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.2021年2月；23(2):130.
doi:10.3892/mmr.2020.11769。 Epub 2020年12月14日。

miR‑182‑5p通过调节BNIP3的表达促进鼻咽癌的放射抗性

魏赫 1, 金红燕 1, 刘谦（音） 1, 孙全新 2
附属公司

miR‑182‑5p通过调节BNIP3的表达促进鼻咽癌的放射抗性

魏赫等。 分子医学代表. 2021年2月.

勘误表in

摘要

放射抗性是限制鼻咽癌治疗成功的主要障碍。据报道，microRNA（miRNA/miR）‑182‑5p会影响癌细胞对辐射的敏感性；然而，尚未评估miR‑182‑5p在NPC中的作用。本研究的目的是研究miR‑182‑5p对鼻咽癌细胞放射抗性的作用。利用生物信息学分析鉴定了参与鼻咽癌放射抗性的关键mRNA和miRNA。本研究中使用的两种细胞系是5‑8F细胞（放射敏感性）和5‑8 F‑R细胞（放射抗性）。使用双荧光素酶报告子分析系统验证BCL2/腺病毒E1B 19 kDa蛋白相互作用蛋白3（BNIP3）mRNA和miR‑182‑5p之间的结合。采用逆转录定量PCR和western blotting检测RNA和蛋白质表达水平。为了深入了解BNIP3/miR‑182‑5p轴对鼻咽癌放射抗性的影响，进行了细胞计数试剂盒‑8、伤口愈合、Transwell侵袭和集落形成分析以及流式细胞术分析。结果显示，miR-182-5p和BNIP3在5-8F-R细胞中分别上调和下调。BNIP3也被证实是miR‑182‑5p的靶点，而miR−182−5p逆转了BNIP3对5‑8F‑R细胞的抑制作用。细胞实验表明，上调BNIP3不仅抑制细胞增殖、活力、侵袭和迁移，而且促进5‑8F‑R细胞的凋亡。然而，由于miR‑182‑5p同时上调，BNIP3的作用减弱。因此，通过下调BNIP3，miR‑182‑5p有助于NPC细胞的抗辐射性。

关键词：微小RNA‑182‑5p；BCL2/腺病毒E1B 19-kDa蛋白‑相互作用蛋白3；鼻咽癌；抗辐射性。

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数字

图1。
图1。
BNIP3在抗辐射NPC细胞中表达下调。（A） 在GSE48503数据集中，在耐辐射的NPC样本和对辐射敏感的NPC样本之间共鉴定出53个显著的DEG。对DEG进行富集分析。“Foxo信号通路”被证明是与BNIP3、CCNG2和HOMER2相关的关键通路。（B） 使用Kaplan-Meier绘图仪分析基于CCNG2、BNIP3和HOMER2表达、按表达分层的患者5年生存率。（C） 将5-8F-R和5-8F细胞暴露于不同剂量的IR，并测定细胞活力。（D） IR后在5-8F-R细胞和5-8F细胞中检测到BNIP3 mRNA的表达*P<0.05，**P<0.001 vs.0 h.DEG，差异表达基因；红外辐射；鼻咽癌；BNIP3、BCL2/腺病毒E1B 19kDa蛋白相互作用蛋白3；CCNG2，细胞周期蛋白G2；HOMER2，homer蛋白同源物2。
图2。
图2。
BNIP3通过影响细胞的存活、增殖和迁移来降低鼻咽癌细胞的放射抗性。（A） 在5-8F和5-8F-R细胞中检测si-BNIP3和BNIP3 OE质粒的转染效率。（B） 在转染si-BNIP3或BNIP3-OE质粒的5-8F和5-8F-R细胞中检测BNIP3的蛋白表达水平。（C） 将转染si-BNIP3或BNIP3 OE质粒的5-8F-R和5-8F细胞暴露于IR，并在指定剂量下测量细胞活力。（D） 用集落形成试验评估经4Gy IR处理的转染5-8F和5-8F-R细胞的集落形成能力。（E）用伤口愈合试验评估经4 Gy IR治疗的转染的5-8F细胞和5-8F-R细胞的迁移能力。*P<0.05，**P<0.001 vs.NC。BNIP3，BCL2/腺病毒E1B 19kDa蛋白相互作用蛋白3；红外辐射；OE，过度表达；si-，小干扰RNA；红外辐射；NC，阴性对照。
图3。
图3。
BNIP3通过改变侵袭和凋亡降低鼻咽癌细胞的放射抗性。（A） 使用Transwell侵袭试验来测量用4Gy IR处理的转染的5-8F和5-8F-R细胞的侵袭。（B）使用流式细胞术来检测用4Gy IR处理后转染的5-8F和5-8F-R细胞的细胞凋亡率。使用蛋白质印迹来测量（C）经4Gy IR处理的5-8F和5-8F-R细胞中的侵袭相关蛋白和（D）凋亡相关蛋白。*P<0.05，**P<0.001 vs.NC.BNIP3，BCL2/腺病毒E1B 19kDa蛋白相互作用蛋白3；NC，阴性对照；红外辐射；si-，小干扰RNA；OE，过度表达。
图4。
图4。
BNIP3是miR-182-5p的靶基因，其表达被miR-182-5 p降低。（A） 使用TargetScan预测BNIP3和miR-182-5p之间的结合位点。（B） 进行双核糖核酸酶报告分析以验证BNIP3和miR-182-5p之间的结合**与WT+NC组相比，P<0.001。（C） miR-182-5p抑制剂或模拟物在5-8F和5-8F-R细胞中的转染效率。（D） 转染miR-182-5p抑制剂或模拟物的5-8F和5-8F-R细胞中BNIP3蛋白表达水平*与NC.BNIP3、BCL2/腺病毒E1B19kDa蛋白相互作用蛋白3相比，P<0.05，**P<0.001；WT，野生型；MUT，突变体；NC，阴性对照；miRNA/miR，microRNA；UTR，未翻译区域。
图5。
图5。
miR-182-5p逆转BNIP3对鼻咽癌细胞放射抗性的影响。（A） 在指定剂量的IR处理后，测量转染的5-8F和5-8F-R细胞的细胞活力。（B） 进行伤口愈合试验，以评估经4Gy IR处理的5-8F和5-8F-R细胞的迁移能力。*P<0.05，**P<0.001 vs.NC；##5-8F细胞与si-BNIP3组相比P<0.001；$$5-8F-R细胞与BNIP3 OE组相比P<0.001。BNIP3、BCL2/腺病毒E1B 19kDa蛋白相互作用蛋白3；NC，阴性对照；miRNA/miR，microRNA；si-，小干扰RNA；OE，过度表达；红外，辐射。
图6。
图6。
miR-182-5p通过影响细胞侵袭和凋亡逆转BNIP3对鼻咽癌细胞放射抗性的影响。（A） 采用流式细胞术检测经4Gy IR处理的5-8F和5-8F-R细胞的凋亡情况用4Gy IR治疗后，评估5-8F和5-8F-R细胞中的凋亡相关蛋白。*P<0.05，**P<0.001 vs.NC；##5-8F细胞与si-BNIP3组相比P<0.001；$$5-8F-R细胞与BNIP3 OE组相比P<0.001。BNIP3、BCL2/腺病毒E1B 19kDa蛋白相互作用蛋白3；NC，阴性对照；miRNA/miR，microRNA；si-，小干扰RNA；OE，过度表达；IR、辐射。
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