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.2021年2月;23(2):140.
doi:10.3892/mmr.20.11779。 Epub 2020年12月14日。

丝胶蛋白通过PI3K/Akt途径抑制三阴性乳腺癌MDA‑MB‑468细胞增殖

附属公司

丝胶蛋白通过PI3K/Akt途径抑制三阴性乳腺癌MDA‑MB‑468细胞增殖

林牛等。 分子医学代表. 2021年2月.

摘要

三阴性乳腺癌(TNBC)是乳腺癌的一种亚型,其特点是组织学侵袭性强,预后差,临床治疗选择有限。在本研究中,采用MTT法、集落形成法和Ki67免疫细胞化学染色研究了丝胶作为抗癌药物对TNBC细胞增殖的影响。流式细胞术结果显示丝胶蛋白诱导G0/G公司1细胞周期阻滞,促进细胞凋亡。通过western blot分析检测细胞周期和凋亡相关蛋白。免疫细胞化学染色证实P21转位进入细胞核。此外,根据基因表达综合数据库,TNBC中有几个通路显著富集,其中最显著的通路是PI3K/Akt信号通路。在TNBC MDA‑MB‑468细胞中,丝胶抑制PI3K/Akt途径。所有这些发现表明,丝胶在抑制TNBC细胞增殖、诱导细胞周期阻滞和促进细胞凋亡方面起着关键作用。结果表明,潜在的分子机制至少部分是通过下调PI3K/Akt信号通路实现的。

关键词:丝胶;MDA‑MB‑468;细胞增殖;PI3K/Akt信号通路;三阴性乳腺癌。

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数字

图1。
图1。
丝胶抑制TNBC细胞增殖。用指定浓度的丝胶处理TNBC(A)MDA-MB-468细胞和(B)MDA-MB-453细胞,(C)非TNBC MCF-7细胞和(D)正常乳腺上皮MCF-10A细胞。由于使用-log,未显示0 mg/ml浓度10比例尺。&P<0.05。(E) 对指定组进行菌落形成分析。(F) 克隆数的定量直方图。(G) 丝胶处理后MDA-MB-468细胞Ki67的代表性免疫细胞化学染色。放大倍数,×100或×400。(H) 免疫细胞化学染色定量分析*与0 mg/ml组相比,P<0.05;#与2 mg/ml组相比,P<0.05;$与4mg/ml组相比,P<0.05。TNBC,三阴性乳腺癌。
图2。
图2。
丝氨酸蛋白酶诱导细胞周期阻滞0/G公司1MDA-MB-468细胞的相。(A) 用丝胶0、2、4和8mg/ml处理MDA-MB-468细胞24小时,并通过流式细胞术评估细胞周期。(B) 流式细胞术分析的定量。(C) G的表达水平1western blot分析检测MDA-MB-468细胞中的相相关蛋白。(D) western blot分析结果的半定量分析。(E) P21免疫细胞化学染色。放大倍数,×100或×400。用8 mg/ml丝胶处理细胞,并与0 mg/ml组进行比较分析。(F) 免疫细胞化学染色定量分析*与0 mg/ml组相比,P<0.05;#与2 mg/ml组相比,P<0.05;$与4mg/ml组相比,P<0.05。E2F3、E2F转录因子3。
图3。
图3。
丝胶蛋白促进MDA-MB-468细胞凋亡。(A) 用指定浓度的丝胶处理细胞,用流式细胞仪检测细胞凋亡。(B) 流式细胞术结果的定量分析。(C) 通过western blot分析测定凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2和Cyto-C)的表达水平。(D) western blot分析结果的半定量分析*与0 mg/ml组相比,P<0.05;#与2 mg/ml组相比,P<0.05;$与4mg/ml组相比,P<0.05。细胞C,细胞色素c(c).
图4。
图4。
基于生物信息学分析,TNBC中PI3K/Akt通路失调。(A) 前100个差异表达基因的热图。(B) 基因本体功能和京都基因百科全书以及差异表达基因的基因组途径富集分析。(C) 比较正常乳腺组织数据集和TNBC组织数据集的基因集富集分析。(D) PI3K/Akt通路中30个差异表达基因表达水平的可视化*与正常乳腺组织数据集相比,P<0.05。TNBC,三阴性乳腺癌;FDR,错误发现率;NES,归一化富集分数;标称标称值;BP,生物过程;CC,细胞成分;MF,分子功能。
图5。
图5。
富含PI3K/Akt通路的30个差异表达基因的Kaplan-Meier总体生存曲线。
图6。
图6。
根据《京都基因和基因组百科全书》分析,正常乳腺组织和三阴性乳腺癌组织中参与PI3K/Akt信号通路的差异表达基因。Kanehisa Laboratories授予版权许可。
图7。
图7。
丝胶抑制PI3K/Akt信号通路。(A) 通过western blot分析PI3K/Akt途径蛋白。(B) 蛋白质印迹分析结果的半定量分析*与0 mg/ml组相比,P<0.05;#与2 mg/ml组相比,P<0.05;$与4mg/ml组相比,P<0.05。用0或8 mg/ml丝胶处理MDA-MB-468细胞24 h,然后用10µM SC79处理2 h。用(C)MTT试验、(D)集落形成试验和(F)免疫细胞化学染色检测细胞增殖。放大倍数,×100或×400。(E) 克隆数量的定量分析。(G) 免疫细胞化学染色定量分析*与0 mg/ml组相比,P<0.05;#与8 mg/ml组相比,P<0.05。热休克蛋白90;p-,磷酸化。

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引用人

工具书类

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