(E) 将shHOTAIR或shControl转染到H9c2细胞中,并通过RT-qPCR检测miR-130a-3p的表达水平。(F) 用100µM H处理H9c2细胞2O(运行)2在不同时间点(0、3、6和12 h),采用RT-qPCR检测miR-130a-3p的表达。(G) 心肌梗死后(0、30、60、120和180分钟),用RT-qPCR检测心肌组织中miR-130a-3p的表达*与对照组相比,P<0.05、**P<0.01和***P<0.001。心肌缺血;RT-qPCR、逆转录定量PCR;Ago2,Argonaute 2;IgG、免疫球蛋白G;miR,microRNA;HOTAIR,HOX转录物反义基因间RNA;WT,野生型;MT,突变体;sh-,短发夹RNA;NC,阴性对照。
图4。
图4。
HOTAIR下调miR-130a-3p表达并降低H2O(运行)2-诱导H9c2细胞凋亡。(A) 按照制造商的指示,将扰码或miR-130a-3p模拟物转染到H9c2细胞中。转染48 h后,通过逆转录定量PCR检测miR-130a-3p的表达水平。(B) 使用细胞计数试剂盒-8检测细胞活力的变化。(C) 流式细胞仪检测细胞凋亡比例。(D) western blotting检测Bcl-2和Bax蛋白的表达*与NC-miRNA或所示相比,P<0.05、**P<0.01和***P<0.001。miR/miRNA,microRNA;NC,阴性对照;HOTAIR,HOX转录物反义基因间RNA。
图5。
图5。
miR-130a-3p靶向MDM4的抑制并促进H2O(运行)2-诱导H9c2细胞凋亡。(A) 使用TargetScan预测MDM4和miR-130a-3p的结合位点。(B) 100µm H处理的H9c2细胞中MDM4的表达2O(运行)2在不同时间点(0、3、6和12h)进行western印迹检测。(C) 心肌梗死后(0、30、60、120和180min),用western blotting检测MDM4的表达。(D) 根据制造商的说明,分别将MDM4-WT或-MT报告质粒与craft或miR-130a-3p模拟物共转染48 h,然后通过荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素素酶活性。然后,用打乱和(E)miR-130a-3p模拟物处理H9c2细胞48 h,并用western blotting检测MDM4蛋白的表达。(F) miR-130a-3p抑制剂成功转染H9c2细胞48h,western blotting检测MDM4蛋白的表达。(H) 用MDM4过表达载体成功转染H9c2细胞。(一) 根据制造商的说明,将scramb或miR-130a-3p模拟物转染到含有MDM4过表达质粒和对照质粒的H9c2细胞中。用H处理后2O(运行)2在12小时内,使用细胞计数试剂盒-8检测细胞活力的变化。(J) 通过流式细胞术评估细胞凋亡率。(K) Western blotting检测MDM4、Bcl-2和Bax蛋白的表达**与NC-miRNA或所示相比,P<0.01和***P<0.001。MDM4,鼠标双分4;miR/miRNA,microRNA;心肌缺血;WT,野生型;NC,阴性对照;MT,突变型。
图6。
图6。
HOTAIR禁止H2O(运行)2-通过miR-130a-3p/MDM4轴诱导H9c2细胞凋亡。(A) 根据制造商的说明,将带有miR-130a-3p模拟物和HOTAIR的MDM4-WT或-MT报告质粒共转染48小时后,使用荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶活性。(B) 将HOTAIR过表达质粒或对照质粒转染到H9c2细胞中,并通过蛋白质印迹检测MDM4的表达。(C) shHOTAIR或shControl转染H9c2细胞,western blotting检测MDM4表达。(D) 根据制造商的说明,用HOTAIR和对照质粒将扰码或miR-130a-3p模拟物转染到H9c2细胞中。用H处理H9c2心肌细胞2O(运行)212 h,western blotting检测MDM4蛋白表达。(E) 用shHOTAIR或shControl将Scramble或miR-130a-3p抑制剂转染到H9c2细胞中,根据制造商的说明,用H2O(运行)212 h,western blotting检测MDM4蛋白表达。(F) 将shMDM4或shControl转染H9C2细胞48小时后,用western blotting检测MDM4蛋白的表达。(G) 根据制造商的说明,将HOTAIR及其对照质粒与shHOTAIR或shControl共同转染到H9c2细胞中,用H2O(运行)212 h后,用细胞计数试剂盒-8检测细胞活力。(H) 流式细胞术检测细胞凋亡率。(一) western blotting检测MDM4、Bcl-2和Bax蛋白的表达水平**P<0.01和***P<0.001。MDM4,小鼠双分钟4;HOTAIR,HOX转录物反义基因间RNA;WT,野生型;miR,microRNA;sh-,短发夹RNA;MT,突变型。

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    1. Muñoz D、Uzoije P、Reynolds C、Miller R、Walkley D、Pappalardo S、Tousey P、Munro H、Gonzales H、Song W等,《在服务不足人群中预防心血管疾病的多肽》。《新英格兰医学杂志》2019;381:1114–1123. doi:10.1056/NEJMoa1815359。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
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    1. Yan K,An T,Zhai M,Huang Y,Wang Q,Wang Y,Zhang R,Wang T,Liu J,ZhangY,等。线粒体miR-762通过损伤ND2调节细胞凋亡和心肌梗死。细胞死亡疾病。2019;10:500. doi:10.1038/s41419-019-1734-7。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
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    1. Engreitz JM、Ollikainen N、Guttman M.Long非编码RNA:控制核结构和基因表达的空间放大器。Nat Rev Mol细胞生物学。2016;17:756–770。doi:10.1038/nrm.2016.126。-内政部-公共医学